异位联合过表达Atoh1和Ikzf2再生耳蜗外毛细胞及其应用制造技术

本发明专利技术提供了异位联合过表达Atoh1和Ikzf2再生耳蜗外毛细胞及其应用。具体地，本发明专利技术提供了一种可用于再生耳蜗外毛细胞的活性成分组合及其用途，所述活性成分组合包含Ikzf2蛋白和Atoh1蛋白，将所述活性成分组合施用于具有与耳蜗外毛细胞(OHC)变性和/或损伤相关的听力受损的受试者后，可通过再生OHC样细胞缓解听力受损，为临床上治疗听力受损提供了新方法。了新方法。

Ectopic combined overexpression of atoh1 and ikzf2 to regenerate cochlear outer hair cells and its application

【技术实现步骤摘要】
异位联合过表达Atoh1和Ikzf2再生耳蜗外毛细胞及其应用


[0001]本专利技术涉及生物制剂和生物
，尤其涉及Atoh1和Ikzf2联合过表达再生耳蜗外毛细胞及其应用。

技术介绍

[0002]哺乳动物耳蜗外毛细胞(OHC)对听力至关重要，但OHC对各种耳毒性药物、噪音和衰老非常敏感。OHC变性或损伤导致严重的听力障碍。在以往的体内研究中，虽然也有通过OHC再生以治疗听力损伤的先例，但其效率较低，且再生的新OHC通常无功能。
[0003]因此，研究本领域亟待开发一种在体内OHC变性或损伤的情况下再生OHC以治疗听力损伤的方法。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的就是提供一种能够有效治疗听力受损的基因治疗方法和治疗药物。
[0005]本专利技术的第一方面，提供了一种活性成分组合的用途，所述活性成分用于制备一制剂或药物，所述的制剂或药物用于：(i)再生耳蜗外毛细胞；和/或(ii)治疗或预防听力受损；
[0006]其中，所述的活性成分组合包括：
[0007](a)Ikzf2蛋白、其编码序列、或其促进剂、或其组合；和
[0008](b)Atoh1蛋白、其编码序列、或其促进剂、或其组合。
[0009]在另一优选例中，所述Ikzf2蛋白具有如SEQ ID NO.:1所示的氨基酸序列。
[0010]在另一优选例中，所述Atoh1蛋白具有如SEQ ID NO.:2所示的氨基酸序列。
[0011]在另一优选例中，所述的听力受损为与耳蜗外毛细胞(OHC)变性和/或损伤相关的听力受损。
[0012]在另一优选例中，所述的耳蜗外毛细胞为人或非人哺乳动物的耳蜗外毛细胞。
[0013]本专利技术的第二方面，提供了一种可用于再生耳蜗外毛细胞的活性成分组合，包括：
[0014](a)Ikzf2蛋白、其编码序列、或其促进剂、或其组合；和
[0015](b)Atoh1蛋白、其编码序列、或其促进剂、或其组合。
[0016]在另一优选例中，所述Ikzf2蛋白具有如SEQ ID NO.:1所示的氨基酸序列。
[0017]在另一优选例中，所述Atoh1蛋白具有如SEQ ID NO.:2所示的氨基酸序列。
[0018]本专利技术的第三方面，提供了一种表达载体，所述的表达载体包括：
[0019](Z1)第一表达载体，所述第一表达载体含有用于表达Ikzf2蛋白的第一表达盒；
[0020](Z1)第二表达载体，所述第二表达载体含有用于表达Atoh1蛋白的第二表达盒；
[0021]其中，所述的第一表达载体和第二表达载体是同一载体或不同的载体。
[0022]在另一优选例中，所述的表达载体包括病毒载体。
[0023]在另一优选例中，所述的表达载体选自下组：质粒、病毒载体。
[0024]在另一优选例中，所述的表达载体选自下组：慢病毒载体、腺病毒载体、腺相关病
毒载体(AAV)、或其组合。
[0025]在另一优选例中，所述的表达载体为腺相关病毒AAV载体。
[0026]在另一优选例中，所述的AAV载体为AAV7m8、AAV
‑
anc80、或AAV
‑
ie。
[0027]在另一优选例中，所述表达载体用于表达Ikzf2蛋白和/或Atoh1蛋白。
[0028]在另一优选例中，所述表达载体含有编码Ikzf2蛋白和/或Atoh1蛋白的核苷酸序列。
[0029]在另一优选例中，所述编码Ikzf2蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.:3所示。
