一种EP6启动子与其相关生物材料及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种EP6启动子与其相关生物材料及应用。本发明专利技术公开的EP6启动子，其序列为序列表中SEQ ID No.3。本发明专利技术将EP6启动子启动相应氨基酸合成途径中基因得到相应的表达盒，然后将该表达盒作为外源强启动子整合到高产氨基酸的细菌中替换氨基酸合成关键基因的原始启动子，实现了相应氨基酸产量的提高。说明，本发明专利技术的EP6启动子不仅具有高启动活性，还可以用于生产氨基酸，具有很要的应用前景。具有很要的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种EP6启动子与其相关生物材料及应用


[0001]本专利技术涉及生物
中，一种EP6启动子与其相关生物材料及应用。

技术介绍

[0002]目前工业上产氨基酸的水平已有较大提高，但如何在较高水平的基础上进一步提升氨基酸的产量，则需要全面考虑产氨基酸的菌生长所需的碳源，以及在发酵后期碳源如何最大限度的进入氨基酸的合成途径。为了解决该问题，对于产某种氨基酸的细菌而言，不同强度的启动子需要应用到相应氨基酸代谢通路的不同基因上，以达到氨基酸代谢通路与细菌生长的平衡。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的是提供一种EP6启动子，利用EP6启动子可以生产氨基酸。
[0004]本专利技术提供的EP6启动子，其序列为序列表中SEQ ID No.3。
[0005]本专利技术还提供了与EP6启动子相关的生物材料，所述生物材料为下述B1）至B7）中的任一种：B1）含有EP6启动子的表达盒；B2）含有EP6启动子的重组载体；B3）含有B1）所述表达盒的重组载体；B4）含有EP6启动子的重组微生物；B5）含有B1）所述表达盒的重组微生物；B6）含有B2）所述重组载体的重组微生物；B7）含有B3）所述重组载体的重组微生物。
[0006]上述生物材料中，B1）所述的含有EP6启动子的表达盒，是指能够在宿主细胞中EP6启动子可驱动目的基因表达的DNA，该DNA不但可包括目的基因，还可包括终止目的基因转录的终止子。进一步，所述表达盒还可包括增强子序列。
[0007]可用现有的表达载体构建含有EP6启动子的重组载体。
[0008]上述生物材料中，所述载体可为质粒、黏粒、噬菌体或病毒载体。
[0009]上述生物材料中，所述微生物可为酵母、细菌、藻或真菌。其中，细菌可为谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum）、乳酸发酵短杆菌、黄色短杆菌（brevibacterium flavum）、北京棒杆菌（Corynebacterium pekinense）、噬氨短杆菌、钝齿棒状杆菌或泛菌（Pantoea）。
[0010]本专利技术还提供了EP6启动子在作为启动子中的应用。
[0011]本专利技术还提供了EP6启动子或所述生物材料在生产氨基酸中的应用。
[0012]上述应用中，所述氨基酸可为赖氨酸、谷氨酸或缬氨酸。
[0013]本专利技术的EP6启动子可以用于生产多种产物，包括但不限于实施例中的赖氨酸、谷氨酸与缬氨酸，所生产的产物还可为甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、
色氨酸、丝氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、苏氨酸、天冬氨酸、精氨酸、组氨酸、莽草酸、原儿茶酸、丁二酸、a酮戊二酸、柠檬酸、鸟氨酸，瓜氨酸等。各种产物的生产时，将本专利技术的EP6启动子置于目的产物合成途径中基因上游并使EP6启动子驱动目的产物合成途径中基因的合成即可实现目的产物的生产。
[0014]本专利技术还提供了一种生产氨基酸的方法，所述方法包括：将EP6启动子导入能合成目的氨基酸的生物细胞中，使EP6启动子驱动所述生物细胞中目的氨基酸合成途径中基因的表达，得到重组生物细胞；培养所述重组生物细胞，得到目的氨基酸。
[0015]上述方法中，所述生物细胞可为能合成目的氨基酸的酵母、细菌、藻、真菌、植物细胞或动物细胞。
[0016]所述生物细胞为任何可以合成目的氨基酸的生物细胞。
[0017]所述细菌可为谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum）、乳酸发酵短杆菌、黄色短杆菌（brevibacterium flavum）、北京棒杆菌（Corynebacterium pekinense）、噬氨短杆菌、钝齿棒状杆菌或泛菌（Pantoea）。
