一种可光剪切载体辅助均相合成蓝铜三肽的方法技术

本发明专利技术提供了一种可光剪切载体辅助均相合成蓝铜三肽的方法，以7

【技术实现步骤摘要】
一种可光剪切载体辅助均相合成蓝铜三肽的方法


[0001]本专利技术涉及生物有机化学领域中多肽的合成方法，具体说是涉及一种基于可光剪切载体辅助均相合成蓝铜三肽的方法。

技术介绍

[0002]关于蓝铜三肽的活性方面：生物活性肽GHK是一种氨基酸序列为甘氨酰组氨酸赖氨酸的三肽。它自然存在于人的血浆、唾液和尿液中。血浆中GHK水平约为200ng/mL(10
‑
20岁时为7μM)，但到60岁时降至80纳克/毫升。GHK水平的下降与生物体再生能力的显著下降相一致。人类肽GHK
‑
Cu于1973年由Pickart分离出来，作为人类白蛋白中的一种活性，可导致老年人肝组织合成像年轻组织一样的蛋白质
[1]。随后的研究证实，这种活性是一种氨基酸序列为甘氨酰
‑
L
‑
组氨酸
‑
L
‑
赖氨酸的三肽，对铜具有强烈的亲和力，容易形成复合物GHK
‑
Cu。有人提出，GHK
‑
Cu与Cu
2+
形成络合物
[2]。Pickart等人已经证实GHK
‑
Cu可加速伤口愈合和收缩，改善移植皮肤的吸收，并具有抗炎作用
[3
‑
5]。罗伦皮卡特Dr.Loren Pickart发现铜胜肽治疗伤口和皮肤损伤非常有效，不但可减少疤痕组织生成，同时能刺激皮肤自行愈合。在除皱方面，铜胜肽可以把日常的皮肤损伤减到最低程度，延缓老化现象。虽然有些人持怀疑态度，认为研究还不够透彻，但多项大规模研究的结果都认为毫无问题。美国纽奥良州杜兰大学医学院发现，胜肽可改善老化皮肤的说法，有其科学根据。
[0003]Borel和Maquart等人指导的后续研究表明，GHK
‑
Cu在非常低的无毒浓度(1
‑
10纳摩尔)下刺激胶原和糖胺聚糖的合成和分解
[6]。作为伤口愈合和皮肤重塑过程的主要调节因子，GHK调节金属蛋白酶及其抑制剂(TIMP
‑
1和TIMP
‑
2)的活性
[7,8]。GHK调节胶原蛋白、硫酸皮肤素、硫酸软骨素和一种小蛋白聚糖，核心蛋白聚糖
[9]。2001年，McCormack等人证实，GHK
‑
Cu在损伤细胞DNA的抗癌放射治疗后恢复了患者成纤维细胞的复制活力
[10]。还发现GHK可将免疫细胞和内皮细胞吸引到损伤部位
[11]。动物实验证实了GHK
‑
Cu的伤口愈合活性。GHK
‑
Cu可加速伤口愈合，增加血管形成和抗氧化酶水平。该分子还可诱导大鼠、小鼠和猪的全身伤口愈合。它能促进大鼠糖尿病和缺血伤口的愈合，降低TNF
‑
α水平，刺激胶原合成。它还促进了狗的脚垫伤口愈合
[12
‑
17]。这种记录良好的皮肤再生活性促使GHK在抗衰老化妆品中广泛使用
[18]。GHK
‑
Cu作为一种治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)、皮肤炎症和转移性结肠癌的前瞻性治疗药物而广受关注
[19
‑
21]。已经证实它是有能力的人类基因组中至少4000个基因的上调和下调，基本上使DNA恢复到更健康的状态
[22]。这些研究为GHK
‑
Cu肽的皮肤重塑活性提供了新的线索。
[0004]人体血浆中的三肽Gly
‑
His
‑
Lys(GHK)和二价铜离子有很强的亲和力，能自发形成络合物铜胜肽(copper peptide或GHK
‑
Cu)，GHK
‑
Cu不仅在肌肤活化过程中扮演着关键性角色，而且在皮肤正常胶原蛋白、弹力蛋白、蛋白聚糖和葡萄胺聚糖的生成、不同细胞类型的生长速度和迁移、抗炎、抗氧化等生理反应中起到重要作用。最近，王鹏博士通过模拟铜胜肽与铜离子的结合位点，以三肽Gly
‑
His
‑
Lys为探针接受体
[22]，并将其与荧光团异硫氰酸荧光素巧妙结合构建出可视化多肽生物探针L(Fitc
‑
Ahx
‑
Gly
‑
His
‑
Lys
‑
NH2)。L可以很好地
of California,San Francisco,Calif,USA,1973.
[0010][2]L.Pickart,J.H.Freedman,W.J.Loker et al.,Growth
‑
modulating plasma tripeptide may function by facilitating copper uptake into cells,Nature,1980,288(5792):715
‑
717.
[0011][3]L.Pickart,Use of GHL
‑
Cu as a wound
‑
healing and anti
‑
inflammatory agent,1988,http://www.freepatentsonline.com/4760051.html.
