视神经脊髓炎抗体检测试剂制造技术

本发明专利技术提供了视神经脊髓炎抗体检测试剂，该试剂包括载片试剂、荧光标记的二抗、磷酸盐缓冲液，其特征在于所述的载片试剂包括表达标记荧光蛋白的AQP4转染细胞和表达标记荧光蛋白的空白载体转染细胞；荧光标记的二抗与表达荧光蛋白的转染细胞中的所述的荧光为不同色系的荧光。通过不同色系的荧光及荧光组合，应用于判定样本中是否含有目标抗体。用于判定样本中是否含有目标抗体。用于判定样本中是否含有目标抗体。

【技术实现步骤摘要】
视神经脊髓炎抗体检测试剂


[0001]本专利技术属于免疫检测领域，具体涉及视神经脊髓炎抗体检测试剂。

技术介绍

[0002]视神经脊髓炎（neuromyelitis optica，NMO）是一种主要选择性累及视神经和脊髓的中枢神经系统炎性脱髓鞘疾病。主要表现为双眼同时或相继（双眼相隔数小时、数天甚至数周发病）出现迅速而严重的视力下降，眼痛相对少见；部分患者出现视乳头水肿、视网膜静脉迂曲、扩张及视乳头周围渗出；视功能恢复较差，多数患者会遗留双眼或至少一眼的严重视力障碍（最终视力低于0.1）。NMO的急性脊髓损害可于视力下降之前、之后甚至同时发生，二者可间隔数天、数周、数月甚至数年，表现为截瘫、感觉及括约肌功能障碍，重者可致呼吸肌麻痹。
[0003]NMO的发病机制尚未完全阐明，目前多倾向认为自身抗体水通道蛋白4（AQP4）
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IgG发挥着主导作用。AQP4
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IgG和星形胶质细胞足突上AQP4的结合启动补体经典激活途径，对星形胶质细胞产生直接毒性作用，同时释放一系列炎性因子募集粒细胞、巨噬细胞等，加重中枢神经系统炎性损伤与髓鞘脱失，NMO其他相关的抗体还包括MOG、MBP、GFAP等。
[0004]目前视神经脊髓炎抗体检测判读时采用单色荧光，单色荧光在检测时容易导致假阳性，准确性较低。