[0018]在本专利技术的一个实施例中，所述目的氨基酸为赖氨酸，所述细菌为谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum）CGMCC No.12856。
[0019]利用本专利技术启动子生产赖氨酸所用细菌包括但不限于谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum）CGMCC No.12856。本专利技术可将本专利技术的EP6启动子置于这些细菌的赖氨酸合成途径中基因上游，使本专利技术的EP6启动子可以通过驱动这些细菌中赖氨酸合成途径中基因的表达进而合成赖氨酸。
[0020]在本专利技术的一个实施例中，所述目的氨基酸为谷氨酸，所述细菌为谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum）CGMCC No. 21220。
[0021]利用本专利技术启动子生产谷氨酸所用细菌包括但不限于谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum）CGMCC No. 21220。本专利技术可将本专利技术的EP6启动子置于这些细菌的谷氨酸合成途径中基因上游，使本专利技术的EP6启动子可以通过驱动这些细菌中谷氨酸合成途径中基因的表达进而合成谷氨酸。
[0022]在本专利技术的一个实施例中，所述目的氨基酸为缬氨酸，所述细菌为谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum）CGMCC No.21260。
[0023]利用本专利技术启动子生产缬氨酸所用细菌包括但不限于谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum）CGMCC No.21260。本专利技术可将本专利技术的EP6启动子置于这些细菌的缬氨酸合成途径中基因上游，使本专利技术的EP6启动子可以通过驱动这些细菌中缬氨酸合成途径中基因的表达进而合成缬氨酸。
[0024]上述方法中，所述目的氨基酸可为赖氨酸、谷氨酸或缬氨酸。
[0025]本专利技术的EP6启动子可以用于生产多种产物，包括但不限于实施例中的赖氨酸、谷氨酸与缬氨酸，所生产的产物还可为甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、色氨酸、丝氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、苏氨酸、天冬氨酸、精氨酸、组氨酸、莽草酸、原儿茶酸、丁二酸、a酮戊二酸、柠檬酸、鸟氨酸，瓜氨酸等。各种目的产物的生产时，将本专利技术的EP6启动子置于目的产物合成途径中基因上游并使EP6启动子驱动目的产物合成途径中基因的合成即可实现目的产物的生产。
[0026]在本专利技术的一个实施例中，所述目的氨基酸为赖氨酸，所述细菌为谷氨酸棒杆菌
（Corynebacterium glutamicum）CGMCC No.12856，赖氨酸合成途径中基因为lysA基因（SEQ ID No.4的第149
‑
1486位）。
[0027]所述重组生物细胞通过将EP6启动子替换谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum）CGMCC No.12856中lysA基因原始启动子而实现。
[0028]在本专利技术的一个实施例中，所述目的氨基酸为谷氨酸，所述细菌为谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum）CGMCC No.21220，谷氨酸合成途径中基因为BB本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.DNA分子，其序列为序列表中SEQ ID No.3。2.与权利要求1所述DNA分子相关的生物材料，为下述B1）至B7）中的任一种：B1）含有权利要求1所述DNA分子的表达盒；B2）含有权利要求1所述DNA分子的重组载体；B3）含有B1）所述表达盒的重组载体；B4）含有权利要求1所述DNA分子的重组微生物；B5）含有B1）所述表达盒的重组微生物；B6）含有B2）所述重组载体的重组微生物；B7）含有B3）所述重组载体的重组微生物。3.权利要求1所述DNA分子在作为启动子中的应用。4.权利要求1所述DNA分子或权利要求2所述生物材料在生产氨基酸中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏爱英，孟刚，贾慧萍，米杰，杨立鹏，苏厚波，田斌，
申请(专利权)人：北京中科伊品生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：