靶向黏附分子的异质型CIC细胞模型及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种靶向N

【技术实现步骤摘要】
靶向黏附分子的异质型CIC细胞模型及其制备方法


[0001]本专利技术属于生物
，涉及一种靶向黏附分子(N
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cadherin或β
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catenin基因)的异质型CIC(heterotypic cell
‑
in
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cell)细胞模型及其制备方法。

技术介绍

[0002]Cell
‑
in
‑
cell(简称：CIC)结构是指一个或多个活细胞存在于另一个细胞内部形成的细胞叠套结构，外部细胞(靶细胞)的细胞核被内部细胞(效应细胞)挤压为新月形，整体形态特征似鸟眼。根据参与形成的细胞种类，分为同质型CIC，即来源相同的肿瘤或上皮细胞之间形成的CIC结构；异质型CIC，即来源不同的细胞之间形成的CIC结构，常见于免疫细胞进入肿瘤细胞内部形成的CIC结构。
[0003]异质型CIC结构广泛地形成于多种肿瘤细胞，如黑色素瘤、胃癌、唾液腺导管癌、乳腺癌、肝癌等肿瘤细胞均可内化免疫细胞。各种正常组织细胞也可作为靶细胞，如人柱状上皮细胞、肝细胞等。多种免疫细胞可参与形成异质型CIC结构，如中性粒细胞、NK细胞、T淋巴细胞、LAK细胞、B细胞等。异质型CIC结构中靶细胞与效应细胞复杂的关系与其多样化的生物学功能息息相关。
[0004]异质型CIC结构具有非常重要的生物学意义，如胸腺孵育功能：淋巴细胞进入胸腺孵育细胞后发育为成熟T细胞后逸出；免疫逃逸作用：NK细胞进入肿瘤细胞内部后回吞自身分泌的颗粒酶B而死亡，肿瘤细胞实现免疫逃逸；免疫调控：肝细胞内化CD4+T细胞并选择性的杀死调节性T细胞而调控免疫细胞的相对数量实现免疫系统稳态调控。
[0005]异质型CIC结构的形成涉及靶细胞和效应细胞这两类细胞间的相互作用，目前的研究揭示了一些与异质型CIC形成相关的基因，但都只适用于特定的两种细胞间的异质型CIC形成。如人表皮癌细胞A431内化自然杀伤细胞NK92需要A431细胞表达埃兹蛋白Ezrin和E钙粘蛋白E
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cadherin。抗体抑制人膀胱癌细胞MKN
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45的粘附分子ICAM
‑
1、CD62L、sLewis A、以及主要组织相容性复合物(MHC class I)和CD8均可抑制MKN
‑
45细胞与HOZOT细胞(一种调节性T细胞)的异质型CIC形成。胸腺哺育细胞(thymic nurse cells，TNC)选择性地内化αβTCR
lo
CD
4+
CD
8+
双阳性的胸腺细胞(thymocytes)，并且内部胸腺细胞的存活需要MHC、Bcl
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2、IL
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1β。包括上述报道在内的关于异质型CIC研究都只描述了上皮来源的细胞与免疫细胞形成异质型CIC结构对于某些基因的依赖性，只有相关性研究而缺乏一定的机制探究以及靶向特定基因对异质型CIC的调控。
[0006]目前的研究尚缺乏靶向特定基因可控地调控异质型CIC形成的模型。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的是提供一种靶向N
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cadherin或β
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catenin的异质型CIC细胞模型及其制备方法。
[0008]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0009]第一方面，本专利技术要求保护一种靶向N
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cadherin或β
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catenin的异质型Cell
‑
in
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cell(简称：CIC)细胞模型的制备方法，是通过调控作为靶细胞的肿瘤细胞中N
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cadherin或β
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catenin基因的表达来制备得到异质型CIC细胞模型。
[0010]其中，所述靶细胞为肝癌细胞PLC/PRF/5。所述效应细胞为免疫细胞CCRF
‑
CEM。
[0011]进一步地，所述异质型CIC细胞模型包括：抑制异质型CIC细胞模型、以及诱导异质型CIC细胞模型。
[0012]所述制备方法可分为如下方法A或方法B：
[0013]方法A：制备抑制异质型CIC细胞模型的方法，可包括如下步骤：抑制所述靶细胞中N
‑
cadherin或β
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catenin基因的表达。
[0014]方法B：所述方法为制备诱导异质型CIC细胞模型的方法，可包括如下步骤：使所述靶细胞中过量表达N
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cadherin或β
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catenin基因。
[0015]更进一步地，在所述方法A中，所述靶细胞可为N
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cadherin或β
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catenin基因有效表达的细胞(如通过Western blot检测出N
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cadherin和β
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catenin蛋白的表达量比对照野生型细胞的多)。
[0016]在所述方法B中，所述靶细胞可为N
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cadherin或β
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catenin基因表达缺失或功能突变的细胞(如通过Western blot检测到N
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cadherin和β
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catenin蛋白的表达比对照野生型细胞的少)。
[0017]更进一步地，在所述方法A中，所述“抑制靶细胞中N
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cadherin或β
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catenin基因的表达”可通过任何能够实现这一目的的技术手段实现，如通过小干扰RNA(siRNA)降低N
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cadherin或β
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catenin基因在所述靶细胞中的表达；或通过CRISPR
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Cas9技术敲除N
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cadherin或β
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catenin基因在所述靶细胞中的表达；或通过N
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cadherin或β
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catenin蛋白的封闭性抗体抑制N
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cadherin或β
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catenin蛋白的活性和功能。
[0018]在本专利技术的具体实施中，在所述方法A中，抑制靶细胞中N
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cadherin或β
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catenin基因的表达是通过siRNA实现的。其中，合成siRNA序列靶向的N
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cadherin基因序列为CAACAGGGAGCAAGGGGAGCTT；合成siRNA序列靶向的β
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catenin基因序列为ACCACCAGAGAAGGAgCGGGTT。
[0019]在所述方法B中，在靶细胞中过量表达N
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cadherin或β
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catenin基因是通过向靶细胞中导入N
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cadherin或β
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种异质型CIC细胞模型的制备方法，其特征在于，通过调控外部靶细胞中N
‑
cadherin或β
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catenin基因的表达来制备得到所述异质型CIC细胞模型。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述靶细胞为肝癌细胞，所述效应细胞为免疫细胞。3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法分为如下方法A或方法B：方法A：抑制所述靶细胞中N
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cadherin或β
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catenin基因的表达，从而制得抑制异质型CIC细胞模型；方法B：使所述靶细胞中过量表达N
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cadherin或β
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catenin基因，从而制得诱导异质型CIC细胞模型。4.根据权利要求1
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3任意所述的制备方法，其特征在于，在所述方法A中，所述靶细胞为N
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cadherin或β
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catenin基因有效表达的细胞；在所述方法B中，所述靶细胞为N
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cadherin或β
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catenin基因表达缺失或功能突变的细胞。5.根据权利要求4任意所述的制备方法，其特征在于，在所述方法A中，所述靶细胞为N
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cadherin或β
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catenin基因高表达的细胞系或单克隆细胞；在所述方法B中，所述靶细胞为N
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cadherin或β
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catenin基因低表达的细胞系或单克隆细胞。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，在所述方法A中，抑制所述靶细胞中N
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cadherin或β
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catenin基因的表达，采用RNA干扰技术、或敲除/敲低、或通过封闭...

【专利技术属性】
技术研发人员：‑，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：