茶碱完全抗原及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了茶碱完全抗原及其在茶碱抗体制备和免疫法检测中的应用。所述茶碱完全抗原的结构如式I所示，其中R为任选取代的C1

【技术实现步骤摘要】
茶碱完全抗原及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及检测领域。具体地说，本专利技术涉及茶碱完全抗原，利用该完全抗原获得的茶碱单克隆抗体及其在荧光免疫层析法检测茶碱中的应用。

技术介绍

[0002]茶碱类药物应用于临床尽管已有半世纪之久，但由于其不良反应多，安全治疗窗窄，在吸入型糖皮质激素(ICS)和β2受体激动剂广泛应用于哮喘临床治疗且取得较好疗效后，茶碱类药物在哮喘治疗中的地位逐渐退至第三、四位。茶碱类缓释制剂的问世，也使茶碱类药物的临床应用安全性得到有效改善，使茶碱在哮喘治疗药物中的地位又出现上升趋势，2006年全球哮喘防治倡议(GINA)正式把缓释茶碱类药物列为控制哮喘症状药物之列，2008年中国支气管哮喘防治指南指出，在中国贫穷地区可以把ICS+缓释茶碱类药物作为单用ICS不能控制的慢性哮喘的一线治疗方案。目前临床已知的茶碱类药物以及其衍生物已经有300多种，最为常用的茶碱类药物有：茶碱、氨茶碱、多索茶碱等。
[0003]根据文献统计结果，年龄、个体差异、剂型、联合用药及并存的病理情况(肝功能不全)等多种因素都会对茶碱的药代动力学参数造成影响，导致茶碱的血药浓度在个体间差异大。茶碱的安全有效范围窄，最佳浓度为10
‑
20μg/ml，超过20μg/ml时，毒副作用增加，且茶碱代谢的个体差异大，又极易受疾病和其他药物影响，因此对茶碱的药物监测成为安全用药的辅助手段。综上所述，为了进一步优化和规范茶碱在不同人群中的使用，根据患者的病理生理情况调整给药方案，有必要对特定人群进行茶碱血药浓度监测(therapeutic drug monitoring，TDM)。
[0004]目前茶碱的检测主要为紫外分光光度法、高效液相色谱法、气相色谱法、酶免法等，仪器昂贵，操作复杂且耗时。荧光定量免疫层析技术，是结合免疫荧光技术和传统免疫层析技术相优点的新型定量检测技术。该技术操作灵活简便、成本较低、反应时间短，能做到及时定量检测。能及时为医师对病人调整用药提高数据支撑，达到个体化给药的目的，确保疗效的同时保证了用药安全性。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种茶碱的完全抗原，利用该完全抗原可以获得茶碱的特异性抗体。
[0006]本专利技术的另一目的是提供包含本专利技术的茶碱特异性抗体的检测试剂或检测试剂盒，以及利用该抗体或检测试剂盒或检测试剂盒来定量测定茶碱的方法。
[0007]在第一方面，本专利技术提供一种茶碱完全抗原，所述完全抗原具有式I所示的结构：
[0008][0009]其中，R为任选取代的C1
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C3烷基；优选任选取代的甲基；
[0010]Protein为蛋白质载体。
[0011]在具体的实施方式中，所述完全抗原具有式II所示的结构：
[0012][0013]其中，R和Protein如权利要求1所述。
[0014]在优选的实施方式中，所述“任选取代”是指被一个或多个低级烷基、羟基或卤素取代。
[0015]在优选的实施方式中，所述蛋白质载体为选自下组中的任何一种蛋白质：牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、钥孔血蓝蛋白(KLH)、人血清白蛋白(HSA)及人工合成的多聚赖氨酸(PLL)等。
[0016]在具体的实施方式中，所述蛋白质载体是牛血清白蛋白(BSA)、或卵清蛋白(OVA)。
[0017]在第二方面，本专利技术提供一种制备第一方面所述的茶碱完全抗原的方法，所述方法包括步骤：
[0018]将茶碱通过连接试剂与蛋白质载体连接，以制得权利要求1
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3中任一项所述的完全抗原。
[0019]在优选的实施方式中，所述连接试剂是戊二醛。
[0020]在优选的实施方式中，所述蛋白质载体为选自下组中的任何一种蛋白质：牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、钥孔血蓝蛋白(KLH)、人血清白蛋白(HSA)及人工合成的多聚赖氨酸(PLL)等。
[0021]在优选的实施方式中，所述蛋白质载体是牛血清白蛋白(BSA)、或卵清蛋白(OVA)。
[0022]在优选的实施方式中，茶碱与蛋白质载体连接的条件如下：反应温度为20
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35℃，优选25
