肿瘤原位瘤动物模型的造模方法及肿瘤原位瘤动物模型技术

本发明专利技术公开了一种肿瘤原位瘤动物模型的造模方法及肿瘤原位瘤动物模型，包括：将动物全身麻醉；对动物上靶脏器区域进行剃毛和消毒；将超声探头置于靶脏器区域，获取靶脏器和周边组织参数；基于参数，标记感兴趣的体表穿刺进针点和靶脏器穿刺点；连接体表穿刺进针点和所述靶脏器穿刺点，生成穿刺路径；使用微量注射针按照穿刺路径进行穿刺，到达靶脏器位置；将注射器内的肿瘤细胞通过微量注射针注射入靶脏器位置；通过超声实时观察肿瘤细胞注射过程，全部肿瘤细胞注射完成后旋转出针，得到肿瘤原位瘤动物模型。本发明专利技术具有创伤小、成瘤率高、恢复快、操作稳定的优势，避免了开腹、开盆、开胸等大创伤，且对周围脏器无影响，具有非常大的应用潜力。常大的应用潜力。

Modeling method of tumor in situ animal model and tumor in situ animal model

【技术实现步骤摘要】
肿瘤原位瘤动物模型的造模方法及肿瘤原位瘤动物模型


[0001]本申请涉及医药领域，尤其涉及一种肿瘤原位瘤动物模型的造模方法及肿瘤原位瘤动物模型。

技术介绍

[0002]肿瘤的有效治疗是重大医学难题。根据世界卫生组织最新发布的《世界癌症报告》显示，全球癌症负担不断增加。肿瘤的治疗因而成为医学领域探索和研究的重点。
[0003]肿瘤研究领域中公认的重要一环是能够提供研究癌变和治疗治疗的模型系统。为了评估在临床前和临床研究中癌症治疗的效果，通常使用人类肿瘤细胞系或患者源性肿瘤移植到免疫缺陷小鼠体内的肿瘤动物模型。肿瘤动物模型为临床试验提供了一个很好的替代方案，是新药品、新装备、新材料与新技术等进行临床试验前的至关重要的一步。
[0004]建立肿瘤动物模型是研究肿瘤发病机制及开展肿瘤治疗相关研究的重要手段。动物模型应该尽可能的接近人类肿瘤的自然生物学过程，观察其原位成瘤的过程及状态，为进一步研究肿瘤发生发展机制、肿瘤耐药、肿瘤侵袭转移、肿瘤微环境、抗肿瘤免疫研究等提供实验动物模型。建立良好的动物模型对于模拟人体肿瘤具有很好的替代作用，有助于开展基础研究，最关键的是，基于基础科研研究来回答一系列临床问题。
[0005]目前实验室中常用的肿瘤造模方法有自发型肿瘤动物模型、诱发型肿瘤动物模型、移植型肿瘤动物模型和转基因(基因修饰)肿瘤动物模型。其中，移植型肿瘤动物模型是目前基础研究中应用最广泛的造模方法。移植型肿瘤动物模型是指把肿瘤组织、细胞株移植到实验动物体内的荷瘤动物模型。这种模型造模成功率高，常在裸鼠、小鼠、大鼠与兔子等动物中进行应用。移植型模型根据移植瘤所在部位可分为原位移植瘤和异位移植瘤。
[0006]通过向实验动物目标脏器注射肿瘤细胞建立原位移植瘤模型，由于原位移植瘤能较好的模拟人体肿瘤生长过程，可进行肿瘤原位和转移观察，可进行基因敲除/过表达后的成瘤研究，因此在基础研究中应用非常广泛。异位移植瘤多见于在实验动物背部皮下注射一定量的肿瘤细胞形成肿瘤，皮下移植瘤操作简单容易掌握，且肿瘤体积变化易于测量，容易给予局部干预。然而异位移植瘤难以展现肿瘤原位和转移情况，缺乏肿瘤异质性。
[0007]传统的原位移植瘤造模通常采用解剖方法，如肝癌、胰腺癌、肾癌模型进行剖腹，直肠癌和结肠癌进行剖盆，甲状腺癌进行剖颈，肺癌模型进行剖胸等。然而，通过解剖动物进行原位移植瘤建立肿瘤模型的方法存在并发症较多 (如出血和感染等)、手术创伤大、术后恢复慢、手术时间长、操作复杂等多种缺陷。

