本发明专利技术涉及一种低毒高效的普尔那总黄酮提取物及其应用，属于中医药技术领域。本发明专利技术低毒高效的普尔那总黄酮提取物采用半仿生提取法，依次经过胃蛋白酶和胰蛋白酶酶解后制得。本发明专利技术的普尔那总黄酮提取物的成分种类更少，但是却表现出了毒性更低、抗炎活性更佳的优良效果，采用传统溶剂提取法制备的普尔那总黄酮在200μg/mL时可致斑马鱼畸形，而本发明专利技术的普尔那总黄酮提取物在400μg/mL时斑马鱼才出现畸形现象，并且当两种普尔那总黄酮的浓度相同时，本发明专利技术的普尔那总黄酮提取物的抗炎活性更佳。将本发明专利技术的普尔那总黄酮提取物应用于抗炎药物的制备，具有良好的应用开发前景。具有良好的应用开发前景。具有良好的应用开发前景。
【技术实现步骤摘要】
一种低毒高效的普尔那总黄酮提取物及其应用
[0001]本专利技术涉及一种低毒高效的普尔那总黄酮提取物及其应用，属于中医药
技术介绍
[0002]藏药普尔那，又名普尔芒嘎保、普尔芒蒿、结血蒿，是菊科植物毛莲蒿的地上部分，其味苦、辛，性寒，具有清热解毒、消肿消炎、杀虫利湿等功效，藏医临床常用来治疗虫病、脑炎、皮肤病、温毒疔毒疮、咽喉病等，现代研究也用于治疗妇科疾病，如乳腺炎、痛经等。普尔那中主要含有黄酮类、挥发油、香豆素、有机酸、甾体类等多种成分，具有抗寄生虫、抗炎、抗肿瘤、抑菌等作用。
[0003]许多研究表明黄酮类化合物具有显著的抗氧化、清除氧自由基作用、扩张心血管作用、降血脂、阻断动脉粥样硬化、调节免疫机能、抗炎抗病毒、利胆、强心、镇静镇痛和抗肿瘤等作用，因而近些年来关于黄酮类化合物分离提取的研究较多。常见的提取黄酮类化合物的方法有溶剂提取法、酶法、超声波提取法、半仿生提取法等。溶剂提取法是传统的黄酮提取方法，主要是采用有机溶剂乙醇进行提取；酶法提取则是根据植物药材细胞壁的构成，利用酶反应所具有的高度专一性的特点，选择相应的酶，将细胞壁的组成成分水解或降解，使有效成分充分暴露出来，目前使用较多的酶是纤维素酶和果胶酶；半仿生提取法是将整体药物研究法与分子药物研究法相结合，模拟口服给药后药物经胃肠道转运吸收的环境，为经消化道给药的中药制剂设计的一种新的提取工艺。
[0004]藏药普尔那中黄酮含量丰富，拉萨产地普尔那总黄酮含量达276.62mg/g，但普尔那总黄酮的成分组成和抗炎活性仍未见报道。本专利技术通过对比半仿生提取法与传统溶剂提取法制备的普尔那总黄酮的成分、毒性和活性差异，并利用斑马鱼模型探讨了普尔那总黄酮的抗炎活性，得到了一种低毒高效的普尔那总黄酮提取物。
技术实现思路
[0005]针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种低毒高效的普尔那总黄酮提取物及其应用。
[0006]术语说明：
[0007]dpf(days post fertilization)：生物学专用术语，指受精后的天数。如3dpf指受精后3天的胚胎。
[0008]本专利技术的技术方案如下：
[0009]一种低毒高效的普尔那总黄酮提取物，所述普尔那总黄酮提取物采用半仿生提取法，依次经过胃蛋白酶和胰蛋白酶酶解后制得。
[0010]本专利技术中，所述普尔那总黄酮提取物中共检测到185种成分，具体成分信息详见表1。
[0011]根据本专利技术优选的，所述半仿生提取法包括如下步骤：
[0012](1)取普尔那样品粉末，分散于超纯水中，加入胃蛋白酶，胃蛋白酶与底物的比为10000～15000U/g，调节溶液pH值至3.0～3.5，于37℃条件下超声酶解5～10h，终止反应，离心取上清；
[0013](2)收集步骤(1)离心后的药渣，分散于超纯水中，加入胰蛋白酶，胰蛋白酶与底物的比为10000～15000U/g，调节溶液pH值至7.0～7.5，于37℃条件下超声酶解5～10h，终止反应，离心取上清；
[0014](3)将步骤(1)和步骤(2)得到的上清混合，减压浓缩，得到浸膏；
[0015](4)将步骤(3)的浸膏用超纯水溶解制成浓度为0.8
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1.6mg/mL的上样液，采用大孔树脂纯化，浓缩干燥后即得普尔那总黄酮提取物。
[0016]优选的，步骤(1)中所述普尔那样品粉末于超纯水中的底物质量浓度为0.04～0.08g/mL。
[0017]优选的，步骤(1)中胃蛋白酶与底物的比为10000U/g。
[0018]优选的，步骤(1)中调节溶液pH值采用1M HCl溶液。
[0019]优选的，步骤(1)中调节溶液pH值至3.0。
[0020]优选的，步骤(1)中于37℃条件下超声酶解5h。
[0021]优选的，步骤(1)中终止反应是100℃水浴10～15min；进一步优选为100℃水浴10min。
[0022]优选的，步骤(2)中药渣于超纯水中的底物质量浓度为0.04～0.08g/mL。
[0023]优选的，步骤(2)中胰蛋白酶与底物的比为10000U/g。
[0024]优选的，步骤(2)中调节溶液pH采用1M NaOH溶液。
[0025]优选的，步骤(2)中调节溶液pH值至7.5。
