一种IGF1纳米抗体及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种IGF1纳米抗体及其应用，涉及生物工程技术领域。本发明专利技术所述IGF1纳米抗体的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。本发明专利技术所述IGF1纳米抗体能够特异性结合IGF1蛋白，具有用免疫组织化学方法对组织中IGF1进行定位，以及WesternBlotting法检测组织中IGF1表达水平的作用。此外，IGF1纳米抗体具有抑制黑色素瘤细胞迁移和增殖的功能，可应用于黑色素瘤的诊断和治疗。和治疗。和治疗。

【技术实现步骤摘要】
一种IGF1纳米抗体及其应用


[0001]本专利技术属于生物工程
，具体涉及一种IGF1纳米抗体及其应用。

技术介绍

[0002]在肿瘤细胞的发生、发展及其转化过程中胰岛素样生长因子家族正日益受到重视。一些研究表明，血清中IGF
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1的含量升高与肿瘤的发生相关。大量研究证实IGF1在许多肿瘤细胞中表达上调，参与肿瘤发生和发展，通过与其受体IGF1R结合而参与转导多种信号途径如JNK、MAPK、PI3K/Akt途径发挥作用。此外，IGF
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1可以通过上调组织蛋白酶B的表达促进HCC细胞系的生长和转移。
[0003]骆驼科动物(羊驼、骆驼)和软骨鱼体内的一种天然缺失重链但仍然具有生物活性的特异性抗体称单域抗体，又称为纳米抗体。纳米抗体的抗原结合位点(VHH)具有独立的抗原识别能力，独立表达的VHH又被称为纳米抗体。纳米抗体分子量小，结构简单，理化性质稳定，能够穿过动物机体内的一些保护性生理屏障进入发病部位发挥作用，能够结合一些隐蔽的抗原表位，特别适用于比较难得到抗体的靶点。
[0004]目前，还没有特异性结合IGF1蛋白的纳米抗体的报道。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种IGF1纳米抗体及其应用，所述IGF1纳米抗体可特异性识别并结合IGF1蛋白，并具有抑制黑色素瘤细胞迁移和增殖的功能。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]本专利技术提供了一种IGF1纳米抗体，所述IGF1纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0008]本专利技术还提供了一种编码上述IGF1纳米抗体的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0009]本专利技术还提供了上述IGF1纳米抗体在制备检测机体IGF1蛋白含量的试剂中的应用。
[0010]优选的，所述试剂包括基于免疫组织化学方法对组织中IGF1进行定位的试剂，和/或基于Western Blotting法检测组织中IGF1表达水平的试剂。
[0011]本专利技术还提供了上述IGF1纳米抗体在制备预防和/治疗或黑色素瘤的药物中的应用。
[0012]本专利技术还提供了上述IGF1纳米抗体在制备抑制黑色素瘤细胞迁移和/或增殖的药物中的应用。
[0013]有益效果：本专利技术提供了一种IGF1纳米抗体，所述IGF1纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本专利技术实施例中，利用噬菌体展示技术进行淘筛，噬菌体展示技术能将表达的外源多肽或蛋白以融合蛋白的形式展示在噬菌体的表面，进而通过亲和富集法筛选表达有特异性蛋白质的噬菌体。本专利技术采用噬菌体展示技术提供的IGF1纳米抗体能够特异
性结合IGF1蛋白，具有用免疫组织化学方法对组织中IGF1进行定位，以及Western Blotting法检测组织中IGF1表达水平的作用。此外，IGF1纳米抗体具有抑制黑色素瘤细胞迁移和增殖的功能，可应用于黑色素瘤的诊断和治疗。
附图说明
[0014]图1为IGF1
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VHH
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His检测结果图；
[0015]图2为IGF1
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VHH
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IGF1纳米抗体检测结果图；
[0016]图3为睾丸
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IGF1
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VHH
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纳米抗体免疫组化检测结果图；
[0017]图4为添加IGF1纳米抗体对B16细胞划痕实验的影响；
[0018]图5为添加IGF1纳米抗体对B16细胞增殖实验的影响；其中A：试验空白组，B：IGF1纳米抗体实验组；
[0019]图6为添加IGF1纳米抗体对B16细胞增殖迁移相关蛋白表达量的影响。
具体实施方式
[0020]本专利技术提供了一种IGF1纳米抗体，所述IGF1纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示：ESGGGLVQPGGSLRLSCDETSSRTLDYYKIGWFRRAPGKEREGVSCTESNNGSTTYADSVKGRFTVSRDIAENKVYLQMKNLKPEDTGIYYCGADLEVFRRCSFVSNEYDYWGQGTQVTV SS。
[0021]本专利技术对所述IGF1纳米抗体的获得方法并没有特殊限定，实施例中优选利用噬菌体展示技术进行淘筛，噬菌体展示技术能将表达的外源多肽或蛋白以融合蛋白的形式展示在噬菌体的表面，进而通过亲和富集法筛选表达有特异性蛋白质的噬菌体。本专利技术采用噬菌体展示技术提供的IGF1纳米抗体能够特异性结合IGF1蛋白，分子量约为16kD。在本专利技术实施例中，所述IGF1纳米抗体的筛选方法除淘洗时的IGF1蛋白的包被浓度以及PCR扩增时所用的引物不同外，其余均与中国专利CN109678962A(一种Cdk5纳米抗体和筛选方法)相同，本专利技术实施例中同样进行四轮淘洗，第一轮淘洗的IGF1蛋白的包被浓度为20μg/ml，第二轮淘洗的IGF1蛋白的包被浓度为10μg/ml，第三轮淘洗的IGF1蛋白的包被浓度为10μg/ml，第四轮淘洗的IGF1蛋白的包被浓度为5μg/ml；且在进行PCR扩增时，所使用的引物优选如SEQ ID NO.3～SEQ ID NO.4所示：
[0022]质粒上游引物(SEQ ID NO.3)：GTGAGGATCCGAGTCTGGAGGRRGCTTGGTGCA；
[0023]质粒下游引物(SEQ ID NO.4)：GACCSASGTCAYCGTCTCCTCAGTCGACTCAGA。
[0024]本专利技术对上述淘洗时所应用的黑素瘤纳米库的构建方法并没有特殊限定，优选依据中国专利CN109722716A(一种黑素瘤纳米抗体库的构建方法)所公开的构建方法构建得到即可。
[0025]本专利技术还提供了一种编码上述IGF1纳米抗体的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示：GAGTCTGGTGGAGGCTTGGTGCAGCCTGGGGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGATGAAACCTCAAGTCGCACTTTGGATTATTATAAAATAGGCTGGTTCCGCCGGGCCCCGGGAAAGGAACGTGAGGGGGTCTCATGTACTGAAAGTAATAACGGTAGTACAACTTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCGTCTCCAGAGACATCGCCGAGAACAAGGTGTACCTGCAAATGAAAAACCTGAAACCTGAGGATACAGGAATTTATTATTGTGGAGCAGATCTGGAAGTATTCAGGCGATGTAGTTTTGTGTCAAACGAGTATGACTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCA。
[0026]本专利技术还提供了上述IGF1纳米抗体在制备检测机体IGF1蛋白含量的试剂中的应用。
[0027]本专利技术所述IGF1纳米抗体可特异性识别并本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种IGF1纳米抗体，其特征在于，所述IGF1纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.一种编码权利要求1所述IGF1纳米抗体的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。3.权利要求1所述IGF1纳米抗体在制备检测机体IGF1蛋白含量的试剂中的应用。4.根据权利要求3所述应用，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：范瑞文，迟志端，渠志灿，李建丽，
申请(专利权)人：山西纳安生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：