用于特异性识别大豆抗原β-伴大豆球蛋白的核酸适配体制造技术

本发明专利技术提供了一种用于识别大豆抗原β

【技术实现步骤摘要】
用于特异性识别大豆抗原
β
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伴大豆球蛋白的核酸适配体


[0001]本专利技术涉及一种核酸适配体，尤其涉及用于特异性识别大豆抗原β
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伴大豆球蛋白的核酸适配体。

技术介绍

[0002]大豆种子蛋白含量很高，栽培种一般为38％左右，野生大豆和半野生大豆可高达50％左右。从氨基酸组成以及必需氨基酸的含量来分析，大豆蛋白是为数不多的可取代动物蛋白的营养佳品之一。但是，大豆中含有胰蛋白酶抑制因子、凝集素、异黄酮、大豆抗原等多种抗营养因子。其中大豆抗原是指能大豆中引起人及幼龄动物发生过敏反应的一类蛋白，阻碍了大豆蛋白在食品及饲料行业中的广泛应用。特别是，畜禽生产中仔猪和犊牛等幼龄动物易因摄入含有大豆的日粮后引起腹泻、生长受阻、肠粘膜细胞增生等过敏反应。因而寻求准确、简单、成本低，快速检测大豆抗原蛋白的方法对于评价食品及饲料安全性有着重要的现实意义。
[0003]已有的研究表明，大豆蛋白根据沉降系数的不同分为2S、7S、11S和15S球蛋白，其中7S和11S球蛋白约占大豆蛋白总含量的87％。7S球蛋白主要包括β
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伴大豆球蛋白、γ
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伴大豆球蛋白和碱性7S球蛋白。其中β
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伴大豆球蛋白是主要的大豆抗原之一。β
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伴大豆球蛋白占大豆7S球蛋白的50％以上，由三种不同理化性质的亚单位组成：α
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(76kDa)、α(72kDa)和β(54kDa)。
[0004]目前，检测大豆抗原蛋白的方法主要有SDS
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PAGE方法、酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫印迹及高效液相色谱法。其中SDS
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PAGE法只能定性分析，结果不易重复；蛋白质免疫印迹的检测手段具备一定的准确性，但是在试验的过程中需要消耗的时间比较长，并且试验成本比较大，因此在一些常规的生产检测中受到了限制；高效液相色谱法在使用上比较消耗时间并且仪器相对昂贵，不适合实际生产中的应用。而酶联免疫吸附试验(ELISA)，可进行定性或定量分析，具备操作简单、快速、适于批量检测等优点已得到了广泛的认可，但该方法具有不可规避的缺点：抗体血清制备复杂、不同实验室之间不能参比、灵敏度和准确度低。因此，以上方法均具有一定的高效性和敏感性，但各自缺点明显，特别是费用高，耗时长，不适于生产中大量样品的快速分析，都不适合于食品及饲料行业的大批量检测。
[0005]Hongmin Jia等采用高效液相色谱法分析大豆β
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伴大豆球蛋白中的抗原表位Gly m 5.0101的含量，虽具有精确度高、可批量检测等特点，但在实际使用上消耗时间过长且仪器相对昂贵，不适合实际操作。
[0006]专利CN 104897902 A等采用多克隆抗体血清的间接Elisa方法分析大豆β
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伴大豆球蛋白的含量，该方法虽因具备操作简单、快速、适于批量检测等优点已得到了广泛的认可，但该方法同时具有不可规避的缺点：抗体血清需重复制备、不同实验室之间不能参比、灵敏度和准确度低等。
[0007]专利CN101441222A公开了一种检测β
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伴大豆球蛋白的单克隆抗体及其试剂盒方
法，该方法采用抗原表位为PRPQHPERE的氨基酸序列为基础通过免疫得到单克隆抗体并进一步开发β
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伴大豆球蛋白的检测方法。该方法虽据具有特异性强、灵敏度高等特点，但仍无法避免抗体血清制备复杂、不同实验室之间不能参比的缺点。
[0008]王寅等使用抗原
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抗体试剂盒(Elisa法)检测大豆蛋白产品中β
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伴大豆球蛋白等抗原蛋白的含量。研究结果发现产品烘干温度过高、烘干时间过长时会发生蛋白质变性和美拉德反应，造成检测时β
