单域抗Nectin-4抗体制造技术

本公开提供了一种对人Nectin

【技术实现步骤摘要】
单域抗Nectin
‑
4抗体


[0001]本专利技术属于细胞免疫学领域，涉及一种对人Nectin
‑
4蛋白具有特异性的单域抗体及其用途。

技术介绍

[0002]Nectin家族是由Nectin
‑
1、
‑
2、
‑
3和
‑
4四个成员组成的Ca
2+
非依赖性免疫球蛋白样分子。Nectin蛋白在细胞细胞粘附中起作用。它们通过它们的细胞质尾部结合肌动蛋白丝（F
‑
actin）结合蛋白afadin，并与肌动蛋白细胞骨架联合，与其他细胞粘附分子和细胞表面膜受体配合，调节许多其他细胞活动，如移动、分化、极化和病毒的进入。
[0003]Nectin
‑
4，也称为脊髓灰质炎病毒受体相关蛋白4（PVRL4），是一种大小约52 kDa的I型单次跨膜蛋白。Nectin
‑
4的胞外结构域有三个Ig样亚结构域，分别为V、C1和C2。
[0004]Nectin 1、2和3在成人组织中广泛表达，但Nectin
‑
4在胚胎和胎盘中特异表达。然而，已经证明Nectin
‑
4可以在各种癌细胞中表达，使其成为癌症治疗的合适靶点。

技术实现思路

[0005]在各种实施方式中，本公开提供了对人Nectin
‑
4蛋白具有结合特异性的单域抗体。这些抗体可以与食蟹猴Nectin
‑
4交叉反应。凭借出色的结合亲和力和小尺寸，这些抗体可以适当地用于生成双特异性抗体，例如也靶向免疫细胞的抗体。
[0006]因此，根据本公开的一个实施方式，提供了一种对人Nectin
‑
4蛋白具有特异性的单域抗体或其抗原结合片段，其包含CDR1、CDR2和CDR3，其中所述CDR1、CDR2和CDR3分别包含抗体CMB7
‑
6、CMB7
‑
7、CMB7
‑
8、CMB7
‑
9、CMB7
‑
10、CMB7
‑
11、CMB7
‑
12、CMB7
‑
17、CMB7
‑
18、CMB7
‑
19、CMB7
‑
20、CMB7
‑
21、CMB7
‑
22、或CMB7
‑
23中任何一种的CDR1、CDR2和CDR3序列。这些示例性抗体具有如SEQ ID NO: 1
‑
14所示的氨基酸序列。
[0007]在一些实施方式中，所述CDR1、CDR2和CDR3分别包含氨基酸序列5
‑
17、SEQ ID NO：18
‑
20、SEQ ID NO：21
‑
23、SEQ ID NO：24
‑
26、SEQ ID NO：27
‑
29、SEQ ID NO：30
‑
32、SEQ ID NO：33
‑
35、SEQ ID NO：36
‑
38、SEQ ID NO：39
‑
41、SEQ ID NO：42
‑
44、SEQ ID NO：45
‑
47、SEQ ID NO：48
‑
50、SEQ ID NO：51
‑
53或SEQ ID NO：54
‑
56。
[0008]在一些实施方式中，所述单域抗体包含选自SEQ ID NO:1
‑
14的氨基酸序列。
[0009]本公开还提供了一种双特异性抗体，其包含本文公开的单域抗体或其抗原结合片段和对不同于Nectin
‑
4的抗原具有特异性的第二抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，所述抗原为人CD3。
[0010]在一些实施方式中，所述双特异性抗体包含四个单域抗体，每种单域抗体都融合至对人CD3具有特异性的全Fab抗体的重链可变区（VH）或轻链可变区（VL）。在一些实施方式中，每个单链结构域抗体都通过肽接头融合至VH或VL。
[0011]在一些实施方式中，所述肽接头具有长于7个氨基酸的长度。在一些实施方式中，肽接头具有短于50个氨基酸的长度。
[0012]本公开还提供了编码任何所述抗体或片段的多核苷酸。
[0013]本公开还提供了用所公开的抗体或片段治疗疾病（例如癌症）的方法。
附图说明
[0014]图1显示了证实抗体表达的SDS
‑
PAGE图像。
[0015]图2显示了基于ELISA的抗体亲和力测试的结果。
[0016]图3显示了所有抗人Nectin
‑
4 VHH抗体与食蟹猴Nectin
‑
4交叉反应。
[0017]图4说明了测试的双特异性抗体的两种形式（形式A和形式B）。
[0018]图5显示了在Nectin
‑
4表达细胞的存在下进行T细胞活化检测的结果。
[0019]图6
‑
7显示了目标Nectin
‑
4表达细胞的T细胞杀伤结果（图6: MCF
‑
7细胞；图7: T
‑
47D细胞）。
具体实施方式
[0020]定义需要注意的是，术语“一种”实体是指所述实体中的一个或多个；例如，“一种抗体”被理解为代表一个或多个抗体。因此，术语“一”（或“一个”）、“一个或多个”和“至少一个
”ꢀ
在本文中可以互换使用。
[0021]本文所用，术语“多肽”旨在包含单数“多肽”以及复数“多肽”，并且是指由通过酰胺键（也称为肽键）线性连接的单体（氨基酸）组成的分子。术语“多肽”指两个或多个氨基酸的任何一条或多条链，而不是指产品的特定长度。因此，肽、二肽、三肽、寡肽、“蛋白质”、“氨基酸链”或用于指代两个或多个氨基酸链的任何其他术语包括在“多肽”的定义内，并且术语“多肽”可以用来代替、或与这些术语中的任何一个互换。术语“多肽”还意指多肽表达后修饰的产物，包括但不限于糖基化、乙酰化、磷酸化、酰胺化、通过已知的保护/阻断基团衍生、蛋白水解裂解或通过非天然存在的氨基酸修饰。多肽可以来自天然生物来源或通过重组技术生产，但不一定是从指定的核酸序列翻译而来。它可以以任何方式产生，包括通过化学合成。
[0022]本文中关于细胞、核酸（例如DNA或RNA）使用的术语“分离的”指分别与大分子天然来源中存在的其他DNA或RNA分离的分子。本文使用的术语“分离的”还指当通过重组DNA技术生产时基本上不含细胞材料、病毒材料或培养基的核酸或肽，或在化学合成时基本上不含化学前体或其他化学品的核酸或肽。此外，“分离的核酸”指的是不以片段形式天然出现且本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种对人Nectin
‑
4蛋白具有特异性的单域抗体或其抗原结合片段，其包含CDR1、CDR2和CDR3，其中所述CDR1、CDR2和CDR3分别包含由选自SEQ ID NO:1
‑
14的氨基酸序列表示的单域抗体的CDR1、CDR2和CDR3序列。2.根据权利要求1所述的单域抗体或其抗原结合片段，其中所述CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO: 15
‑
17、SEQ ID NO: 18
‑
20、SEQ ID NO: 21
‑
23、SEQ ID NO:24
‑
26、SEQ ID NO: 27
‑
29、SEQ ID NO: 30
‑
32、SEQ ID NO: 33
‑
35、SEQ ID NO: 36
‑
38、SEQ ID NO: 39
‑
41、SEQ ID NO: 42
‑
44、SEQ ID NO: 45
‑
47、SEQ ID NO: 48
‑
50、SEQ ID NO: 51
‑
53或SEQ ID NO: 54
‑
56的氨基酸序列。3.根据权利要求1所述的单域抗体或其...

【专利技术属性】
技术研发人员：王忠，张海洲，
申请(专利权)人：博际生物医药科技杭州有限公司，
类型：发明
国别省市：