与分子连接的细胞外囊泡及其用途制造技术

技术编号:34075807 阅读:20 留言:0更新日期:2022-07-11 17:38
本公开涉及细胞外囊泡(例如,外泌体),所述细胞外囊泡包含通过锚定部分与所述细胞外囊泡共价连接的生物活性分子,所述细胞外囊泡可用作预防或治疗癌症或其它疾病的剂。本文还提供了用于产生所述细胞外囊泡的方法和使用所述细胞外囊泡治疗疾病或病症的方法。所述细胞外囊泡治疗疾病或病症的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】与分子连接的细胞外囊泡及其用途
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本PCT申请要求2019年8月14日提交的美国临时申请号62/886,941和2019年9月3日提交的美国临时申请号62/895,398的优先权权益,所述美国临时申请各自以引用的方式整体并入本文。
[0003]对通过EFS

WEB以电子方式提交的序列表的引用
[0004]在本申请中提交的以电子方式提交的序列表(名称:4000.057PC02_Seqlisting_ST25.txt,大小:765,394字节;并且创建日期:2020年8月14日)的内容以引用的方式整体并入本文中。


[0005]本公开提供了细胞外囊泡(EV),例如外泌体,所述细胞外囊泡包含通过锚定部分与所述细胞外囊泡(例如,外泌体)共价连接的至少一种生物活性分子,所述细胞外囊泡可用作预防或治疗癌症和其它疾病的剂。

技术介绍

[0006]许多生物活性化合物具有具治疗意义的有效生物活性。然而,这些化合物通常在非靶器官中表现出毒性。限制非靶组织暴露的一种方式是将小分子化学缀合至基于亲和力的试剂(如抗体),这可将治疗性化合物引导至特定细胞类型(Dosio,F.等人,Toxins(Basel)3(7):848

883(2011)),但这种方法受限于可连接至抗体的目标化合物分子的数量(通常每个抗体2

6个分子)以及特异性地结合至靶向的、相关的患病/效应细胞而不结合至非靶细胞的抗体的可用性/存在。这两个问题分别通过降低效力和增加全身毒性而限制抗体

药物缀合物(ADC)的使用。因此,需要具有比ADC更高有效载荷的递送系统,所述递送系统能够选择性地靶向特定组织或器官,同时限制对治疗性化合物的总体全身暴露。
[0007]EV(例如,外泌体)是细胞间通讯的重要介质。它们也是许多疾病(如癌症)的诊断和预后中的重要生物标志物。作为药物递送载体,EV(例如,外泌体)在许多治疗领域作为新的治疗方式提供相对于传统药物递送方法(例如肽免疫、DNA疫苗)的许多优点。然而,尽管有其优点,但许多EV(例如,外泌体)的临床功效有限。例如,树突细胞来源的外泌体(DEX)在II期临床试验中在不能手术的非小细胞肺癌(NSCLC)患者中作为一线化学疗法后的维持免疫疗法进行了研究。然而,所述试验因未达到主要终点(化学疗法停止后4个月时至少50%的患者具有无进展存活(PFS))而终止。Besse,B.,等人,Oncoimmunology 5(4):e1071008(2015)。
[0008]因此,需要新的和更有效的工程化EV(例如,外泌体)以更好地实现基于EV技术的治疗用途和其它应用。

技术实现思路

[0009]本公开涉及一种细胞外囊泡(EV),所述细胞外囊泡包含通过锚定部分(AM)与所述
EV共价连接的生物活性分子(BAM),其中所述锚定部分包含:
[0010][AM]‑
[接头]n