[0030]在另一优选例中，所述编码Atoh1蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.:4所示。
[0031]在另一优选例中，所述的第一表达盒从从5
’
端
‑3’
端具有式I结构：
[0032]Z0
‑
Z1
‑
Z2
ꢀꢀꢀ
(I)
[0033]式中，
[0034]各
“‑”
独立地为化学键或核苷酸连接序列；
[0035]Z0为无、或5
’
UTR序列；
[0036]Z1为编码Ikzf2蛋白的核苷酸序列；和
[0037]Z2为无、或3
’
UTR序列。
[0038]在另一优选例中，所述的第二表达盒从从5
’
端
‑3’
端具有式II结构：
[0039]Z0
’‑
Z1
’‑
Z2
’ꢀꢀꢀ
(II)
[0040]式中，
[0041]各
“‑”
独立地为化学键或核苷酸连接序列；
[0042]Z0
’
为无、或5
’
UTR序列；
[0043]Z1
’
为编码Atoh1蛋白的核苷酸序列；和
[0044]Z2
’
为无、或3
’
UTR序列。
[0045]在另一优选例中，各个核苷酸连接序列的长度为1
‑
30nt，较佳地1
‑
15nt，更佳地3
‑
6nt。
[0046]在另一优选例中，所述的核苷酸连接序列来源于限制性内切酶酶切形成的核苷酸接头序列。
[0047]本专利技术的第四方面，提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞含有本专利技术第三方面所述的表达载体。
[0048]在另一优选例中，所述宿主细胞为哺乳动物细胞，所述哺乳动物包括人和非人哺乳动物。
[0049]在另一优选例中，所述宿主细胞选自下组：耳蜗支持细胞(SC)，包括柱状细胞(PC)、Deiters细胞(DC)或其组合；较佳地，所述宿主细胞为柱状细胞(PC)。
[0050]本专利技术的第五方面，提供了一种药物制剂，所述的制剂含有(a)如本专利技术第二方面所述的活性成分组合，或本专利技术第三方面所述的载体，或如本专利技术第四方面所述的细胞，以及(b)药学上可接受的载体或赋形剂。
[0051]在另一优选例中，所述药物制剂的剂型选自下组：冻干制剂、液体制剂、或其组合。
[0052]在另一优选例中，所述的载体选自下组：慢病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、或其组合；较佳地，所述载体为AAV载体；更佳地为AAV7m8、AAV
‑
anc80、或AAV
‑
ie。
[0053]在另一优选例中，所述药物制剂中载体的含量为1x10
12
‑
1x10
14
个病毒/毫升，较佳
地1x10
13
个病毒/毫升。
[0054]在另一优选例中，所述药物制剂的治疗有效量为1x109‑
1x10
11
个病毒，较佳地1x10
10
个病毒。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种活性成分组合的用途，其特征在于，用于制备一制剂或药物，所述的制剂或药物用于：(i)再生耳蜗外毛细胞；和/或(ii)治疗或预防听力受损；其中，所述的活性成分组合包括：(a)Ikzf2蛋白、其编码序列、或其促进剂、或其组合；和(b)Atoh1蛋白、其编码序列、或其促进剂、或其组合。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的听力受损为与耳蜗外毛细胞(OHC)变性和/或损伤相关的听力受损。3.一种可用于再生耳蜗外毛细胞的活性成分组合，其特征在于，包括：(a)Ikzf2蛋白、其编码序列、或其促进剂、或其组合；和(b)Atoh1蛋白、其编码序列、或其促进剂、或其组合。4.一种表达载体，其特征在于，所述的表达载体包括：(Z1)第一表达载体，所述第一表达载体含有用于表达Ikzf2蛋白的第一表达盒；(Z1)第二表达载体，所述第二表达载体含有用于表达Atoh1蛋白的第二表达盒；其中，所述的第一表达载体和第二表达载体是同一载体或不同的载体。5.一种宿主细胞，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘志勇，孙素红，李书亭，罗正南，任旻蕙，贺顺姬，王广琴，
申请(专利权)人：中国科学院脑科学与智能技术卓越创新中心，
类型：发明
国别省市：