蒿属植物花粉过敏原、应用及试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一种蒿属植物花粉过敏原，属于生物医药技术领域，所述蒿属植物花粉过敏原为热休克蛋白70kDa，所述热休克蛋白70kDa的氨基酸序列如SEQNO.1所示，编码所述热休克蛋白70kDa的基因的碱基序列如SEQNO.2所示。本发明专利技术提供花粉过敏的新的检测基因，进一步完善了现有花粉过敏原数据库，进一步诠释了花粉过敏的机制；提供了筛选花粉过敏的生物样本的方法、筛选花粉过敏的生物样品的系统，用于筛选花粉过敏的生物样品的试剂盒以及筛选治疗或预防花粉过敏的药物的方法；所提供的的试剂盒可用于临床对花粉过敏基因的检测，为花粉过敏的诊断提供了快速、可靠、准确的新途径。准确的新途径。准确的新途径。

【技术实现步骤摘要】
蒿属植物花粉过敏原、应用及试剂盒


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种蒿属植物花粉过敏原、应用及试剂盒。

技术介绍

[0002]花粉致敏物质的分离鉴定在过敏性疾病的预防和治疗非常重要。掌握过敏原可以用于病人的过敏原的筛选鉴定，过敏原特异性免疫治疗，抗过敏药物的开发和药效的判断，过敏原蛋白刺激产生的抗体可以用于疾病的诊断。
[0003]目前在花粉抗原数据库中艾蒿(Artemisia vulgaris)报告有6种花粉过敏蛋白，分子量分别为10kDa(Art v5)，12kDa(Art v3)，14kDa(Art v4)，20kDa(Art v2)，28kDa(Art v1)和44kDa(Art v6)，青蒿(Artemisia annua)有24
‑
26kDa的Art an1和62kDa的Art an7，而在其他蒿中如加州蒿(Artemisia californica)和冷蒿(Artemisia frigida)等则只报告一种和Art 1相似的24
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26kDa的具有丰富聚脯氨酸结构域的Defensin样蛋白。
[0004]在临床上病人血清抗体和蒿花粉提取物反应的过敏源检测中发现，除了以上报道的相应分子量的蛋白以外，在大多数的蒿花粉过敏病人的抗体还检测到一强反应的分子量在70kDa的蛋白。通过对这一蛋白的质谱分析和对比青蒿蛋白的数据库，发现70kDa是热休克蛋白70(heat shock protein 70，HSP70)。HSP70的功能被报道在各种应激反应起重要的作用，但没有作为蒿过敏成分的报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种新的70kDa的HSP70，其是沙蒿花粉过敏的主要过敏原之一，并按照国际花粉数据库命名原则将其命名为Art s8。Art s8作为新的过敏蛋白，可以应用于花粉引起的过敏性鼻炎、过敏性结膜炎和哮喘等变应性过敏性疾病靶目标的相关花粉过敏病人的筛查、诊断、脱敏治疗、诊断试剂、新的治疗药物、治疗方法和保健食品的开发应用，以解决上述
技术介绍
中存在的至少一项技术问题。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采取了如下技术方案：
[0007]一方面，本专利技术提供一种蒿属植物花粉过敏原，所述蒿属植物花粉过敏原为热休克蛋白70kDa，所述热休克蛋白70kDa的氨基酸序列如SEQ NO.1所示，编码所述热休克蛋白70kDa的基因的碱基序列如SEQ NO.2所示。
[0008]第二方面，本专利技术提供如上所述的花粉过敏原在花粉过敏诊断中的应用。
[0009]第三方面，本专利技术提供如上所述的花粉过敏原在制备检测花粉过敏试剂中的应用。
[0010]第四方面，本专利技术提供如上所述的花粉过敏原在制备花粉过敏检测试剂盒中的应用。
[0011]第五方面，本专利技术提供如上所述的花粉过敏原在制备用于治疗花粉过敏的药物中的应用。
[0012]第六方面，本专利技术提供如上所述的花粉过敏原在花粉过敏病人筛查中的应用。
[0013]第七方面，本专利技术提供如上所述的花粉过敏原在花粉过敏诊断中的应用。
[0014]第八方面，本专利技术提供如上所述的花粉过敏原在制备用于预防花粉过敏的保健食品中的应用。
[0015]第九方面，本专利技术提供如上所述的花粉过敏原在制备用于预防花粉过敏的抗体中的应用。
[0016]第十方面，本专利技术提供一种花粉过敏检测试剂盒，所述花粉过敏检测试剂盒包括如上所述的花粉过敏原。
