一种用于含有碳碳双键的化合物的质谱分析方法技术

技术编号:34110559 阅读:46 留言:0更新日期:2022-07-12 01:17
本发明专利技术公开了一种用于含有碳碳双键的化合物的质谱分析方法,包括如下步骤:a)使轻、重质同位素标记试剂与目标分析物中的含有碳碳双键的化合物进行标记反应;b)对标记反应后的产物进行后处理后再进行质谱分析;其中的轻质同位素标记试剂为[d0]

【技术实现步骤摘要】
一种用于含有碳碳双键的化合物的质谱分析方法


[0001]本专利技术是涉及一种用于含有碳碳双键的化合物的质谱分析方法,属于质谱分析


技术介绍

[0002]生物标志物(Biomarker)是指一种具有客观检测和评价特性,可作为正常生物学过程、病理过程或治疗干预药理学反应的指示因子,它具有广泛用途,不仅可从分子水平探讨发病机制,而且在准确、敏感地评价早期、低水平的损害方面也有着独特优势,可为早期预警、预后疗效分析、疾病精准的分期分型提供依据等,在很大程度上可为临床医生提供辅助诊断依据。因此,若能实现快速准确地对各类生物标志物进行定性定量分析将显得尤为重要。
[0003]另外,游离不饱和脂肪酸是生物体内的一类很重要的能量代谢产物和信息分子,它不仅作为一类重要的主要储能物质脂质的组成部分,还能作为一类调控细胞代谢的信号分子。这类化合物在过去的研究中已被证明与多种疾病有着直接或间接关系,其中游离不饱和脂肪酸的含量差异在癌症组织和癌旁组织中更是差异显著。因此,研究一种能对生物样本中游离不饱和脂肪酸进行快速准确地定性定量分析方法,将对研究生理变化、疾病诊断以及预后监控起着非常重要作用。但现代检测分析方法研究表明,体内游离脂肪酸含量仅占脂肪酸总含量的5%,而其中游离不饱和脂肪酸含量则相对更低。同时,在分析测定的过程中,为了防止体内脂质水解生成游离不饱和脂肪酸,对组织预处理和检测都有着较高要求。
[0004]目前,临床最常用的且能够准确地检测游离不饱和脂肪酸的方法为酶法,但这种酶法需要针对每一组分制备特异性的标记物和抗体,存在成本较高且耗时耗力的缺陷。另外,实验室常用的方法是将游离不饱和脂肪酸转化为脂肪酸甲酯,然后进行GC

MS检测,但由于甲基化试剂的反应效率较低且反应条件较为苛刻,以致该方法使用起来并不理想。
[0005]因此,研究一种用于含有碳碳双键的化合物的质谱分析方法,尤其是能实现快速、高效、准确的质谱分析方法,将对研究游离不饱和脂肪酸的生物学意义有着重大帮助,并可为高通量研究含有碳碳双键的小分子化合物和分析复杂基质样本中含有碳碳双键的小分子化合物的质谱分析提供一种便捷途径。

技术实现思路

[0006]针对现有技术存在的上述问题和需求,本专利技术的目的是提供一种能实现快速、高效、准确的用于含有碳碳双键的化合物的质谱分析方法。
[0007]为实现上述专利技术目的,本专利技术采用如下技术方案:
[0008]一种用于含有碳碳双键的化合物的质谱分析方法,包括如下步骤:
[0009]a)使轻、重质同位素标记试剂与目标分析物中的含有碳碳双键的化合物进行标记反应;
[0010]b)对标记反应后的产物进行后处理后再进行质谱分析;
[0011]其中:轻质同位素标记试剂为[d0]‑
双(吡啶)四氟硼化碘,重质同位素标记试剂为[d
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]‑
双(吡啶)四氟硼化碘,所述的[d0]‑
双(吡啶)四氟硼化碘和[d
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]‑
双(吡啶)四氟硼化碘的化学结构式分别如下所示:
[0012][0013]一种优选方案,所述的含有碳碳双键的化合物为含有碳碳双键的脂肪酸、含有碳碳双键的脂肪醇、含有碳碳双键的脂肪酸酯或含有碳碳双键的萜类化合物中的任意一种或几种。
[0014]一种优选方案,步骤a)中,所述的标记反应选用二氯甲烷作为反应溶剂。
[0015]一种优选方案,步骤a)中,所述的标记反应是在摇床上于室温下反应1~3小时。
[0016]一种优选方案,步骤a)中,所述的标记反应采用硫代硫酸钠水溶液进行淬灭。
[0017]一种优选方案,步骤b)中,对标记反应后的产物先进行氮气吹干,然后用含0.1wt%甲酸的甲醇溶液复溶,再进行质谱分析。
[0018]一种优选方案,所述的质谱分析为LC

