一种新型冠状病毒mRNA疫苗及其制备方法与应用技术

提供了一种新型冠状病毒mRNA疫苗及其制备方法与应用。本发明专利技术提供一种能编码目标多肽的mRNA分子，其中，所述的目标多肽包括SARS

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】一种新型冠状病毒mRNA疫苗及其制备方法与应用


[0001]本专利技术是关于一种mRNA疫苗及其制备方法与应用，具体是一种针对新型冠状病毒(包括原始株和/或突变株)的mRNA疫苗、其制备方法与相关应用。

技术介绍

[0002]mRNA疫苗技术可以作为快速灵活的技术平台，有效应对各种新兴病毒的威胁。因此mRNA疫苗被认为是对抗新型冠状病毒(SARS
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CoV
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2)最有潜力的一种疫苗。随着化学修饰mRNA和纳米脂质载体技术的发展和成熟，mRNA在多种病毒疫苗研发中的优势愈发凸显。
[0003]由于免疫反应的特异性，靶抗原表位序列(包括B细胞表位和T细胞表位)直接决定了免疫反应的种类。鉴于B细胞免疫和T细胞免疫都在SARS
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CoV
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2病毒的清除中不可或缺，尽可能去选择合适的免疫原性片段，是新型冠状病毒疫苗设计的关键一步。在设计针对SARS
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CoV
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2突变株的靶抗原时，需要考虑到有些抗原表位会诱导出非中和抗体，这类抗体不能起到有效的保护作用，反而有概率引起ADE效应，加重病毒的感染程度。因此在这种情况下，全长S蛋白能否继续作为疫苗抗原值得深入研究探讨。经过研究COVID
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19病人体内的血清发现S蛋白的NTD片段和RBD片段含有多个B细胞和T细胞有效表位，并能够引发强烈的保护性抗病毒免疫，这也进一步证实了设计新型冠状病毒疫苗时进行抗原表位分析的重要性。
[0004]WO2021159040A9公开了一种编码包含新型冠状病毒S蛋白NTD和RBD区域的mRNA疫苗，在氨基酸序列设计中，使用了甘氨酸
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丝氨酸连接子(glycine
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serine linker)对NTD和RBD区域进行连接。
[0005]另一方面，现已发现新型冠状病毒新型变异株，并且世界范围内的流行毒株发生了明显变化，其不同程度的免疫逃逸对现有新型冠状病毒疫苗和后续疫苗研发工作带来了挑战。