[BAM]ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
式(I)
[0011]其中n是任何整数。在一些方面中,n是介于0与10之间的任何整数。
[0012]在其它方面中,所述锚定部分包含固醇、GM1、脂质(例如,磷脂或脂肪酸)、维生素、小分子、肽或它们的组合。例如,所述锚定部分包含至少6个碳原子、至少7个碳原子、至少8个碳原子、至少9个碳原子、至少10个碳原子、至少11个碳原子、至少12个碳原子、至少13个碳原子、至少14个碳原子、至少15个碳原子、至少16个碳原子、至少17个碳原子、至少18个碳原子、至少19个碳原子、至少20个碳原子、至少25个碳原子、至少30个碳原子、至少35个碳原子、至少40个碳原子、至少45个碳原子、至少50个碳原子、至少55个碳原子、至少至少60个碳原子、至少65个碳原子、至少70个碳原子、至少75个碳原子、至少80个碳原子、至少85个碳原子或至少90个碳原子。
[0013]在其它方面中,所述锚定部分包含固醇、类固醇、藿烷类、羟基类固醇、开环类固醇、它们的类似物或它们的任何组合。在一些其它方面中,所述锚定部分包含麦角固醇、7

脱氢胆固醇、胆固醇、24S

羟基胆固醇、羊毛固醇、环阿屯醇、岩藻固醇、大褐马尾藻固醇、菜油固醇、β

谷固醇、谷甾烷醇、粪固醇、燕麦固醇、豆固醇或它们的任何组合。
[0014]在一些方面中,所述锚定部分是具有以下结构的胆固醇:
[0015][0016]在一些方面中,所述锚定部分具有结构
[0017][0018][0019]在一些方面中,所述锚定部分包含类固醇,所述类固醇是二氢睾酮、熊果醇、龙舌蓝皂苷配基、薯蓣皂苷配基、黄体酮、皮质醇或它们的任何组合。
[0020]在一些方面中,所述锚定部分包含脂质。在其它方面中,所述锚定部分包含C2‑
C
60
链。在一些方面中,所述锚定部分包含C4‑
C
40
、C2‑
C
38
、C2‑
C
36
、C2‑
C
34
、C2‑
C
32
、C2‑
C
30
、C4‑
C
30
、C2‑
C
28
、C4‑
C
28
、C2‑
C
26
、C4‑
C
26
、C2‑
C
24
、C4‑
C
24
、C6‑
C
24
、C8‑
C
24
、C
10

C
24
、C2‑
C
22
、C4‑
C
22
、C6‑
C
22
、C8‑
C
22
、C
10

C
22
、C2‑
C
20
、C4‑
C
20
、C6‑
C
20
、C8‑
C
20
、C
10

C
20
、C2‑
C
18
、C4‑
C
18
、C6‑
C
18
、C8‑
C
18
、C
10

C
18
、C
12

C
18
、C
14

C
18
、C
16

C
18
、C2‑
C
16本文档来自技高网
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种细胞外囊泡(EV),所述细胞外囊泡包含通过锚定部分(AM)与所述EV共价连接的生物活性分子(BAM),其中所述锚定部分包含:[AM]

[接头]n

[BAM]
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
式(I)其中n是任何整数。2.如权利要求1所述的细胞外囊泡,其中n是介于0与10之间的任何数值。3.如权利要求1或2所述的细胞外囊泡,其中所述锚定部分包含固醇、GM1、脂质、维生素、小分子、肽或它们的组合。4.如权利要求1至3中任一项所述的细胞外囊泡,其中所述锚定部分包含至少6个碳原子、至少7个碳原子、至少8个碳原子、至少9个碳原子、至少10个碳原子、至少11个碳原子、至少12个碳原子、至少13个碳原子、至少14个碳原子、至少15个碳原子、至少16个碳原子、至少17个碳原子、至少18个碳原子、至少19个碳原子、至少20个碳原子、至少25个碳原子、至少30个碳原子、至少35个碳原子、至少40个碳原子、至少45个碳原子、至少50个碳原子、至少55个碳原子、至少至少60个碳原子、至少65个碳原子、至少70个碳原子、至少75个碳原子、至少80个碳原子、至少85个碳原子或至少90个碳原子。5.如权利要求1至4中任一项所述的细胞外囊泡,其中所述锚定部分包含固醇、类固醇、藿烷类、羟基类固醇、开环类固醇、它们的类似物或它们的任何组合。6.如权利要求1至4中任一项所述的细胞外囊泡,其中所述锚定部分包含麦角固醇、7

