类鼻疽伯克霍尔德菌噬菌体vB_BpP_HN01及应用制造技术

本申请公开了纯化的具有类鼻疽伯克霍尔德菌的特异杀菌活性的噬菌体，例如类鼻疽伯克霍尔德菌噬菌体vB_BpP_HN01；用于预防或治疗由类鼻疽伯克霍尔德菌引起的传染病的组合物包括噬菌体作为活性成分；包括噬菌体作为活性成分的抗生素；包括噬菌体作为活性成分的饲料添加剂组合物；包括噬菌体作为活性成分的消毒剂或清洁剂；和利用噬菌体治疗类鼻疽的方法。本申请的纯化的噬菌体具有针对类鼻疽伯克霍尔德菌的特异的杀菌活性。由此，本申请提供的噬菌体可用于由类鼻疽伯克霍尔德菌引起的传染病的预防或治疗，并还可广泛用于制备抗生素、药物、杀菌剂、防腐剂、消毒剂和细菌感染诊断制剂。断制剂。断制剂。

Burkholderia melioides bacteriophage VB_ BpP_ Hn01 and its application

【技术实现步骤摘要】
类鼻疽伯克霍尔德菌噬菌体vB_BpP_HN01及应用


[0001]本申请涉及新型噬菌体
，尤其涉及类鼻疽伯克霍尔德菌噬菌体 vB_BpP_HN01及应用。

技术介绍

[0002]类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei，以下简称Bp)，为一革兰氏阴性的条件致病菌，可兼性寄生于人体细胞内。目前该疾病治疗最主要的问题是Bp 的复杂固有耐药性，前期的临床数据显示其可耐受青霉素、第一/二代头孢菌素、大环内酯类、多粘菌素和氨基糖苷类抗生素的作用。具体耐药机制除可分泌脂多糖形成生物被膜来屏蔽药物的作用外，Bp还可编码β内酰胺酶，从而解除头孢菌素类、苯唑西林类等β内酰胺类抗生素的作用，此外菌体内部还具有由转运蛋白、融合蛋白和孔道蛋白所构成的外排泵系统进一步降低抗生素的效果。在单一抗生素的长时间作用坐下，菌株的异质性耐药较为难为避免，还可能因为点突变的积累导致获得性耐药的产生，有研究发现，上述编码内源β内酰胺酶出现单个碱基的突变即可菌株对头孢他啶的耐药性上升85倍。
[0003]目前针对Bp的具有临床应用潜力的噬菌体仅有三株：噬菌体ST79(UmapornYordpratum,Unchalee Tattawasart,Surasakdi Wongratanacheewin,Rasana W.Sermswan, Novel lytic bacteriophages from soil that lyse Burkholderia pseudomallei,FEMSMicrobiology Letters,Volume 314,Issue 1,January 2011,Pages 81
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88)和E094 (Muangsombut V,Withatanung P,Chantratita N,Chareonsudjai S,Lim J,Galyov EE, Ottiwet O,Sengyee S,Janesomboon S,Loessner MJ,Dunne M,Korbsrisate S.RapidClinical Screening of Burkholderia pseudomallei Colonies by a Bacteriophage TailFiber
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Based Latex Agglutination Assay.Appl Environ Microbiol.2021May 26；87(12):e0301920.doi:10.1128/AEM.03019
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20.Epub 2021May 26.PMID:33811022； PMCID:PMC8174754)，分离自泰国，前者可裂解71％所测试的Bp临床株，后者的基因元件被用于开发Bp的血清学诊断方法；噬菌体C34(Guang
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Han O,Leang
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ChungC,Vellasamy KM,Mariappan V,Li
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Yen C,Vadivelu J.Experimental Phage Therapy forBurkholderia pseudomallei Infection.PLoS One.2016Jul 7；11(7):e0158213)，分离自马来西亚，虽然拥有更窄的裂解谱，但动物实验显示在噬菌体的干预下，有超过1/4的小鼠在感染Bp后未出现死亡。