[0026]优选的，步骤(2)中终止反应是100℃水浴10～15min；进一步优选为100℃水浴10min。
[0027]优选的，步骤(4)中所述大孔树脂纯化的方法为：大孔树脂湿法装柱，径高比为1：15～18，以1.0
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4.0mL/min速度上样3BV的上样液，先以超纯水洗脱1BV，随后再以体积百分比为70～80％的乙醇溶液洗脱3BV，收集洗脱液；进一步优选的，所述上样液的上样速度为1.0mL/min；所述乙醇溶液的体积百分比为70％。
[0028]优选的，步骤(4)中所述上样液的浓度为1.2mg/mL。
[0029]优选的，步骤(4)中所述大孔树脂型号为DA
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201
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CIV大孔树脂。
[0030]本专利技术中的普尔那总黄酮提取物具有低毒高效的特点：采用传统溶剂提取法制备的普尔那总黄酮在200μg/mL时可致斑马鱼畸形，400μg/mL时可致斑马鱼全部死亡，而本专利技术的普尔那总黄酮提取物在400μg/mL时斑马鱼才出现畸形现象，800μg/mL时斑马鱼全部死亡，25μg/mL时在硫酸铜诱导的斑马鱼炎症模型中表现出抗炎活性，并在25、50、100和200μg/mL时均具有抗炎活性；并且在相同浓度条件下，本专利技术的普尔那总黄酮提取物的抗炎效果要显著优于采用传统溶剂提取法制备的普尔那总黄酮。
[0031]上述普尔那总黄酮提取物在制备抗炎药物中的应用。
[0032]一种抗炎药物，包括药学上有效剂量的上述普尔那总黄酮提取物。
[0033]根据本专利技术优选的，所述抗炎药物还包括药学上可接受的载体或辅料。
[0034]本专利技术的技术特点和有益效果：
[0035]1.本专利技术提供了一种普尔那总黄酮提取物，普尔那总黄酮提取物中共含有185种成分，其中相对含量大于1％的有20种。本专利技术的普尔那总黄酮提取物是采用半仿生提取法制备，与传统的溶剂提取法相比，传统溶剂提取法制备的普尔那总黄酮中含有194种成分，其中相对含量大于1％的有24种，传统溶剂法制备的普尔那总黄酮提取物与本专利技术的普尔那总黄酮提取物在成分组成及成分相对含量上均存在差异。
[0036]2.本专利技术的普尔那总黄酮提取物的毒性更低：采用传统溶剂提取法制备的普尔那总黄酮在200μg/mL时可致斑马鱼畸形，400μg/mL时可致斑马鱼全部死亡，而本专利技术的普尔那总黄酮提取物在400μg/mL时斑马鱼才出现畸形现象，800μg/mL时斑马鱼全部死亡。
[0037]3.本专利技术的普尔那总黄酮提取物的抗炎活性更佳：在硫酸铜诱导的斑马鱼炎症模型中，传统溶剂提取法制备本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种低毒高效的普尔那总黄酮提取物，其特征在于，所述普尔那总黄酮提取物采用半仿生提取法，依次经过胃蛋白酶和胰蛋白酶酶解后制得。2.如权利要求1所述的普尔那总黄酮提取物，其特征在于，所述普尔那总黄酮提取物中共检测到185种成分。3.如权利要求1所述的普尔那总黄酮提取物，其特征在于，所述半仿生提取法包括如下步骤：(1)取普尔那样品粉末，分散于超纯水中，加入胃蛋白酶，胃蛋白酶与底物的比为10000～15000U/g，调节溶液pH值至3.0～3.5，于37℃条件下超声酶解5～10h，终止反应，离心取上清；(2)收集步骤(1)离心后的药渣，分散于超纯水中，加入胰蛋白酶，胰蛋白酶与底物的比为10000～15000U/g，调节溶液pH值至7.0～7.5，于37℃条件下超声酶解5～10h，终止反应，离心取上清；(3)将步骤(1)和步骤(2)得到的上清混合，减压浓缩，得到浸膏；(4)将步骤(3)的浸膏用超纯水溶解制成浓度为0.8
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1.6mg/mL的上样液，采用大孔树脂纯化，浓缩干燥后即得普尔那总黄酮提取物。4.如权利要求3的普尔那总黄酮提取物，其特征在于，步骤(1)满足以下条件之一项或多项：i.所述普尔那样品粉末于超纯水中的底物质量浓度为0.04～0.08g/mL；ii.胃蛋白酶与底物的比为10000U/g；iii.调节溶液pH值采用1M HCl溶液；iv.调节溶液pH值至3.0；v.于37℃条件下超声酶解5h；vi.终止反应是100℃水浴10～15min；进一步优选为100℃水浴10min。5.如权利要求3的普尔那总黄酮提取物，其特征在于，步骤(2)满...
【专利技术属性】
技术研发人员：米玛，夏青，陈静，张云，刘可春，张姗姗，张华铮，周超艺，昂文索南，
申请(专利权)人：山东省科学院生物研究所，
类型：发明
国别省市：
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