[0017]本专利技术有益效果：提供花粉过敏的新的检测基因，进一步完善了现有花粉过敏原数据库，进一步诠释了花粉过敏的机制；提供了筛选花粉过敏的生物样本的方法、筛选花粉过敏的生物样品的系统，用于筛选花粉过敏的生物样品的试剂盒以及筛选治疗或预防花粉过敏的药物的方法；所提供的的试剂盒可用于临床对花粉过敏基因的检测，为花粉过敏的诊断提供了快速、可靠、准确的新途径。
[0018]本专利技术附加的方面和优点将在下面的描述中部分给出，这些将从下面的描述中变得容易理解，或通过本专利技术的实践了解到。
附图说明
[0019]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0020]图1为本专利技术实施例所述的过敏原Art s8电泳检测结果图。
[0021]图2为本专利技术实施例所述的花粉过敏蛋白检测结果示意图。
具体实施方式
[0022]1、蒿花粉蛋白提取：青蒿和沙蒿花粉在花粉季节分别取自北京和内蒙古包头。取2g花粉悬浮于35ml的PBS中，4℃振荡15min,14000g离心后，收集上清液，0.22
‑
μM过滤器过滤(微孔),用BCA法测定蛋白提取物的浓度。青蒿和沙蒿花粉在秋天取自包头地区。将花粉浸泡在PBS，旋转混合24小时，离心分离上清，用BCA进行蛋白定量。
[0023]2、蛋白组分鉴定：青蒿和沙蒿总蛋白用12％SDS
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PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)进行蛋白电泳并对胶进行银染色(试剂来源：Skim Milk,BD,Difco公司；PAGE凝胶银染试剂盒，索来宝公司)，展现提取液中不同分子量的蛋白图谱(如图1所示)。
[0024]3、重要致敏蛋白的确定：1).采集数份血清样品，有蒿过敏的临床表现，并且已通过血清学检测及点刺手段证明对黄花蒿/大籽蒿/艾蒿过敏呈明显阳性，2)用上述沙蒿提取液和血清样品进行Western Blot试验，转到PVDF膜，用花粉过敏病人血清进行反应，获得不同的条带图谱(图2)。(试剂来源：Pierce BCA
TM Protein Assay试剂盒、Thermo公司，ECL plus western blotting试剂盒、GE Healthcare公司，PVDF膜,默克merck millipore公司，SDS
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PAGE凝胶制备试剂盒，索来宝公司)。
[0025]4、花粉过敏成分的分离和质谱分析：将与病人血清结合的花粉蛋白在SDS
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PAGE电
泳分离后将相应分子量的胶切除，用胰蛋白酶进行消化，MS/MS氨基酸测序，并对比蒿基因库(uni_Artemisia Artemisia(68,182sequences；25,811,778residues)。基因库检索表明沙蒿花粉70kDa的过敏蛋白是热休克蛋白(Heat shock protein，分子量：71,354)，其氨基酸序列和核酸序列分别如SEQ NO.1和SEQ NO.2所示。
[0026]综上所述，本专利技术实施例提供了花粉过敏原抗原70kDa蛋白的核酸分子1800个碱基序列，命名为Art s8，其编码植物Heat shockprotein70.提供了花粉过敏源抗原70kDa蛋白的600个氨基酸的蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蒿属植物花粉过敏源，其特征在于，所述蒿属植物花粉过敏源为热休克蛋白70kDa，所述热休克蛋白70kDa的氨基酸序列如SEQ NO.1所示；编码所述热休克蛋白70kDa的基因的碱基序列如SEQ NO.2所示。2.如权利要求1所述的花粉过敏源在花粉过敏诊断中的应用。3.如权利要求1所述的花粉过敏源在制备检测花粉过敏试剂中的应用。4.如权利要求1所述的花粉过敏源在制备花粉过敏检测试剂盒中的应用。5.如权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：欧阳昱晖，张罗，许昭俊，杨军，
申请(专利权)人：北京市耳鼻咽喉科研究所北京市耳鼻咽喉头颈外科研究中心，
类型：发明
国别省市：