[0012][4]D.Downey,W.F.Larrabee Jr.,V.Voci,and L.Pickart,Acceleration of wound healing using glycyl
‑
histidyl
‑
lysine copper(II),Surgical Forum,1985,25:573
‑
575,.
[0013][5]L.Pickart,Iamin:a human growth factor with multiple wound
‑
healing properties,in Biology of Copper Complexes,J.Sorenson,Ed.,pp.273
‑
285,Humana Press,Clifton,NJ,USA,1987.
[0014][6]Y.Wegrowski,F.X.Maquart,and J.P.Borel,Stimulation of sulfated glycosaminoglycan synthesis by the tripeptide
‑
copper complex Glycyl
‑
L
‑
histidyl
‑
L
‑
lysine
‑
Cu2+,Life Sciences,1992,51(13):1049
‑
1056,.
[0015][7]A.Sim
é...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种7
‑
二苯基膦酰氧基香豆素
‑4‑
甲醇类化合物DPCM，其特征在于，分子结构通式为：2.权利要求1所述7
‑
二苯基膦酰氧基香豆素
‑4‑
甲醇类化合物DPCM的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)以7
‑
羟基香豆素
‑4‑
甲基卤素为原料与(R)2POCl反应，在A溶剂中加碱催化进行反应，反应完毕后，旋蒸回收溶剂，残留溶液用乙酸乙酯萃取并与水相分离，合并有机相并用去离子水洗涤多次，分离纯化得到7
‑
二苯基膦酰氧基香豆素
‑4‑
甲基卤素类化合物；2)将7
‑
二苯基膦酰氧基香豆素
‑4‑
甲基卤素类化合物经水解反应，转化为相应的7
‑
二苯基膦酰氧基香豆素
‑4‑
甲醇类化合物。3.一种可光剪切载体辅助均相合成蓝铜三肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)辅助基团的偶联辅助基团采用权利要求1所述的7
‑
二苯基膦酰氧基香豆素
‑4‑
甲醇类化合物DPCM；氨基酸采用其氨基均被保护的赖氨酸PG1‑
Lys(N
ε
‑
PG2)
‑
OH；以所述辅助基团替代固相多肽合成中的树脂，在脱水偶联剂的作用下与所述氨基酸进行搅拌反应，使得氨基均被保护的赖氨酸PG1‑
Lys(N
ε
‑
PG2)
‑
OH的C
‑
端与所述辅助基团连接，生成化合物A，PG1‑
Lys(N
ε
‑
PG2)
‑
DPCM；2)分离纯化向步骤1)得到的化合物A中加入极性小的烷烃或醚类溶剂，将化合物A与杂质分离，随后对分离后的化合物A进行纯化；3)脱除N
‑
端PG1采用脱PG1试剂处理步骤2)纯化后的化合物A，搅拌反应得到化合物B，H
‑
Lys(N
ε
‑
PG2)
‑
DPCM；向化合物B加入极性小的烷烃或醚类溶剂，将化合物B与杂质分离；随后对分离后的化合物B进行纯化；4)多肽偶联将步骤3)纯化后的化合物B作为原料，与PG1保护的组氨酸PG1‑
His(N
’‑
PG3)
‑
OH进行偶联反应，制备得到化合物C，PG1‑
His(N
’‑
PG3)
‑
Lys(N
ε
‑
PG2)
‑
DPCM；对化合物C进行分离纯化和脱除N
‑
端PG1后，得到化合物D，H
‑
His(N
’‑
PG3)
‑
Lys(N
ε
‑
PG2)
‑
DPCM；将化合物D作为原料，与PG1保护的甘氨酸PG1‑
Gly
‑
OH进行偶联反应，制备得到化合物E，PG1‑
Gly
‑
His(N
’‑
PG3)
‑
Lys(N
ε
‑
PG2)
‑
DPCM；对化合物E进行分离纯化和脱除N
‑
端PG1后，得到化合物F，H
‑
Gly
‑
His(N
’‑
PG3)
‑
Lys(N
ε
‑
PG2)
‑
DPCM；5)DPCM辅助基团的光照剪除与侧链脱保护5.1)采用360nm紫外灯照射步骤4)得到的化合物F的溶液，脱除载体DPCM，经分离纯化，
得到蓝铜三肽的前体化合物以及载体DPCM；其中，前体化合物为H
‑
Gly
‑
His(N
’‑
PG3)
‑
Lys(N
ε
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：钦传光，张子鑫，王娟，杨露，石梦楠，张辰扬，
申请(专利权)人：西北工业大学，
类型：发明
国别省市：