一种检测犬猫弓形虫抗体的试剂盒及阻断ELISA检测方法技术

本发明专利技术公开了一种检测犬猫弓形虫抗体的试剂盒及阻断ELISA检测方法，包括试剂盒本体，所述试剂盒本体内腔的上端和下端分别活动连接有第一活动板，所述第一活动板的顶部从左至右依次活动连接检测卡、吸液管样本瓶和存放瓶，所述存放瓶的内腔活动连接有取样棉签。本发明专利技术通过设置第一活动板，用于对检测卡、吸液管、样本瓶和存放瓶进行摆放，同时工作人员能够将第一活动板向试剂盒本体的外部拉动，从而有利于工作人员对检测卡、吸液管、样本瓶和存放瓶进行拿取使用，解决了现有技术难以快速有效的对弓形虫进行检测，且因检测设备昂贵，操作繁琐，从而降低了对弓形虫检测的效率，进而无法迅速抑制弓形虫传播和感染的问题。无法迅速抑制弓形虫传播和感染的问题。无法迅速抑制弓形虫传播和感染的问题。

【技术实现步骤摘要】
一种检测犬猫弓形虫抗体的试剂盒及阻断ELISA检测方法


[0001]本专利技术涉及检测犬猫弓形虫
，具体为一种检测犬猫弓形虫抗体的试剂盒及阻断ELISA检测方法。

技术介绍

[0002]弓形虫病是弓形虫引起的一种重要人兽共患寄生虫病，导致人及动物流产、畸胎、死胎，严重危害公共卫生安全和畜牧业生产，猫是弓形虫终末宿主，犬是弓形虫中间宿主，在弓形虫的传播与感染中起重要作用，弓形虫感染的诊断主要包括病原学、分子生物学及免疫学等方法，病原学方法费时、费力、敏感性低，分子生物学方法包括PCR、DNA探针及基因芯片等技术具有较高的敏感性和特异性，免疫学检测方法包括染色试验(DT)、间接荧光抗体试验(IFAT)、间接血凝试验(IHA)、直接凝集试验(DAT)、改良凝集实验(MAT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)，其中DT需要用活的虫体，存在生物安全风险；IFAT具有较高的敏感性和特异性，在检测犬猫弓形虫抗体时，现有技术难以快速有效的对弓形虫进行检测，且因检测设备昂贵，操作繁琐，从而降低了对弓形虫检测的效率，进而无法迅速抑制弓形虫的传播和感染。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供一种检测犬猫弓形虫抗体的试剂盒及阻断ELISA检测方法，具备快速检测的优点，解决了在检测犬猫弓形虫抗体时，现有技术难以快速有效的对弓形虫进行检测，且因检测设备昂贵，操作繁琐，从而降低了对弓形虫检测的效率，进而无法迅速抑制弓形虫的传播和感染的问题。
[0004]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种检测犬猫弓形虫抗体的试剂盒，包括试剂盒本体，所述试剂盒本体内腔的上端和下端分别活动连接有第一活动板，所述第一活动板的顶部从左至右依次活动连接检测卡、吸液管样本瓶和存放瓶，所述存放瓶的内腔活动连接有取样棉签，所述检测卡、吸液管样本瓶和存放瓶的底部均延伸至第一活动板的内腔，且与第一活动板的内腔活动连接，所述第二活动板的顶部活动连接有储液瓶，所述储液瓶的底部延伸至第二活动板的内腔且与第二活动板的内腔活动连接。
[0005]优选的，所述试剂盒本体的正面通过转轴活动连接有盒盖，所述试剂盒本体和第一活动板的顶部分别固定连接有固定块和插块。
[0006]优选的，所述插块的后侧延伸至固定块的内腔且与固定块的内腔活动连接，所述插块的顶部开设有限位槽。
[0007]优选的，所述固定块的顶部活动连接有活动杆，所述活动杆的底部贯穿至固定块的内腔并固定连接有限位块，所述限位块的底部固定连接有限位柱，所述限位柱的底部延伸至限位槽的内腔并与限位槽的内腔活动连接，所述活动杆的顶部固定连接有连接块，且连接块与活动杆配合。