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伴大豆球蛋白等抗原蛋白的真实含量检测不准确，造成抗原
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抗体方法检测出现“假阴性”等现象。
[0009]李德发院士曾于2018年饲料预消化营养论坛作题为《大豆抗营养因子研究进展》的报告。其中提到β
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伴大豆球蛋白亚基的含量变异最大，针对亚基的抗原位点制备得到的单抗所建立ELISA检测方法，其测定结果可能与理论值出入较大。
[0010]基于以上现状，寻求一种针对大豆抗原蛋白的准确性高、操作简单快速、成本低的检测方法对于评价食品及饲料安全性已成为行业发展亟需。而区别于单克隆抗体和双克隆抗体检测的核酸适配体可以通过其复杂的空间结构具有更高亲和力、更具特异性地结合靶标分子的能力。特别是，核酸适配体的二级结构多种多样，如发夹、茎、环、凸起、G
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四链体等等，而抗体仅含α
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螺旋和β
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折叠；此外，抗体是基于“锁
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钥”模型结合在抗原决定簇上，其亲和力取决于抗原决定簇的识别数量，而核酸适配体则是基于三维构型从表面来识别靶标，且其多价适配体可进一步增强亲和能力，因而核酸适配体结合靶标的能力优于抗体，其与靶标的亲和常数(Kd)可低至nmol甚至是pmol水平。由于核酸适配体是通过化学方法合成，且易于修饰，因此可以在一定程度上实现规模化，同时不同批次之间也可以保持结构和性质一致；核酸适配体不需要经过体内免疫获得，生产过程简便，可以减少实验动物的消耗，这使得其成本低廉；经过化学合成的核酸适配体不易受病毒和细菌的污染，且在极端温度和酸碱度条件下不容易被分解。目前已经有大量能识别不同靶标的核酸适配体被筛选出来，可以选择性地结合特定蛋白、细胞、甚至是单个氨基酸并应用于检测领域。
[0011]参考文献:
[0012][1]田琨,et al.,大豆分离蛋白结构与性能.化学进展.2008,20(4):565
‑
573.
[0013][2]Xiaoqun M,Donghai W,and Xiuzhi S.Physicochemical properties ofβandα'αsubunits isolated from soybeanβ
‑
conglycinin.J Agric Food Chem,2011,59(4):1217
‑
1222.
[0014][3]Hongmin J,Tianjiao Z,Hong Z,et al.Quantification of Gly m 5.0101in soybean and soy products by Liquid Chromatography
‑
Tandem Mass Spectrometry.Molecules,2019,24:1
‑
15.
[0015][4]CN 104897902 A.一种大豆抗原β
‑
conglycinin的检测方法.
[0016][5]CN 101441222 A.检测β伴大豆球蛋白的方法及其专用抗体与试剂盒.
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于识别大豆抗原β
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伴大豆球蛋白的核酸适配体，其特征在于，所述适配体具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。2.如权利要求1所述的核酸适配体，其特征在于，所述适配体的一端标记有特定的生物大分子。3.如权利要求2所述的核酸适配体，其特征在于，所述生物大分子是在所述核酸适配体的5
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端结合作为标记物。4.如权利要求3所述的核酸适配体，其特征在于，所述标记物为生物素、藻红蛋白、亲和素。5.一种使用权利要求1
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4中任一项所述的核酸适配体识别大豆抗原β
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伴大豆球蛋白的方法。6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法包括将权利要求1
‑
4中任一项所述的核酸适配体或包含权利要求1
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4中任一项所述的核酸适配体的产品，例如荧光传感器，与待检测样接触，所述待检测样优选...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋鹏，马立周，邓禹，
申请(专利权)人：丰益上海生物技术研发中心有限公司，
类型：发明
国别省市：