MS/MS串联质谱分析。
[0019]进一步优选方案,所述的LC

MS/MS串联质谱分析的谱图采集均采用正离子模式。
[0020]一种实施方案,使被轻、重标记后的目标分析物在碰撞池中于一定碰撞能量下进行碎裂,并采用MRM模式分别选取m/z 206及m/z 211作为定量离子进行MRM定量分析。
[0021]一种优选方案,所述的碰撞能量为10eV~25eV。
[0022]相较于现有技术,本专利技术的有益技术效果在于:
[0023]实验证明:本专利技术通过创造性地选用[d0]‑
双(吡啶)四氟硼化碘为轻质同位素标记试剂及[d
10
]‑
双(吡啶)四氟硼化碘为重质同位素标记试剂,以用于特异性地标记待测物的碳碳双键,不仅在一定程度上降低了质谱分析含有碳碳双键的化合物的复杂性,显著提高了对待测物的质谱识别性,而且所述的同位素标记试剂具有很好的底物兼容性和官能团耐受性,可以和含碳碳双键的醇、羧酸、酯等多种底物进行标记反应,且均具有较好的标记效果,普适性强,适用范围广泛;
[0024]并且,所述标记反应条件简单温和,室温条件且不需无水无氧操作,可以在各种场合被广泛应用;
[0025]另外,本专利技术所述方法既可适用质谱直接分析,也可适用液相色谱与质谱联用分析,可使更多低丰度的待测物被有效地检测出来,大大提高分析的选择性和实用性;
[0026]尤其是,采用本专利技术方法,可使定量标准曲线的线性相关系数R2均大于0.999,线性范围跨越两个数量级,可以针对不同样本进行分析,且截距b相较斜率k小一个数量级以上,表明所述的定量方法受基质等因素干扰较小,可以用于复杂体系中含有碳碳双键的化
合物的定量分析;
[0027]因此,本专利技术相对于现有技术,不仅产生了显著性进步,而且产生了出乎意料的技术效果,对实现复杂样本中的含有碳碳双键的化合物的快速、高效、准确的质谱分析具有重要价值和实用性。
附图说明
[0028]图1是采用本专利技术实施例1所述的质谱分析方法分析棕榈油酸所获得的质谱图;
[0029]图2是采用本专利技术实施例1所述的质谱分析方法分析顺式

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十七烯酸所获得的质谱图;
[0030]图3是采用本专利技术实施例1所述的质谱分析方法分析异油酸所获得的质谱图;
[0031]图4是采用本专利技术实施例1所述的质谱分析方法分析油酸所获得的质谱图;
[0032]图5是采用本专利技术实施例1所述的质谱分析方法分析亚油酸所获得的质谱图;
[0033]图6是采用本专利技术实施例1所述的质谱分析方法分析α

亚麻酸所获得的质谱图;
[0034]图7是采用本专利技术实施例1所述的质谱分析方法分析花生一烯酸所获得的质谱图;
[0035]图8是采用本专利技术实施例1所述的质谱分析方法分析芥酸所获得的质谱图;
[0036]图9是采用本专利技术实施例1所述的质谱分析方法分析神经酸所获得的质谱图;
[0037]图10是采本文档来自技高网
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于含有碳碳双键的化合物的质谱分析方法,包括如下步骤:a)使轻、重质同位素标记试剂与目标分析物中的含有碳碳双键的化合物进行标记反应;b)对标记反应后的产物进行后处理后再进行质谱分析;其特征在于:其中的轻质同位素标记试剂为[d0]

双(吡啶)四氟硼化碘,重质同位素标记试剂为[d
10
]

双(吡啶)四氟硼化碘,所述的[d0]

双(吡啶)四氟硼化碘和[d
10
]

双(吡啶)四氟硼化碘的化学结构式分别如下所示:2.根据权利要求1所述的用于含有碳碳双键的化合物的质谱分析方法,其特征在于:所述的含有碳碳双键的化合物为含有碳碳双键的脂肪酸、含有碳碳双键的脂肪醇、含有碳碳双键的脂肪酸酯或含有碳碳双键的萜类化合物中的任意一种或几种。3.根据权利要求1所述的用于含有碳碳双键的化合物的质谱分析方法,其特征在于:步骤a)中,所述的标记反应选用二氯甲烷作为反应溶剂。4.根据权利要求1所述的用于含有碳碳双键的化合物的质谱分析方法,其特征在于:步骤a)中,所述的标...

【专利技术属性】
技术研发人员:郭寅龙程颉曹宇奇李瑜玲高祯张立张菁
申请(专利权)人:中国科学院上海有机化学研究所
类型:发明
国别省市:

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