[0008]优选的，所述储液瓶的内腔设置有检验液，且检验液包括：弓形虫重组抗原GRA7预
包被酶标板、样品稀释液、阳性参照血清、阴性参照血清、酶结合物、封闭液、洗涤液、显色液和终止液。
[0009]优选的，所述检测卡顶部的前侧和后侧均设置有通孔，且两个通孔分别为检测孔和显示孔。
[0010]优选的，其检测方法包括如下步骤：
[0011]A、首先将弓形虫重组抗原GRA7预包被酶标板，将其克隆入原核表达载体，构建重组质粒，经PCR、双酶切和序列测定鉴定分析，将构建完毕的重组质粒转化到宿主中，经IPTG诱导后，重组菌裂解，取上清，使用Ni
‑
NTA树脂纯化；
[0012]B、样品稀释液为pH值7.4的磷酸盐缓冲液；依次在700mL去离子水中溶解，以浓HCl调节溶液pH值至7.4，加去离子水定容至1000mL，高压后常温保存待用；
[0013]C、碳酸盐缓冲液，pH值9.6：称量2.93g的NaHCO3和1.95g的Na2CO3于250mL烧杯中，加去离子水定容至100mL，高压后常温保存待用；
[0014]D、封闭液(10％胎牛血清的PBST液)：1mL胎牛血清溶解于PBST液，定容至10mL，涤液(0.01mol/L，pH7.4的PBST液)：依次在800mL去离子水中溶解8g的NaCl、0.2g的KCl、3.63g的Na2HPO4
·
12H2O和0.24g的KH2PO4，以浓HCl调节溶液pH值至7.4，加入0.5mL的Tween
‑
20，加去离子水定容至1000mL，高压后常温保存待用；
[0015]E、终止液(2mol/LH2SO4)：浓硫酸22.2mL，去离子水177.8mL，将浓硫酸沿杯壁缓慢倒入水中，混匀，室温贮存待用；
[0016]F、加入5倍Ni
‑
NTA无菌去离子水，重悬树脂凝胶，待液体流净，再加入5倍Ni
‑
NTA结合缓冲液，待液体流净，纯化回收，将来源于细胞破碎产物的上清液加入纯化柱中，按5倍Ni
‑
NTA体积分五次加入，然后依次加入20倍Ni
‑
NTA体积结合缓冲液、12倍Ni
‑
NTA体积1:17稀释后的清洗缓冲液，弃去流穿液，流速控制在1mL/min；蛋白洗脱：分四次加入4倍Ni
‑
NTA体积洗脱缓冲液，收集洗脱液于EP管中，以此得到检验液，整个过程在低温环境下进行；
[0017]G、接着从第一活动板的顶部取下存放瓶，并将存放瓶内部的取样棉签取出，通过取样棉签采集猫狗的粪便，采集后的样本放置于样本瓶的内部，并加入稀释液，同时进行搅拌，搅拌过后进行沉淀，之后用取样棉签取猫狗眼鼻的分泌物，接着插入样本瓶的内部并将样本瓶的密封盖盖紧，将样本瓶放置与振动仪进行混匀，之后取出吸液管对样本瓶内部的混合液进行抽取，抽取完成后，通过样本瓶将混合液滴入检测卡顶部前端的检测孔，最后通过检测卡顶部后侧的显示孔对检测结果进行显示，当显示孔为两条检测线时则视为感染病毒，显示孔为一条检测线时则视为没有感染病毒。
[0018]优选的，所述弓形虫重组抗原GRA7预包被酶标板用包被液稀释至20μg/mL，包被96孔酶标板，每孔100μL，4℃过夜，用洗涤液清洗，加入封闭液，每孔100μL，温箱1h。
[0019]优选的，所述步骤F中的结合缓冲液为40mM咪唑溶液，清洗缓冲液为80mM咪唑溶液，洗脱缓冲液为1M咪唑溶液。
[0020]与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：
[0021]1、本专利技术通过设置第一活动板，用于对检测卡、吸液管、样本瓶和存放瓶进行摆放，同时工作人员能够将第一活动板向试剂盒本体的外部拉动，从而有利于工作人员对检测卡、吸液管、样本瓶和存放瓶进行拿取使用，通过设置检测卡，用于样本进行检测显示，并具备检测时间短，提高检测效率，且检测成本低的优点，通过设置吸液管，起到了对液体进
