一株铜绿假单胞菌YZ66及其在防治烟草镰刀菌根腐病和促生长中的应用制造技术

一株铜绿假单胞菌YZ66在防治烟草镰刀菌根腐病和促生长中的应用；本发明专利技术公开一种对烟草镰刀菌根腐病原具有明显拮抗效果的铜绿假单胞菌YZ66，并对其抑菌机理和促生特性进行了初步分析；该菌株对烟草主要根茎类病害抑菌谱广，主要通过菌体产生的抗生素抑制孢子萌发和菌丝生长对烟草尖孢镰刀菌和茄病镰刀菌产生较强的抑菌效果，且可促进烟株生长发育，为后续研究和田间生物防治的应用奠定基础。续研究和田间生物防治的应用奠定基础。续研究和田间生物防治的应用奠定基础。

A Pseudomonas aeruginosa yz66 strain and its application in controlling tobacco Fusarium rot and promoting growth

【技术实现步骤摘要】
一株铜绿假单胞菌YZ66及其在防治烟草镰刀菌根腐病和促生长中的应用


[0001]本专利技术属于微生物
，具体涉及一株铜绿假单胞菌YZ66及其在防治烟草镰刀菌根腐病和促生长中的应用。

技术介绍

[0002]烟草镰刀菌根腐病是由镰刀菌属病原菌(Fusarium spp.)引起的一种真菌性病害，尖孢镰刀菌(F.oxysporum)和茄病镰刀菌(F.solani)是优势致病菌，主要从烟株根部入侵，导致根部变黑，叶片变黄萎靡，维管束腐烂，最终植物整株死亡，给烟叶生产带来严重灾害(Berruezo等，2018)。生产上以化学药剂蘸根移栽和穴施药剂进行防治，但长期施用化学药剂会造成病原菌的耐药性和农药残留，给生态环境和人体健康带来负面影响(李明等，2002)。近年来，植物病害的防治已由化学防治逐渐向生物防治转变，其中以拮抗微生物或其代谢产物为核心的生物防治技术因其针对性强、可选择范围广、对人畜安全无害、对环境无污染、不易引起病原菌耐药性等特点而备受学者们关注(乔康等，2009)，利用拮抗菌防治烟草病害已有相关报道(赵誉强等，2022)，针对烟草镰刀菌根腐病生防菌研究较多的是真菌木霉菌(Trichoderma spp.)(姚晨虓等，2021)。部分研究者发现链霉菌(Streptomyces aureoverticillatus)、芽孢杆菌(Bacillus sp.)等细菌也对尖孢镰刀菌有较好防效。目前关于烟草镰刀菌根腐病生防细菌相关研究相对较少。为筛选出对烟草镰刀菌根腐病病原菌有高效拮抗效果的生防细菌，本研究以豫中和豫西烟区健康烟株根际土壤为分离来源，利用平板对峙法对分离菌株的拮抗效果进行筛选，对抑菌率较高的菌株进行抑菌谱测定、防病促生作用测定、分类鉴定以及生防机理探索，以期为烟草为烟草镰刀菌根腐病生物防治药剂研发提供理论基础。