脱氢胆固醇、胆固醇、24S

羟基胆固醇、羊毛固醇、环阿屯醇、岩藻固醇、大褐马尾藻固醇、菜油固醇、β

谷固醇、谷甾烷醇、粪固醇、燕麦固醇、豆固醇或它们的任何组合。7.如权利要求6所述的细胞外囊泡,其中所述锚定部分是胆固醇或具有选自由以下组成的组的结构的衍生物:
8.如权利要求1至5中任一项所述的细胞外囊泡,其中所述锚定部分包含类固醇,所述类固醇是二氢睾酮、熊果醇、龙舌蓝皂苷配基、薯蓣皂苷配基、黄体酮、皮质醇或它们的任何组合。9.如权利要求1至4中任一项所述的细胞外囊泡,其中所述锚定部分包含脂质。10.如权利要求9所述的细胞外囊泡,其中所述锚定部分包含C2‑
C
60
链。11.如权利要求9所述的细胞外囊泡,其中所述锚定部分包含C4‑
C
40
、C2‑
C
38
、C2‑
C
36
、C2‑
C
34
、C2‑
C
32
、C2‑
C
30
、C4‑
C
30
、C2‑
C
28
、C4‑
C
28
、C2‑
C
26
、C4‑
C
26
、C2‑
C
24
、C4‑
C
24
、C6‑
C
24
、C8‑
C
24
、C
10

C
24
、C2‑
C
22
、C4‑
C
22
、C6‑
C
22
、C8‑
C
22
、C
10

C
22
、C2‑
C
20
、C4‑
C
20
、C6‑
C
20
、C8‑
C
20
、C
10

C
20
、C2‑
C
18
、C4‑
C
18
、C6‑
C
18
、C8‑
C
18
、C
10

C
18
、C
12

C
18
、C
14

C
18
、C
16

C
18
、C2‑
C
16
、C4‑
C
16
、C6‑
C
16
、C8‑
C
16
、C
10

C
16
、C
12

C
16
、C
14

C
16
、C2‑
C
15
、C4‑
C
15
、C6‑
C
15
、C8‑
C
15
、C9‑
C
15
、C
10

C
15
、C
11

C
15
、C
12

C
15
、C
13

C
15
、C2‑
C
14
、C4‑
C
14
、C6‑
C
14
、C8‑
C
14
、C9‑
C
14
、C
10

C
14
、C
11

C
14
、C
12

C
14
、C2‑
C
13
、C4‑
C
13
、C6‑
C
13
、C7‑
C
13
、C8‑
C
13
、C9‑
C
13
、C
10

C
13
、C
10

C
13
、C
11

C
13
、C2‑
C
12
、C4‑
C
12
、C6‑
C
12
、C7‑
C
12
、C8‑
C
12
、C9‑
C
12
、C
10

C
12
、C2‑
C
11
、C4‑
C
11
、C6‑
C
11
、C7‑
C
11
、C8‑
C
11
、C9‑
C
11
、C2‑
C
10
、C4‑
C
10
、C2‑
C9、C4‑
C9、C2‑
C8、C2‑
C7、C4‑
C7、C2‑
C6或C4‑
C6链。12.如权利要求9至11中任一项所述的细胞外囊泡,其中所述锚定部分包含直链脂肪酸、支链脂肪酸、不饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸、多不饱和脂肪酸、羟基脂肪酸、多元羧酸或它们的任何组合。13.如权利要求12所述的细胞外囊泡,其中所述锚定部分包含直链脂肪酸,所述直链脂肪酸是丁酸、己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、花生酸、山嵛酸、二十四烷酸、二十六烷酸、二十八烷酸、三十烷酸和正三十二烷酸,以及具有奇数个碳原子的那些,
如丙酸、正戊酸、庚酸、壬酸、十一烷酸、十三烷酸、十五烷酸、十七烷酸、十九烷酸、二十一烷酸、二十三烷酸、二十五烷酸、二十七烷酸或它们的任何组合。14.如权利要求12所述的细胞外囊泡,其中所述锚定部分包含支链脂肪酸,所述支链脂肪酸是异丁酸、异己酸、异辛酸、异癸酸、异月桂酸、11