行吸取的效果，通过设置样本瓶，起到了将样本与液体进行混合的效果，解决了在检测犬猫弓形虫抗体时，现有技术难以快速有效的对弓形虫进行检测，且因检测设备昂贵，操作繁琐，从而降低了对弓形虫检测的效率，进而无法迅速抑制弓形虫的传播和感染的问题。
附图说明
[0022]图1为本发本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测犬猫弓形虫抗体的试剂盒，包括试剂盒本体(1)，其特征在于：所述试剂盒本体(1)内腔的上端和下端分别活动连接有第一活动板(2)，所述第一活动板(2)的顶部从左至右依次活动连接检测卡(4)、吸液管(5)样本瓶(6)和存放瓶(7)，所述存放瓶(7)的内腔活动连接有取样棉签(8)，所述检测卡(4)、吸液管(5)、样本瓶(6)和存放瓶(7)的底部均延伸至第一活动板(2)的内腔，且与第一活动板(2)的内腔活动连接，所述第二活动板(3)的顶部活动连接有储液瓶(9)，所述储液瓶(9)的底部延伸至第二活动板(3)的内腔且与第二活动板(3)的内腔活动连接。2.根据权利要求1所述的一种检测犬猫弓形虫抗体的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒本体(1)的正面通过转轴活动连接有盒盖(10)，所述试剂盒本体(1)和第一活动板(2)的顶部分别固定连接有固定块(11)和插块(12)。3.根据权利要求2所述的一种检测犬猫弓形虫抗体的试剂盒，其特征在于：所述插块(12)的后侧延伸至固定块(11)的内腔且与固定块(11)的内腔活动连接，所述插块(12)的顶部开设有限位槽(15)。4.根据权利要求2所述的一种检测犬猫弓形虫抗体的试剂盒，其特征在于：所述固定块(11)的顶部活动连接有活动杆(13)，所述活动杆(13)的底部贯穿至固定块(11)的内腔并固定连接有限位块(17)，所述限位块(17)的底部固定连接有限位柱(14)，所述限位柱(14)的底部延伸至限位槽(15)的内腔并与限位槽(15)的内腔活动连接，所述活动杆(13)的顶部固定连接有连接块(18)，且连接块(18)与活动杆(13)配合。5.根据权利要求1所述的一种检测犬猫弓形虫抗体的试剂盒，其特征在于：所述储液瓶(9)的内腔设置有检验液，且检验液包括：弓形虫重组抗原GRA7预包被酶标板、样品稀释液、阳性参照血清、阴性参照血清、酶结合物、封闭液、洗涤液、显色液和终止液。6.根据权利要求1所述的一种检测犬猫弓形虫抗体的试剂盒，其特征在于：所述检测卡(4)顶部的前侧和后侧均设置有通孔，且两个通孔分别为检测孔和显示孔。7.根据权利要求1
‑
6任意一项所述的一种检测犬猫弓形虫抗体的试剂盒的阻断ELISA检测方法，其特征在于：其检测方法包括如下步骤：A、首先将弓形虫重组抗原GRA7预包被酶标板，将其克隆入原核表达载体，构建重组质粒，经PCR、双酶切和序列测定鉴定分析，将构建完毕的重组质粒转化到宿主中，经IPTG诱导后，重组菌裂解，取上清，使用Ni
‑
NTA树脂纯化；B、样品稀释液为pH值7.4的磷酸盐缓冲液；依次在700mL去离子水中溶解，以浓HCl调节溶液pH值至7.4，加去离子水定容至1000mL，高压后常温保存待用；C、碳酸盐缓冲液，pH值9.6：称量...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈文华，王进，钟仁波，
申请(专利权)人：应节南京智能科技有限公司，
类型：发明
国别省市：