技术实现思路

[0005]为解决上述检测中存在的问题，提高视神经脊髓炎抗体检测的准确性，本专利技术提供了一种视神经脊髓炎抗体检测试剂。通过不同色系的荧光及荧光组合，判定不同色系的荧光斑点是否叠加以及荧光特征是否一致，应用于判定样本中是否含有目标抗体，从而提高了抗体检测的准确性，同时可对视神经脊髓炎抗体进行定性或半定量。
[0006]视神经脊髓炎抗体检测试剂，该载片包括载片试剂、荧光标记的二抗、磷酸盐缓冲液（PBS），其特征在于所述的载片试剂包括表达标记荧光蛋白的AQP4转染细胞和表达标记荧光蛋白的空白载体转染细胞；荧光标记的二抗与表达荧光蛋白的转染细胞中的所述的荧光为不同色系的荧光。
[0007]进一步的，所述的表达标记荧光蛋白的AQP4转染细胞和表达标记荧光蛋白的空白载体转染细胞分别固定在载片的同一面上不同区域。
[0008]进一步的，所述的载片试剂还包括表达标记荧光蛋白的MOG、MBP、GFAP转染细胞中的一种或多种。
[0009]进一步的，所述的荧光标记的二抗选自山羊抗人IgG、小鼠抗人IgG、兔抗人IgG、驴抗人IgG、马抗人IgG或鸡抗人IgG。
[0010]进一步的，所述的荧光标记的二抗中的使用的荧光物选自异硫氰酸荧光素、罗丹明、四甲基罗丹明异硫氰酸盐、Texas Red、藻红蛋白、碘化丙啶、Alexa Fluor系列、Dylight系列、iFluor系列、PE或Cy系列。
[0011]进一步的，所述的荧光蛋白选自红色荧光蛋白、橙色荧光蛋白、黄色荧光蛋白、绿色荧光蛋白、青色荧光蛋白或蓝色荧光蛋白。
[0012]进一步的，所述的视神经脊髓炎抗体检测试剂的制备方法包括：1）在平板基质上分别培养表达标记荧光蛋白的AQP4转染细胞和表达标记荧光蛋白的空白载体转染细胞；2）将培养好的细胞去除培养基，使用磷酸盐缓冲液清洗；3）加入固定液将细胞固定；4）将固定好的细胞使用封片液封片，干燥；5）将干燥后的载有细胞的平板基质转移至载片上，用无影胶固定。
[0013]进一步的，所述的固定液选自醛类、甲醇、乙醇、丙酮、四氧化锇、苦味酸、氯仿、铬酸、升汞、重铬酸中的一种或或多种制备成的溶液。
[0014]进一步的，所述的封片液选自聚乙二醇类、BSA、SlowFade Diamond、SlowFade Gold、甘油、石蜡、明胶、芦荟凝胶、防淬灭剂、矿物油中的一种或多种。
[0015]视神经脊髓炎抗体检测试剂的检测方法，所述的检测方法包括如下步骤：1）准备血清、血浆或脑脊液样本，取稀释后样本加入载片反应区内；2）37℃温育或者4℃过夜；3）用PBS洗涤；4）将PBS充分沥干，取荧光标记二抗加入载片反应区内，37℃温育；5）用PBS洗涤；6）向反应区内加入PBS；7）将载片置于荧光显微镜下镜检。
[0016]进一步的，利用荧光显微镜观察荧光斑点及荧光斑点组合，通过判定荧光斑点的位置能否重叠以及荧光特征是否一致，判定样本中是否含有抗AQP4抗体，通过受试者血清、血浆或脑脊液的稀释倍数及斑点的强度，对样本中抗AQP4抗体进行定性或半定量检测分析，为临床判断视神经脊髓炎患者的严重程度提供依据。
[0017]进一步的，检测试剂为载片形式，样品量、PBS用量可以依据载片的结构进行调整。
[0018]例如，所述的红色荧光蛋白选自mCherry、mBanana、mOrange、dTomato、mTangerine、或mStrawberry。
[0019]本专利技术提供了一种双荧光定位判读方法作为视神经脊髓炎的定量或定性分析法的用于视神经脊髓炎的诊断方法。
[0020]本专利技术使用的双荧光为不同色系，以便利用荧光判读设备或肉眼识别时能够准确区别蛋白荧光和标记荧光的色系。
[0021]本专利技术检测试剂，在进行判定荧光位置和强度时，可采用荧光判读设备，也可以采用肉眼识别，在进行定量检测时，优选采用荧光判读设备判读。
[0022]本专利技术使用的细胞选自HEK293T细胞，可留种保存。
[0023]本专利技术至少具有以下有益效果：1）通过本专利技术制备抗体检测试剂能够检测抗AQP4抗体，该检测试剂的特异性强、灵敏度高、实验结果重复性好，能够进行推广应用，在临床上具有极其重要的意义。2）此外，本专利技术针对现有技术在荧光信号较低的情况下容易导致误判的问题，本专利技术通过将细胞表
达荧光蛋白，再加入荧光标记的二抗，通过观察不同色系发出的荧光细胞的位置能否重叠以及荧光特征，从而降低在荧光信号较低的情况仅通过一种荧光下容易导致误判的问题。
附图说明
[0024]图1
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图2：样本用视神经脊髓炎抗体检测试剂检测在显微镜下荧光图（样本中含有抗AQP4抗体）图3
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图4：样本用视神经脊髓炎抗体检测试剂检测在显微镜下荧光图（样本中不含有抗AQP4抗体）
具体实施方式
[0025]本专利技术的其他目的、特征和优点将从以下详细描述中变得明显。但是，应当理解的是，详细描述和具体实施例仅为解释性目的而给出，因为在阅读该详细说明后，在本专利技术的精神和范围内所作出的各种改变和修饰，对于本领域技术人员来说将变得显而易见。
[0026]本专利技术实施例通过制备抗AQP4抗体检测试剂，以及利用该检测试剂检测样本中抗AQP4抗体，从而判定样本中是否含有抗AQP4抗体，为临床医生诊断视神经脊髓炎患者严重程度提供依据。
[0027]其中实施例中采用红色色系的荧光和绿色色系的荧光，其中所述的mCherry发出红色荧光，Dylight 488发出绿色荧光。选择不同色系荧光保证二者荧光色差肉眼容易本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.视神经脊髓炎抗体检测试剂，该试剂包括载片试剂、荧光标记的二抗、磷酸盐缓冲液，其特征在于所述的载片试剂包括表达标记荧光蛋白的AQP4转染细胞和表达标记荧光蛋白的空白载体转染细胞；荧光标记的二抗与表达荧光蛋白的转染细胞中的所述的荧光为不同色系的荧光。2.如权利要求1所述的视神经脊髓炎抗体检测试剂，所述的表达标记荧光蛋白的AQP4转染细胞和表达标记荧光蛋白的空白载体转染细胞分别固定在载片上的同一面上不同区域。3.如权利要求1所述的视神经脊髓炎抗体检测试剂，所述的载片试剂还包括表达标记荧光蛋白的MOG、MBP、GFAP转染细胞中的一种或多种。4.如权利要求1所述的视神经脊髓炎抗体检测试剂，其特征在于所述的荧光标记的二抗选自山羊抗人IgG、小鼠抗人IgG、兔抗人IgG、驴抗人IgG、马抗人IgG或鸡抗人IgG。5.如权利要求1所述的视神经脊髓炎抗体检测试剂，其特征在于所述的荧光标记的二抗中的使用的荧光物选自异硫氰酸荧光素、罗丹明、四甲基罗丹明异硫氰酸盐、Texas Red、藻红蛋白、碘化丙啶、Alexa Fluor系列、Dylight系列、iFluor系列、PE或Cy系列。6.如权利要求1所述的视神经脊髓炎抗体检测试剂，其特征在于所述的荧光蛋白选自红色荧光蛋白、橙色荧光蛋白、黄色荧光蛋白、绿色荧光蛋白、青色荧光蛋白或蓝色荧光蛋白。7.如权利要求1
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6任一项所述的视神经脊髓炎抗体检测试剂的制备方法包括：1）...

【专利技术属性】
技术研发人员：ꢀ五一IntClG零一N三三六八，
申请(专利权)人：广州市微米生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：