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32℃，更优选30℃；反应pH为6.0
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9.0，优选7.2
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9.0，更优选8.4；反应时间为4
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9小时，优选7
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9小时，更优选8小时。
[0023]在第三方面，本专利技术提供第一方面所述的茶碱完全抗原的用途，用于制备茶碱的
特异性单克隆抗体。
[0024]在第四方面，本专利技术提供一种单克隆抗体，所述单克隆抗体特异性结合茶碱。
[0025]在优选的实施方式中，所述单克隆抗体由小鼠杂交瘤细胞系产生，所述杂交瘤细胞系由中国典型培养物保藏中心(CCTCC，中国，武汉，武汉大学)保藏，保藏号为C202081；分类命名为：杂交瘤细胞C214238。
[0026]在优选的实施方式中，所述的单克隆抗体检测茶碱的灵敏度低于2ng/mL；优选约为1.88ng/mL。
[0027]在优选的实施方式中，所述的单克隆抗体不结合其它哮喘治疗药物；所述的其它哮喘治疗药物包括但不限于布地奈德、特布他林、头孢哌酮。
[0028]在第五方面，本专利技术提供一种产生第四方面所述的单克隆抗体的杂交瘤细胞系，所述杂交瘤细胞系是由中国典型培养物保藏中心(CCTCC，中国，武汉，武汉大学)保藏，保藏号为C202081；分类命名为：杂交瘤细胞C214238。
[0029]在第六方面，本专利技术提供第四方面所述的单克隆抗体的用途，其用于制备检测样品中茶碱的试剂、检测卡或试剂盒。
[0030]在优选的实施方式中，所述样品是生物样品，优选血浆样品。
[0031]在第七方面，本专利技术提供一种检测生物样品中是否存在茶碱的方法，所述方法包括步骤：
[0032](a)将所述生物样品与第四方面所述的单克隆抗体接触；
[0033](b)检测是否形成抗原
‑
抗体复合物，其中形成复合物就表示样品中存在茶碱。
[0034]在优选的实施方式中，所述单克隆抗体带有可检测标记物；优选地，所述的标记物选自下组：胶体金标记物、有色标记物或荧光标记物。
[0035]在优选的实施方式中，所述检测方法为荧光检测法。
[0036]在优选的实施方式中，所述检测方法是体外非诊断性的。
[0037]在第八方面，本专利技术提供一种检测茶碱的荧光免疫层析检测卡，所述检测卡包括基片；吸液部件；检测部件；加样部件，其特征在于，检测部件固定在基片上，在检测部件中部设置质控带和检测带，在检测部件的两端以部分重叠的方式固定吸液部件和加样部件，其中，检测带上包被有第一方面所述的茶碱完全抗原，质控带上包被有兔抗原IgG。
[0038]在优选的实施方式中，所述茶碱荧光免疫层析检测卡还包括卡盒，所述卡盒由本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种茶碱完全抗原，所述完全抗原具有式I所示的结构：其中，R为任选取代的C1
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C3烷基；优选任选取代的甲基；Protein为蛋白质载体。2.如权利要求1所述的茶碱完全抗原，其特征在于，所述完全抗原具有式II所示的结构：其中，R和Protein如权利要求1所述。3.如权利要求1或2所述的茶碱完全抗原，其特征在于，所述蛋白质载体是牛血清白蛋白(BSA)、或卵清蛋白(OVA)。4.一种制备权利要求1
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3中任一项所述的茶碱完全抗原的方法，所述方法包括步骤：将茶碱通过连接试剂与蛋白质载体连接，以制得权利要求1
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3中任一项所述的完全抗原。5.权利要求1
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3中任一项所述的茶碱完全抗原的用途，用于制备茶碱的特异性单克隆抗体。6.一种单克隆抗体，所述单克隆抗体特异性结合茶碱。7.一种产生权利要求6所述的单克隆抗体的杂交瘤细胞系，所述杂交瘤细胞系是由中国典型培养物保藏中心(CCTCC，中国，武汉，武汉大学)保藏，保藏号为C202081；分类命名为：杂交瘤细胞C214...

【专利技术属性】
技术研发人员：李忠鹏，何扬锦，陈颖，费晓旭，周晓静，张盛朝，
申请(专利权)人：浙江准策生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：