技术实现思路

[0004]为探索新型的类鼻疽诊疗方法，本申请专利技术人先后于2019年完成了海南本土参考株系Bp HNBP001的测序工作(Genbank编号CP038805，CP038806)，以其为宿主，于2021年从海南省东方市采集的100份环境样品(包括稻田土壤、灌溉水源、污水)中，分离获得了一系列可侵染Bp的噬菌体，依据噬菌斑形态、能否稳定维持裂解状态以及对临床菌株的感染情况，筛选得到了中国第一株具有广谱Bp裂解能力的短尾噬菌体vB_BpP_HN01，并对其形态特
征、裂解特性和感染特点进行了研究，同时对该噬菌体的全基因组进行了测序和必要的生物信息学分析，此外使细胞模型确认了其的体外抗Bp能力以及未来与抗生素治疗类鼻疽的可能，具有十分广泛的应用前景。
[0005]第一方面，本申请实施例公开了一种纯化的噬菌体，其具有包含SEQIDNO.1的核苷酸序列的双链DNA的基因组，并具有针对类鼻疽伯克霍尔德菌的拮抗活性。
[0006]第二方面，本申请实施例公开了一种纯化的噬菌体(Burkholderiapseudomalleiphage)vB_BpP_HN01，该噬菌体于2022年4月15日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉武汉大学，保藏编号为CCTCCNO:M2022422；该噬菌体可用于拮抗类鼻疽伯克霍尔德菌菌株的生长，可用于类鼻疽疾病、肺部感染和/或菌血症的预防和治疗。
[0007]第三方面，本申请实施例公开了一种预防和/或治疗感染性疾病的组合物，所述感染性疾病由一种或更多种选自类鼻疽伯克霍尔德菌引起，所述组合物以权利要求1或2所述的噬菌体作为活性成分。
[0008]第四方面，本申请实施例公开了一种抗生素，以第一或二方面所述的噬菌体作为活性成分。
[0009]第五方面，本申请实施例公开了一种消毒剂或清洁剂，以第一伙二方面所述的噬菌体作为活性成分。
[0010]第六方面，本申请实施例公开了第一或二方面所述的噬菌体在制备药物中的用途，所述药物用于诊断细菌感染的成因剂的方法，其包括：
[0011](I)培养来自患者的组织样品；
[0012](II)使步骤(I)的培养物与包含第一或二方面的噬菌体的药物接触；
[0013](III)监控所述培养物生长和/或裂解的证据；
[0014]其中所述培养物裂解的证据指示所述培养物包含类鼻疽伯克霍尔德菌。
[0015]第七方面，本申请实施例公开了第一或二方面的噬菌体在制备药物中的用途，所述药物用于减少或抑制类鼻疽伯克霍尔德菌在与之接触的生物学表面上的定殖或生长，所述生物学表面是哺乳动物的皮肤、受损皮肤或粘膜。
[0016]第八方面，本申请实施例公开了有效量的第三方面的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于通过施用所述药物治疗或减少有此需要的受试者中的细菌感染的发生，所述细菌感染是通过类鼻疽伯克霍尔德菌的感染。
[0017]第九方面，本申请实施例公开了一种用于减少或抑制类鼻疽伯克霍尔德菌在固体表面上的定殖或生长的非治疗性方法，其包括使所述表面与第一或二方面的噬菌体接触。
附图说明
[0018]图1为本申请实施例提供的噬菌体侵染BpHNBP01的噬菌斑情
[0019]图2为本申请实施例提供的噬菌体对BpHNBP01的吸附效率(A)以及该噬菌体在不同感染复数条件下的最终滴度产生情况(B)。
[0020]图3为本申请实施例提供的噬菌体的一步生长曲线(A)以及相同条件下噬菌体对宿主菌的裂解情况(本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种纯化的噬菌体，其具有包含SEQ ID NO.1的核苷酸序列的双链DNA的基因组，并具有针对类鼻疽伯克霍尔德菌的拮抗活性。2.一种纯化的噬菌体(Burkholderia pseudomallei phage)vB_BpP_HN01，于2022年4月15日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:M2022422；该噬菌体可用于拮抗类鼻疽伯克霍尔德菌菌株的生长，所述菌株包括不同宿主类鼻疽伯克霍尔德菌，可用于类鼻疽疾病、肺部感染和/或菌血症的预防和治疗。3.一种预防和/或治疗感染性疾病的组合物，所述感染性疾病由一种或更多种选自类鼻疽伯克霍尔德菌引起，所述组合物以权利要求1或2所述的噬菌体作为活性成分。4.一种抗生素，以权利要求1或2所述的噬菌体作为活性成分。5.一种消毒剂或清洁剂，以权利要求1或2所述的噬菌体作为活性成分。6.权...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏乾峰，王彦双，田申，罗妮妮，李雪苗，
申请(专利权)人：海南医学院，
类型：发明
国别省市：