甲基十二烷酸、异肉豆蔻酸、13

甲基

十四烷酸、异棕榈酸、15

甲基

十六烷酸、异硬脂酸、17

甲基十八烷酸、异花生酸、19

甲基

二十烷酸、α

乙基

己酸、α

己基癸酸、α

庚基十一烷酸、2

癸基十四烷酸、2

十一烷基十四烷酸、2

癸基十五烷酸、2

十一烷基十五烷酸、Fine oxocol 1800酸(Nissan Chemical Industries,Ltd.的产品),以异丁基封端的反异脂肪酸,如6

甲基

辛酸、8

甲基

癸酸、10

甲基

十二烷酸、12

甲基

十四烷酸、14

甲基

十六烷酸、16

甲基

十八烷酸、18

甲基

二十烷酸、20

甲基

二十二烷酸、22

甲基

二十四烷酸、24

甲基

二十六烷酸和26

甲基二十八烷酸或它们的任何组合。15.如权利要求12所述的细胞外囊泡,其中所述锚定部分包含不饱和脂肪酸,所述不饱和脂肪酸是4

癸烯酸、癸烯酸、4

十二碳烯酸、5

十二碳烯酸、月桂烯酸、4

十四碳烯酸、5

十四碳烯酸、9

十四碳烯酸、棕榈油酸、6

十八碳烯酸、油酸、9

十八碳烯酸、11

十八碳烯酸、9

二十碳烯酸、顺式

11

二十碳烯酸、鲸蜡油酸、13

二十二碳烯酸、15

二十四碳烯酸,17

二十六碳烯酸、6,9,12,15

十六碳四烯酸、亚油酸、亚麻酸、α

桐酸、β

桐酸、石榴酸、6,9,12,15

十八碳四烯酸、杷荏酸、5,8,11,14

二十碳四烯酸、5,8,11,14,17

二十碳五烯酸、7,10,13,16,19

二十二碳五烯酸、4,7,10,13,16,19

二十二碳六烯酸或它们的任何组合。16.如权利要求12所述的细胞外囊泡,其中所述锚定部分包含羟基脂肪酸,所述羟基脂肪酸是α

羟基月桂酸、α

羟基肉豆蔻酸、α

羟基棕榈酸、α

羟基硬脂酸、ω

羟基月桂酸、α

羟基花生酸、9

羟基

12

十八碳烯酸、蓖麻油酸、α

羟基山嵛酸、9

羟基

反式

10,12

十八碳二烯酸、粗糠柴酸、番红醇酸、9,10

二羟基硬脂酸、12

羟基硬脂酸或它们的组合。17.如权利要求12所述的细胞外囊泡,其中所述锚定部分包含多元羧酸,所述多元羧酸是草酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、己二酸、庚二酸、辛二酸、壬二酸、癸二酸、D,L

苹果酸或它们的任何组合。18.如权利要求1至4中任一项所述的细胞外囊泡,其中所述锚定部分包含磷脂。19.如权利要求18所述的细胞外囊泡,其中所述磷脂是磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸、磷脂酸、2溶血磷脂酰胆碱、鞘磷脂或它们的任何组合。20.如权利要求18所述的细胞外泡囊,其中所述磷脂是磷脂酰乙醇胺,所述磷脂酰乙醇胺是二月桂酰基磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、二油酰基磷脂酰乙醇胺、1

棕榈酰基
‑2‑
油烯基磷脂酰乙醇胺、1

油烯基
‑2‑
棕榈酰基磷脂酰乙醇胺、二芥酰基磷脂酰乙醇胺或它们的任何组合。21.如权利要求18所述的细胞外囊泡,其中所述磷脂是磷脂酰甘油,所述磷脂酰甘油是二月桂酰基磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰基磷脂酰甘油、二棕榈酰基磷脂酰甘油、二硬脂酰基磷脂酰甘油、二油酰基磷脂酰甘油、1