技术实现思路

[0006]本专利技术的一个目的在于提供一种针对新型冠状病毒的mRNA疫苗。
[0007]本专利技术的另一个目的在于提供针对新型冠状病毒的mRNA疫苗的制备方法。
[0008]本专利技术的另一个目的在于提供针对新型冠状病毒的mRNA疫苗的DNA模板。
[0009]本专利技术的另一个目的在于提供针对新型冠状病毒的mRNA疫苗的应用。
[0010]一方面，本专利技术提供了一种能编码目标多肽的mRNA分子，其中，所述的目标多肽包括SARS
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CoV
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2刺突蛋白S中NTD
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RBD天然结构域，所述NTD
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RBD天然结构域包括NTD片段与RBD片段，NTD片段与RBD片段之间以来源于S蛋白的天然氨基酸序列作为连接子连接。
[0011]根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术提供的mRNA分子，还编码NTD
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RBD天然结构域N端的信号肽。
[0012]根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术提供的mRNA分子编码的氨基酸序列从N端到C端依次包括信号肽、NTD片段、连接子、RBD片段。
ID NO:37、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:41或SEQ ID NO:42所示。
[0029]根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术提供的mRNA分子，经过1
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甲基假尿苷修饰。
[0030]根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术提供的mRNA分子，还包括5
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UTR序列和/或3
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UTR序列。
[0031]具体地，5
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UTR序列可包含或不包含Kozak序列。在本专利技术的一些优选实施方案中，所述5'
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UTR具有SEQ ID NO:51所示序列。
[0032]在本专利技术的一些优选实施方案中，3
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UTR序列具有SEQ ID NO:52所示序列。
[0033]根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术提供的mRNA分子，还经过3'加尾修饰和/或至少一个5'加帽修饰。
[0034]具体地，3'加尾修饰例如包含聚
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A尾，所述聚A尾可以是中间插入或不插入连接子的多聚腺苷酸。
[0035]具体地，至少一个5'加帽修饰的帽结构可选自Cap0、Cap1、ARCA、肌苷、N1
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甲基
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鸟苷、2'氟
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鸟苷、7
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脱氮
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鸟苷、8
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氧代
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鸟苷、2
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氨基
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鸟苷、LNA
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鸟苷或2
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叠氮基
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鸟苷。
[0036]根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术提供的mRNA分子，其是分离的mRNA；
[0037]根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术提供的mRNA分子，是经纯化的。所述的纯化包括但不限于经过层析、氯化锂或乙醇沉淀、离心柱、氯萃取、乙醇沉淀或凝胶纯化。
[0038]另一方面，本专利技术还提供了一种DNA分子，其编码本专利技术前述任意一种mRNA分子。
[0039]另一方面，本专利技术还提供了一种重组质粒，其含有本专利技术前述的DNA分子。
[0040]另一方面，本专利技术还提供了一种脂质纳米颗粒，其负载有本专利技术前述任意一种mRNA分子。
[0041]另一方面，本专利技术还提供了一种药物组合物，其包含：本专利技术前述任意一种mRNA分子，以及药学上可接受的赋形剂。所述的赋形剂可选自溶剂、水溶剂、非水溶剂、分散介质、稀释剂、分散剂、悬浮助剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂或乳化剂、防腐剂、脂质、类脂质(lipidoid)脂质体、脂质纳米颗粒、核
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壳纳米颗粒、聚合物、脂复合物(lipoplexe)肽、蛋白、细胞、透明质酸酶、及它们的混合物。
[0042]另一方面，本专利技术还提供了本专利技术所述的mRNA分子、所述的DNA分子、所述的重组质粒、所述的脂质纳米颗粒或所述的药物组合物在制备新型冠状病毒mRNA疫苗中的应用。
[0043]另一方面，本专利技术还提供了一种新型冠状病毒mRNA疫苗，其包含本专利技术所述的mRNA分子。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述的疫苗为脂质纳米颗粒剂型。
[0044]根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术所述的新型冠状病毒mRNA疫苗，其中，脂质纳米颗粒的粒径为50nm～200nm，优选为50nm～150nm。
[0045]根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术所述的新型冠状病毒mRNA疫苗，其中，所述的脂质纳米颗粒包括mRNA和脂质，其中，所述脂质包括：
[0046]a)正电荷脂质和/或可离子化脂质中的一种本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种能编码目标多肽的mRNA分子，其中，所述的目标多肽包括SARS
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CoV
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2刺突蛋白S中NTD
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RBD天然结构域，所述NTD
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RBD天然结构域包括NTD片段与RBD片段，NTD片段与RBD片段之间以来源于S蛋白的天然氨基酸序列作为连接子连接。2.根据权利要求1所述的mRNA分子，该mRNA还编码NTD
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RBD天然结构域N端的信号肽。3.根据权利要求1或2所述的mRNA分子，该mRNA分子编码的氨基酸序列从N端到C端依次包括信号肽、NTD片段、连接子、RBD片段。4.根据权利要求1至3任意一项所述的mRNA分子，其中，所述的连接子的氨基酸序列为SEQ ID NO:50。5.根据权利要求1至4中任意一项所述的mRNA分子，其中，NTD片段的氨基酸序列选自：(a)SEQ ID NO:49的第1至第289位组成的氨基酸序列；(b)由(a)的氨基酸序列经过替换、增加和/或缺失一个或几个氨基酸且具有与(a)相同功能的衍生序列。6.根据权利要求1至5中任意一项所述的mRNA分子，其中，RBD片段的氨基酸序列选自：(c)SEQ ID NO:49的第304至第526位组成的氨基酸序列；(d)由(c)的氨基酸序列经过替换、增加和/或缺失一个或几个氨基酸且具有与(a)相同功能的衍生序列。7.根据权利要求1至6中任意一项所述的mRNA分子，其中，所述的NTD
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RBD天然结构域的氨基酸序列为：SEQ ID NO:44至SEQ ID NO:49中任一序列所示氨基酸序列；或与SEQ ID NO:44至SEQ ID NO:49中任一序列同一性在94.3％以上的衍生的氨基酸序列。8.根据权利要求7所述的mRNA分子，其中，所述的NTD
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RBD天然结构域的氨基酸序列为SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:44中的一种。9.根据权利要求3至7中任意一项所述的mRNA分子，其中，所述的mRNA编码的氨基酸序列为SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:1。10.根据权利要求1至9中任意一项所述的mRNA分子，其蛋白质编码区序列如SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:41或SEQ ID NO:42所示。11.根据权利要求1至10中任意一项所述的mRNA分子，其中，该mRNA经过1
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甲基假尿苷修饰。12.根据权利要求1至11中任意一项所述的mRNA分子，其中，该mRNA还包括5
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UTR序列和/或3
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UTR序列。13.根据权利要求12所述的mRNA分子，其中，5
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UTR序列包含或不包含Kozak序列；优选地，所述5'
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UTR具有SEQ ID NO:51所示序列。14.根据权利要求12所述的mRNA分子，其中，3
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UTR序列具有SEQ ID NO:52所示序列。15.根据权利要求1至14中任意一项所述的mRNA分子，其中，该mRNA还经过3'加尾修饰
和/或至少一个5'加帽修饰；优选地，3'加尾修饰包含聚
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A尾，所述聚
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A尾为中间插入或不插入连接子的多聚腺苷酸；优选地，至少一个5'加帽修饰的帽结构选自Cap0、Cap1、ARCA、肌苷、N1

【专利技术属性】
技术研发人员：胡勇，
申请(专利权)人：深圳市瑞吉生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：