技术实现思路

[0003]本专利技术提供一株铜绿假单胞菌YZ66及其在防治烟草镰刀菌根腐病和促生长中的应用。
[0004]本专利技术采用的技术方案为：
[0005]一株铜绿假单胞菌YZ66，所述的铜绿假单胞菌YZ66的筛选和分析的具体操作步骤如下：
[0006](1)从河南豫中和豫西烟区健康烟株根基土壤中分离纯化细菌菌株；
[0007](2)拮抗细菌的筛选；
[0008](3)拮抗细菌的抑菌谱测定；
[0009](4)拮抗菌株对烟草种子萌发及促生作用测定；
[0010](5)拮抗菌发酵滤液的抑菌活性测定；
[0011](6)拮抗菌挥发性化合物的抑菌活性测定；
[0012](7)拮抗细菌的鉴定；
[0013](8)拮抗菌抗生素合成基因检测；
[0014](9)拮抗细菌对镰刀菌根腐病的盆栽防效及生防菌促生作用测定。
[0015]一株铜绿假单胞菌YZ66在防治烟草镰刀菌根腐病和促生长中的应用。
[0016]本专利技术的有益效果是：本专利技术筛选出对烟草尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)和茄病镰刀菌(Fusariumsolani)均具有良好拮抗作用的菌株YZ66，利用分子生物学方法分别鉴定为铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa。平板抑菌试验测定表明，菌株YZ66对尖孢镰刀菌和茄病镰刀菌的抑制效率均在80％左右，对烟草疫霉菌、根串珠霉菌等其他5种烟草根茎类病害病原菌均有较强的抑制效果。促生作用测定结果表明，细菌YZ66对烟苗根系增长率可达66.96％。盆栽试验结果显示，菌株YZ66对烟草根腐病的防治效果高于85％，且能协调改善盆栽烟草的生长发育，在一定程度上增加了烟株叶面积、根长、地上和地下部鲜重具有显著的促进作用。抑菌机理研究结果表明，菌株YZ66挥发性有机化合物可通过抑制菌丝生长及孢子产量达到抑菌效果；菌株发酵滤液处理的病原菌孢子萌平均发率较对照降低了87％以上；YZ66含吩嗪
‑1‑
羧酸(Phenazine
‑1‑
carboxylic acid，PCA)合成基因。菌株YZ66对烟草镰刀菌根腐病有较好生防潜力，具有进一步开发的前景。
附图说明
[0017]图1为本专利技术的拮抗菌YZ66的抑菌谱测定结果，图1中从左到右依次为茄病镰刀菌、尖孢镰刀菌、葡萄座腔球菌、烟草疫霉菌、鸢尾丝囊霉菌、烟草白绢病菌、烟草根串珠霉、立枯丝核菌。
[0018]图2为本专利技术的拮抗菌挥发性有机化合物抑菌活性测定结果，图2中上排为尖孢镰刀菌，下排为茄病镰刀菌，左为CK，右为YZ66处理。
[0019]图3为本专利技术的基于16S rDNA构建的系统发育树。
[0020]图4为本专利技术的菌株PCA合成相关基因检测结果，图4中：M：DL2000 Marker；1
‑
4为枯草芽孢杆菌，5
‑
6为YZ66的PCA合成相关基因，7为无菌水对照。
具体实施方式
[0021]一株铜绿假单胞菌YZ66，所述的铜绿假单胞菌YZ66的筛选和分析测定的具体操作步骤如下：
[0022](1)从河南豫中和豫西烟区健康烟株根基土壤中分离纯化细菌菌株；
[0023](2)拮抗细菌的筛选；
[0024](3)拮抗细菌的抑菌谱测定；
[0025](4)拮抗菌株对烟草种子萌发及促生作用测定；
[0026](5)拮抗菌发酵滤液的抑菌活性测定；
[0027](6)拮抗菌挥发性化合物的抑菌活性测定；
[0028](7)拮抗细菌的鉴定；
[0029](8)拮抗菌抗生素合成基因检测；
[0030](9)拮抗细菌对镰刀菌根腐病的盆栽防效及生防菌促生作用测定。
[0031]一株铜绿假单胞菌YZ66在防治烟草镰刀菌根腐病和促生长中的应用。
[0032]1材料与方法
[0033]1.1供试材料
[0034]1.1.1供试土样
[0035]2021年5
‑
8月从河南许昌襄城县、三门峡卢氏县、渑池县等烟田病株周边健株根际采集根际土样82份。
[0036]1.1.2供试菌株
[0037]烟草镰刀菌根腐病病原菌尖孢镰刀菌B
‑9‑
1(Fusariumoxysporum)、茄病镰刀菌A
‑4‑
9(Fusariumsolani)，烟草黑胫病病原菌寄生疫霉烟草致病变种(烟草疫霉Phytophthoranicotianae)，烟草根黑腐病病原菌烟草根串珠霉(Thielaviopsisbasicola)，烟草白绢病菌(SclerotiumrolfsiiiSacc)，烟草立枯病病原菌立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)，鸢尾丝囊霉菌(Aphanomycesiridis)及烟草溃疡病病原菌葡萄座腔球菌(Botryosphaeriadothide)均由河南省农业科学院烟草研究所提供。
[0038]1.1.3供试烟草品种中烟100。
[0039]1.1.4供试培养基
[0040]L本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株铜绿假单胞菌YZ66，其特征在于：所述的铜绿假单胞菌YZ66的筛选和分析测定的具体操作步骤如下：（1）从河南豫中和豫西烟区健康烟株根基土壤中分离纯化细菌菌株；（2）拮抗细菌的筛选；（3）拮抗细菌的抑菌谱测定；（4）拮抗菌株对烟草种子萌发及促生作用测定；（5）拮抗菌发酵...

【专利技术属性】
技术研发人员：邱睿，李小杰，苗圃，李成军，王遂法，陈玉国，赵均，白静科，李淑君，徐敏，何雷，何晓冰，郑文明，邢国珍，刘畅，
申请(专利权)人：河南省农业科学院烟草研究所，
类型：发明
国别省市：