技术实现思路

[0008]为克服上述传统的原位移植瘤造模方法的不足，本专利技术提供了一种肿瘤原位瘤动物模型的造模方法及肿瘤原位瘤动物模型。本专利技术提供了一种创伤小、可重复、操作简单、并发症较少和稳定性高的新方法。一方面，本专利技术可以改善传统手术造模方法的不足，另一方面，本专利技术为临床前动物实验研究提供了一种稳定可重复、成瘤效率高的原位移植瘤造
模方法，促进肿瘤研究模式动物的发展。
[0009]根据本申请实施例的第一方面，提供一种肿瘤原位瘤动物模型的造模方法，包括以下步骤：
[0010](1)将动物全身麻醉，使用动物固定器将所述动物固定；
[0011](2)对所述动物上靶脏器区域进行剃毛和消毒，铺洞巾，充分暴露操作区域；
[0012](3)将超声探头置于所述靶脏器区域，在超声实时引导下获取靶脏器和周边组织参数；
[0013](4)基于所述参数，标记感兴趣的体表穿刺进针点和靶脏器穿刺点；
[0014](5)连接所述体表穿刺进针点和所述靶脏器穿刺点，生成穿刺路径，所述穿刺路径与大血管不相交，安全路径与骨骼不相交；
[0015](7)使用微量注射针按照所述穿刺路径进行穿刺，到达靶脏器位置；
[0016](8)将注射器内的肿瘤细胞通过微量注射针注射入所述靶脏器位置；
[0017](9)通过超声实时观察肿瘤细胞注射过程，全部肿瘤细胞注射完成后旋转出针，得到肿瘤原位瘤动物模型。
[0018]进一步地，所述全身麻醉采用1
‑
1.5％戊巴比妥进行腹腔麻醉，优选剂量为 40
‑
45g/kg。
[0019]进一步地，所述参数主要包括肿瘤的参数、血管的参数、骨骼的参数以及体表的参数。
[0020]进一步地，所述肿瘤细胞的细胞量为1*104‑
1*106。
[0021]进一步地，所述超声包含二维超声和彩色多普勒超声。
[0022]进一步地，所述肿瘤细胞选自脑部肿瘤、颈部肿瘤、胸部肿瘤、腹部肿瘤、盆部肿瘤、皮肤肿瘤、四肢和骨关节肿瘤。
[0023]进一步地，所述肿瘤细胞的制备，包括如下步骤：
[0024]1)在37℃培养箱中培养肿瘤细胞；
[0025]2)然后使用胰酶对所述肿瘤细胞进行消化，加入带血清的培养基停止消化；
[0026]3)使用移液枪吹打所述肿瘤细胞，将消化好的肿瘤细胞收集入离心管；
[0027]4)将所述离心管内的肿瘤细胞放入离心机进行离心；
[0028]5)离心结束后取出所述离心管，弃上清液，加入无血清培养基进行重悬；
[0029]6)将所述离心管置于冰上，向所述离心管内加入Matrige胶，再次重悬混匀，获得最终的肿瘤细胞。
[0030]进一步地，连接所述体表穿刺进针点和所述靶脏器穿刺点，生成穿刺路径，包括：
[0031]连接体表穿刺进针点和靶脏器穿刺点，生成多条基准路径；
[0032]然后由至少一个基准路径平移出满足给定条件的N个安全路径，并删掉放弃路径，其中骨骼相交或与血管相交的安全路径为放弃路径；
[0033]将N个安全路径输出为M个穿刺路径，其中，N≥M。
[0034]进一步地，所述动物选自啮齿类动物、兔、犬、猫、非人灵长类动物、鸡、猪和鱼类中的一种。
[0035]根据本申请实施例的第二方面，提供上述的造模方法制备的肿瘤原位瘤动物模型。
[0036]本专利技术所述超声引导下原位移植瘤肿瘤造模方法具有创伤小，造模方法稳定，操作简单，可重复等的巨大优势，适合原位移植瘤模型的大范围推广应用。
[0037]本专利技术还提供所述造模方法对应的动物模型。优选的，其可以为啮齿类(包括小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠)、兔、犬、猫、非人灵长类(绒猴、松鼠猴、食蟹猴和狒狒)、鸡、小型猪以及鱼类等实验动物。
[0038]目前用于构建原位移植瘤模型的动物以鼠、兔和猴为主。实验动物要考虑的因素大概有：容易饲养，繁殖率高，价格低廉，易于获得，便于操作，遗传上有较高的纯和度，代谢类型、生理病理尽量与人类接近等。其中，小白鼠在这些方面的优势无一例外都很明显，是最常用于制作肿瘤造模的实验动物。本专利技术所述方法制备的动物原位移植瘤造模方法能更好的模拟人体肿瘤的状态，为服务临床打好基础，实现了微创、操作简单、模型稳定的优势。
[0039]本专利技术还提供所述造模方法对应的靶脏器优选为皮肤、口腔、甲状腺、乳腺、睾丸、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肿瘤原位瘤动物模型的造模方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将动物全身麻醉，使用动物固定器将所述动物固定；(2)对所述动物上靶脏器区域进行剃毛和消毒，铺洞巾，充分暴露操作区域；(3)将超声探头置于所述靶脏器区域，在超声实时引导下获取靶脏器和周边组织参数；(4)基于所述参数，标记感兴趣的体表穿刺进针点和靶脏器穿刺点；(5)连接所述体表穿刺进针点和所述靶脏器穿刺点，生成穿刺路径，所述穿刺路径与大血管不相交，安全路径与骨骼不相交；(7)使用微量注射针按照所述穿刺路径进行穿刺，到达靶脏器位置；(8)将注射器内的肿瘤细胞通过微量注射针注射入所述靶脏器位置；(9)通过超声实时观察肿瘤细胞注射过程，全部肿瘤细胞注射完成后旋转出针，得到肿瘤原位瘤动物模型。2.根据权利要求1所述的造模方法，其特征在于，所述全身麻醉采用1
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1.5％戊巴比妥进行腹腔麻醉，优选剂量为40
‑
45g/kg。3.根据权利要求1所述的造模方法，其特征在于，所述参数主要包括肿瘤的参数、血管的参数、骨骼的参数以及体表的参数。4.根据权利要求1所述的造模方法，其特征在于，所述肿瘤细胞的细胞量为1*104‑
1*106。5.根据权利要求1所述的造模方法，其特征在于，所述超声包含二维超声和彩色多普勒超声。6.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢丽婷，蒋天安，赵齐羽，许敏，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：