包含质子化壳聚糖的止血材料、敷料无菌检查方法技术

本发明专利技术公开了一种包含质子化壳聚糖的止血材料、敷料无菌检查方法，采用薄膜过滤法，其中供试液制备方法如下：取止血材料或敷料，当止血材料或敷料为粉剂时，取样量为10g；当止血材料或敷料为纱布或海绵状时，取样量为60cm2；加入至少300ml渗透压为280～320mmol/L的强碱弱酸盐溶液，搅拌；用120目～400目滤布或滤纸过滤，收集滤液；向滤液中加入酸性溶液使滤液pH值为4.0～6.5，即得。本发明专利技术方法解决了包含质子化壳聚糖的止血材料、敷料供试液无法用薄膜过滤的问题，操作简单、适用性好。适用性好。

Sterility test method for hemostatic materials and dressings containing protonated chitosan

【技术实现步骤摘要】
包含质子化壳聚糖的止血材料、敷料无菌检查方法


[0001]本专利技术属于无菌检查
，具体涉及一种包含质子化壳聚糖的止血材料、敷料无菌检查方法。

技术介绍

[0002]质子化壳聚糖是将壳聚糖与有机酸或无机酸混合后的产物，具有良好的生物相容性，可用于各种外伤出血的紧急止血，也可用于创面覆盖，为伤口提供湿润环境，促进伤口愈合。
[0003]以质子化壳聚糖为主要成分的壳聚糖止血粉、壳聚糖止血纱布、壳聚糖止血海绵或包含质子化壳聚糖的其他止血材料、敷料均为无菌产品，需进行无菌检查，但因壳聚糖分子量较大，遇水溶解或溶胀后，且具有一定的粘性，很难通过薄膜过滤。
[0004]采用直接接种法对上述产品进行无菌检查，也存在诸多缺陷：
①
壳聚糖类产品具有较强的抑菌作用，需要使用大量的培养基，通常0.5g样品至少需要400ml培养基方能消除其抑菌作用。当检验量较大时，不仅培养基消耗量大，而且培养所占空间较大，对连续生产时的检验能力带来一定的挑战。
②
实验过程中发现：质子化壳聚糖在胰酪大豆胨液体培养基中易聚集在底部形成凝胶，对其上的微生物会形成包裹继而抑制其生长，容易造成假阴性结果；在硫乙醇酸盐流体培养基中，虽然包含质子化壳聚糖的止血材料、敷料可以均匀分散，但由于质子化壳聚糖对微生物具有絮凝或吸附作用，使原本浑浊的培养基变得澄清，也易造成假阴性的判断。
③
质子化壳聚糖具有较高的氧化还原电位，硫乙醇酸盐流体培养基的厌氧层在培养过程中不同程度的被氧化，大大降低了厌氧菌的检出率。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种包含质子化壳聚糖的止血材料、敷料无菌检查方法，以解决供试液无法薄膜过滤的问题，操作简单，方法适用性好。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供的技术方案为：包含质子化壳聚糖的止血材料、敷料无菌检查方法，具体为：采用薄膜过滤法，其中供试液制备方法如下：取止血材料或敷料，当止血材料或敷料为粉剂时，取样量为10g；当止血材料或敷料为纱布或海绵状时，取样量为60cm2；加入至少300ml渗透压为280～320mmol/L的强碱弱酸盐溶液，搅拌；用120目～400目滤布或滤纸过滤，收集滤液；向滤液中加入酸性溶液使滤液pH值为4.0～6.5，即得。
[0007]进一步地，本专利技术所述无菌检查方法，其中，所述强碱弱酸盐溶液的pH为8～9。
[0008]进一步地，本专利技术所述无菌检查方法，其中，所述强碱弱酸盐为碳酸氢钠、碳酸氢钾中的一种或两种。
[0009]进一步地，本专利技术所述无菌检查方法，其中，所述酸性溶液由醋酸、盐酸、硫酸、乳酸、柠檬酸、苹果酸、琥珀酸、丙烯酸中的一种或多种配制而成。
[0010]进一步地，本专利技术所述无菌检查方法，其中，所述质子化壳聚糖为壳聚糖乳酸盐、
壳聚糖盐酸盐、壳聚糖硫酸盐、壳聚糖乙酸盐、壳聚糖柠檬酸盐、壳聚糖苹果酸盐、壳聚糖琥珀酸盐、壳聚糖丙烯酸盐中的一种或多种。
[0011]进一步地，本专利技术所述无菌检查方法，其中，所述质子化壳聚糖为交联壳聚糖乳酸盐、交联壳聚糖盐酸盐、交联壳聚糖硫酸盐、交联壳聚糖乙酸盐、交联壳聚糖柠檬酸盐、交联壳聚糖苹果酸盐、交联壳聚糖琥珀酸盐、交联壳聚糖丙烯酸盐中的一种或多种。
[0012]进一步地，本专利技术所述无菌检查方法，其中，所述纱布形式的止血材料或敷料是以纱布为基材，其上负载有质子化壳聚糖。
[0013]进一步地，本专利技术所述无菌检查方法，具体操作为：将制备的供试液按照中国药典规定的薄膜过滤法过滤，0.1%无菌蛋白胨水溶液冲洗；加培养基至滤器内，然后置规定温度培养、观察。
[0014]进一步地，本专利技术所述无菌检查方法，其中，所述冲洗液的用量为30ml～100ml/次，冲洗次数为1～10次。