棕榈酰基
‑2‑
油烯基

磷脂酰甘油、1

油烯基
‑2‑
棕榈酰基

磷脂酰甘油、二芥酰基磷脂酰甘油或它们的任何组合。22.如权利要求18所述的细胞外囊泡,其中所述磷脂是磷脂酰丝氨酸,所述磷脂酰丝氨酸是二月桂酰基磷脂酰丝氨酸、二肉豆蔻酰基磷脂酰丝氨酸、二棕榈酰基磷脂酰丝氨酸、二硬脂酰基磷脂酰丝氨酸、二油酰基磷脂酰丝氨酸、1

棕榈酰基
‑2‑
油烯基

磷脂酰丝氨酸、1

油烯基
‑2‑
棕榈酰基

磷脂酰丝氨酸、二芥酰基磷脂酰丝氨酸或它们的任何组合。23.如权利要求18所述的细胞外囊泡,其中所述磷脂是磷脂酸,所述磷脂酸是二月桂酰基磷脂酸、二肉豆蔻酰基磷脂酸、二棕榈酰基磷脂酸、二硬脂酰基磷脂酸、二油酰基磷脂酸、1

棕榈酰基
‑2‑
油烯基磷脂酸、1

油烯基
‑2‑
棕榈酰基

磷脂酸、二芥酰基磷脂酸或它们的任何组合。24.如权利要求18所述的细胞外囊泡,其中所述磷脂是磷脂酰肌醇,所述磷脂酰肌醇是二月桂酰基磷脂酰肌醇、二肉豆蔻酰基磷脂酰肌醇、二棕榈酰基磷脂酰肌醇、二硬脂酰基磷脂酰肌醇、二油酰基磷脂酰肌醇、1

棕榈酰基
‑2‑
油烯基

磷脂酰肌醇、1

油烯基
‑2‑
棕榈酰基

磷脂酰肌醇、二芥酰基磷脂酰肌醇或它们的任何组合。25.如权利要求18所述的细胞外囊泡,其中所述磷脂是对称磷脂,所述对称磷脂是1,2二丙酰基sn

甘油基3磷酸胆碱(03:0PC);1,2二丁酰基sn甘油基3磷酸胆碱(04:0PC);1,2二戊酰基sn甘油基3磷酸胆碱(05:0PC);1,2二己酰基sn甘油基3磷酸胆碱(06:0PC);1,2二庚酰基sn甘油基3磷酸胆碱(07:0PC);1,2二辛酰基sn甘油基3磷酸胆碱(08:0PC);1,2二壬酰基sn甘油基3磷酸胆碱(09:0PC);1,2二癸酰基sn甘油基3磷酸胆碱(10:0PC);1,2双十一烷酰基sn甘油基3磷酸胆碱(11:0PC,DUPC);1,2二月桂酰基sn甘油基3磷酸胆碱(12:0PC);1,2双十三烷酰基sn甘油基3磷酸胆碱(13:0PC);1,2二肉豆蔻酰基sn甘油基3磷酸胆碱(14:0PC,DMPC);1,2双十五烷酰基sn甘油基3磷酸胆碱(15:0PC);1,2二棕榈酰基sn甘油基3磷酸胆碱(16:0PC,DPPC);1,2二植烷酰基sn甘油基3磷酸胆碱(4ME 16:0PC);1,2双十七烷酰基sn甘油基3磷酸胆碱(17:0PC);1,2二硬脂酰基sn甘油基3磷酸胆碱(18:0PC,DSPC);1,2双十九烷酰基sn甘油基3磷酸胆碱(19:0PC);1,2双二十烷酰基sn甘油基3磷酸胆碱(20:0PC);1,2双二十一烷酰基sn甘油基3磷酸胆碱(21:0PC);1,2二山嵛酰基sn甘油基3磷酸胆碱(22:0PC);1,2双二十三烷酰基sn甘油基3磷酸胆碱(23:0PC);1,2双二十四烷酰基sn甘油基3磷酸胆碱(24:0PC);1,2二肉豆蔻脑酰基sn甘油基3磷酸胆碱(14:1(Δ9