[0015]本专利技术的有益效果在于：本专利技术所提供的方法，解决了现有常规方法用于包含质子化壳聚糖的止血材料、敷料无菌检查时，因质子化壳聚糖溶解或溶胀后粘度大而无法进行薄膜过滤的问题。
[0016]本专利技术提供的方法无需使用大量的培养基，采用薄膜过滤法即可对包含质子化壳聚糖的止血材料、敷料进行无菌检查，操作简单，方法适用性好。
具体实施方式
[0017]为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面通过实施例对本专利技术进行清楚、完整的描述。
[0018]实施例11、壳聚糖止血粉无菌检查，操作如下：取壳聚糖止血粉10g，向其中加入500ml渗透压为304mmol/L的碳酸氢钠溶液（pH为8.3），搅拌1min，用200目滤布过滤，收集滤液。向滤液中缓慢加入35ml体积浓度为20%的醋酸溶液，搅拌均匀，得供试液，其pH为4.7。
[0019]将供试液按《中国药典》2020年版四部通则1101“无菌检查法”中“薄膜过滤法”过滤，并用100ml 0.1%无菌蛋白胨水溶液冲洗3次。1份滤器中加入100ml硫乙醇酸盐流体培养基，置30～35℃培养、观察；1份滤器中加入100ml胰酪大豆胨液体培养基，置20～25℃培养、观察。
[0020]2、方法适用性试验取壳聚糖止血粉10g，向其中加入500ml渗透压为304mmol/L的碳酸氢钠溶液（pH为8.3），搅拌1min，用200目滤布过滤，收集滤液。向滤液中缓慢加入35ml体积浓度为20%的醋酸溶液，搅拌均匀，得供试液，其pH为5.4。
[0021]将供试液按《中国药典》2020年版四部通则1101“无菌检查法”中“薄膜过滤法”过滤，0.1%无菌蛋白胨水溶液冲洗3次，在最后一次的冲洗液中加入不大于100cfu的试验菌，过滤。加100ml培养基至滤器内，接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌的滤器内加硫乙醇酸盐流体培养基，置30～35℃培养；接种枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉的滤器内加胰酪大豆胨液体培养基，置20～25℃培养。另取一装有同体积培养基的容器，加入等量试
验菌，作为阳性对照。细菌培养3天，真菌培养5天。
[0022]试验结果显示，各试验组与阳性对照组生长一致。
[0023]实施例21、交联壳聚糖止血粉无菌检查，操作如下：取交联壳聚糖止血粉10g，向其中加入600ml渗透压为282mmol/L的碳酸氢钾溶液（pH为8.5），搅拌1min，用200目滤布过滤，收集滤液。向滤液中缓慢加入35ml体积浓度为30%的乳酸溶液，搅拌均匀，得供试液，其pH为4.5。
[0024]将供试液按《中国药典》2020年版四部通则1101“无菌检查法”中“薄膜过滤法”过滤，并用100ml 0.1%无菌蛋白胨水溶液冲洗2次。1份滤器中加入100ml硫乙醇酸盐流体培养基，置30～35℃培养、观察；1份滤器中加入100ml胰酪大豆胨液体培养基，置20～25℃培养、观察。
[0025]2、方法适用性试验取交联壳聚糖止血粉10g，向其中加入600ml渗透压为282mmol/L的碳酸氢钾溶液（pH为8.5），搅拌1min，用200目滤布过滤，收集滤液。向滤液中缓慢加入3本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.包含质子化壳聚糖的止血材料、敷料无菌检查方法，其特征在于，采用薄膜过滤法，其中供试液制备方法如下：取止血材料或敷料，当止血材料或敷料为粉剂时，取样量为10g；当止血材料或敷料为纱布形式或海绵状时，取样量为60cm2；加入至少300ml渗透压为280～320mmol/L的强碱弱酸盐溶液，搅拌；用120目～400目滤布或滤纸过滤，收集滤液；向滤液中加入酸性溶液使滤液pH值为4.0～6.5，即得。2.根据权利要求1所述的无菌检查方法，其特征在于，所述强碱弱酸盐溶液的pH为8～9。3.根据权利要求1或2所述的无菌检查方法，其特征在于，所述强碱弱酸盐为碳酸氢钠、碳酸氢钾中的一种或两种。4.根据权利要求1所述的无菌检查方法，其特征在于，所述酸性溶液由醋酸、盐酸、硫酸、乳酸、柠檬酸、苹果酸、琥珀酸、丙烯酸中的一种或多种配制而成。5.根据权利要求1所述的无菌检查方法，其特征在于，所述质子化壳聚糖为壳聚糖...

【专利技术属性】
技术研发人员：张丽红，张志宝，路彦茹，李素哲，董科，
申请(专利权)人：石家庄亿生堂医用品有限公司，
类型：发明
国别省市：