顺式)PC);1,2二反肉豆蔻脑酰基sn甘油基3磷酸胆碱(14:1(Δ9

反式)PC);1,2二棕榈油酰基sn甘油基3磷酸胆碱(16:1(Δ9

顺式)PC);1,2二反棕榈油酰基sn甘油基3磷酸胆碱(16:1(Δ9

反式)PC);1,2二异岩芹酰基sn甘油基3磷酸胆碱(18:1(Δ6

顺式)PC);1,2二油酰基sn甘油基3磷酸胆碱(18:1(Δ9

顺式)PC,DOPC);1,2二反油酰基sn甘油基3磷酸胆碱(18:1(Δ9

反式)PC);1,2二亚油酰基sn甘油基3磷酸胆碱(18:2(顺式)PC,DLPC);1,2二亚麻酰基sn甘油基3磷酸胆碱(18:3(顺式)PC,DLnPC);1,2双二十碳烯酰基sn甘油基3磷酸胆碱(20:1(顺式)PC);1,2二花生四烯酰基sn甘油基3磷酸胆碱(20:4(顺式)PC,DAPC);1,2二瓢儿菜基sn甘油基3磷酸胆碱(22:1(顺式)PC);1,2双二十二碳六烯酰基sn甘油基3磷酸胆碱(22:6(顺式)PC,DHAPC);1,2二神经酰基sn甘油基3磷酸胆碱(24:1(顺式)PC);1,2二己酰基sn甘油基3磷酸乙醇胺(06:0PE);1,2二辛酰基sn甘油基3磷酸乙醇胺(08:0PE);1,2二癸酰基sn甘油基3磷酸乙醇胺(10:0PE);1,2二月桂酰基sn甘油基3磷酸乙醇胺(12:0PE);1,2二肉豆蔻酰基sn甘油基3磷酸乙醇胺(14:0PE);1,2双十五烷酰基sn甘油基3磷酸乙醇胺(15:0PE);1,2二棕榈酰基sn甘油基3磷酸乙醇胺(16:0PE);1,2二植烷酰基sn甘油基3磷酸乙醇胺(4ME 16:0PE);1,2双十七烷酰基sn甘油基3磷酸乙醇胺(17:0PE);1,2二硬脂酰基sn甘油基3磷酸乙醇胺(18:0PE,DSPE);1,2二棕榈油酰基sn甘油基3磷酸乙醇胺(16:1PE);1,2二油酰基sn甘油基3磷酸乙醇胺(18:1(Δ9

顺式)PE,DOPE);1,2二反油酰基sn甘油基3磷酸乙醇胺(18:1(Δ9

反式)PE);
1,2二亚油酰基sn甘油基3磷酸乙醇胺(18:2PE,DLPE);1,2二亚麻酰基sn甘油基3磷酸乙醇胺(18:3PE,DLnPE);1,2二花生四烯酰基sn甘油基3磷酸乙醇胺(20:4PE,DAPE);1,2双二十二碳六烯酰基sn甘油基3磷酸乙醇胺(22:6PE,DHAPE);1,2二O十八碳烯基sn甘油基3磷酸胆碱(18:0二醚PC);1,2二油酰基sn甘油基3磷酸外消旋(1甘油)钠盐(DOPG)或它们的任何组合。26.如权利要求18所述的细胞外囊泡,其中所述磷脂是不对称磷脂,所述不对称磷脂是1肉豆蔻酰基2棕榈酰基sn甘油基3磷酸胆碱(14:0

16:0PC,MPPC);1肉豆蔻酰基2硬脂酰基sn甘油基3磷酸胆碱(14:0

18:0PC,MSPC);1棕榈酰基2乙酰基sn甘油基3磷酸胆碱(16:0

02:0PC);1棕榈酰基2肉豆蔻酰基sn甘油基3磷酸胆碱(16:0

14:0PC,PMPC);1棕榈酰基2硬脂酰基sn甘油基3磷酸胆碱(16:0

18:0PC,PSPC);1棕榈酰基2油酰基sn甘油基3磷酸胆碱(16:0

【专利技术属性】
技术研发人员:张毅亚伦
申请(专利权)人:科迪亚克生物科学公司
类型:发明
国别省市:

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