乙肝病毒不同亚型表面S蛋白高亲和力纳米抗体及其应用制造技术

本发明专利技术提供乙肝病毒不同亚型表面S蛋白高亲和力纳米抗体及其应用。本发明专利技术涉及与乙肝病毒表面小S蛋白特异性结合的骆驼源纳米抗体及其抗原结合片段，具体涉及能以高亲和力结合HBV ADR亚型和ADW亚型表面小S蛋白的骆驼源纳米抗体或其抗原结合片段，其能够用于检测、诊断由HBV引起的感染，对治疗由HBV感染引起的肝炎肝癌及其并发症具有重要意义。炎肝癌及其并发症具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
乙肝病毒不同亚型表面S蛋白高亲和力纳米抗体及其应用


[0001]本专利技术属于生物技术、免疫检测和生物医药领域，具体地说，涉及乙肝病毒不同亚型表面S蛋白高亲和力纳米抗体及其应用。

技术介绍

[0002]乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)是一种嗜肝病毒属DNA病毒。具有强烈的嗜肝性、高变异性、致癌和难以清除等特点。HBV主要通过血液、体液和母婴途径传播，潜伏期一般为30～180天。急性感染症状包括呕吐、黄疸病、疲劳、小便黄赤和急性腹痛等，此外，机体免疫反应低下或病毒变异导致的免疫逃逸则会使其转为慢性感染，逐步发展为肝硬化和肝癌等并发症。
[0003]HBV的表现型是其血清亚型(Subtype)，由外膜主蛋白上的一些残基决定，包含众多基因型(HBV
‑
A、HBV
‑
C和HBV
‑
D)，包括ADW、ADY、AYW、ADR亚型。ADR亚型主要分布在东亚地区，与这一地区流行的C基因型一致。而ADW亚型在我国较为少见，但在世界范围内广泛分布，与基因型D型一致。
[0004]纳米抗体(Nanobody)是只含有重链抗体抗原结合域VHH的单域抗体，与传统多克隆抗体、单克隆抗体和单链抗体相比具有诸多明显优势，比如体积小，可以穿过常规抗体无法进入的组织和器官(如鞘膜、脊髓、大脑等)中；稳定性强，无需冷链运输和冷藏保存；免疫原性低，易于进行人源化改造。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供乙肝病毒不同亚型表面S蛋白高亲和力纳米抗体及其应用。
[0006]本专利技术构思如下：HBV外膜上的可识别抗原为S蛋白，一般分为大、中、小三种表面S蛋白。本专利技术将HBV表面小S蛋白作为靶标，通过构建噬菌体展示纳米抗体免疫文库、生物淘选研制出可识别HBV的骆驼源高亲和力纳米抗体，为乙型肝炎机理的进一步研究奠定基础，也为乙肝临床检测提供潜在的新选择。
[0007]为了实现本专利技术目的，第一方面，本专利技术提供一种乙肝病毒不同亚型表面S蛋白高亲和力纳米抗体或其抗原结合片段，其高变区CDR1、CDR2和CDR3分别选自SEQ ID NO:9
‑
15、SEQ ID NO:16
‑
22和SEQ ID NO:23
‑
30任一所示的氨基酸序列。
[0008]所述抗原结合片段为Fv、Fab、Fab
′
、scFv、F(ab
′
)2、多价化或多特异片段。
[0009]进一步地，本专利技术的乙肝病毒不同亚型表面S蛋白高亲和力纳米抗体或其抗原结合片段，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1
‑
8任一所示；或者
[0010]SEQ ID NO:1
‑
8任一所示序列经截短得到的氨基酸序列；或者，
[0011]将SEQ ID NO:1
‑
8任一所示序列经取代、缺失和/或增加一个或多个氨基酸得到的具有相同功能的抗体或抗原结合片段。
[0012]本专利技术的纳米抗体与HBV具有纳摩尔级别的亲和力。
[0013]第二方面，本专利技术提供一种基因工程抗体，其包含所述的抗体或其抗原结合片段。
[0014]其中，所述基因工程抗体包括但不限于人源化抗体、嵌合抗体、多价化或多特异性抗体。
[0015]第三方面，本专利技术提供一种融合蛋白，其包含所述的抗体或其抗原结合片段或所述的基因工程抗体。
[0016]进一步地，所述融合蛋白还包含标签多肽、检测蛋白或辅助蛋白。
[0017]第四方面，本专利技术提供一种偶联物，其包含所述的抗体或其抗原结合片段或所述的基因工程抗体或所述的融合蛋白。
[0018]进一步地，所述偶联物还包含可检测标记物、造影剂、药物、细胞因子、放射性核素、酶、金纳米颗粒/纳米棒、纳米磁粒、脂质体、病毒外壳蛋白或VLP，或其组合。
[0019]第五方面，本专利技术提供一种核酸分子，其编码所述的抗体或其抗原结合片段，或编码所述的基因工程抗体，或编码所述的融合蛋白，或编码所述的偶联物。
[0020]其中，所述核酸分子可以是RNA、DNA或cDNA。
[0021]第六方面，本专利技术提供含有所述核酸分子的生物材料，所述生物材料包括但不限于重组DNA、表达盒、转座子、质粒载体、病毒载体、工程菌或转基因细胞系。
[0022]第七方面，本专利技术提供一种药物组合物，其活性成分为所述的抗体或其抗原结合片段或所述的基因工程抗体或所述的融合蛋白或所述的偶联物或从所述生物材料中获得的培养物。
[0023]所述药物组合物可以是外用型、皮下注射型、血管输入型，或其组合。
[0024]优选地，所述药物组合物还包括药用赋形剂或载体。
[0025]第八方面，本专利技术提供所述的抗体或其抗原结合片段或所述的基因工程抗体或所述的融合蛋白或所述的偶联物或从所述生物材料中获得的培养物在制备用于预防、治疗和/或诊断HBV感染、相关科学研究的生物制品中的应用。
[0026]第九方面，本专利技术提供所述的抗体或其抗原结合片段或所述的基因工程抗体或所述的融合蛋白或所述的偶联物或从所述生物材料中获得的培养物的以下任一应用：
[0027]1)用于制备预防或治疗由HBV感染以及由其感染所致相关疾病的药物；
[0028]2)用于制备HBV检测试剂或试剂盒；
[0029]3)检测HBV抗原；
[0030]4)阻断HBV感染；
[0031]5)消杀HBV颗粒；
[0032]6)诊断HBV引起的相关疾病；
[0033]7)治疗HBV引起的相关疾病；
[0034]8)进行HBV相关的基础科学研究。
[0035]借由上述技术方案，本专利技术至少具有下列优点及有益效果：
[0036](一)本专利技术提供的HBV纳米抗体，有效克服目前HBV抗体种类少、稳定较差、生产成本高、临床效果不理想等缺点，具有体积小、亲和力高、稳定性强等优点，并且可以低成本、大批量快速生产。
[0037](二)本专利技术提供的纳米抗体不仅可以作为初期感染阻断、早期感染诊断、中晚期感染治疗的潜在药物，还可以用于体内成像和体外快速检测，例如生产生物活体成像造影剂、ELISA检测/诊断试剂盒、胶体金检测/诊断试剂盒。
[0038](三)基于本专利技术抗体建立的ELISA检测方法能准确灵敏地检测样品中是否含有HBV。样品的前处理过程简单，耗时少，能同时检测大量的样品，样品检测成本远低于传统的核酸检测方法。
[0039](四)将本专利技术抗体应用于胶体金检测/诊断试剂盒可以迅速且准确检测样品中是否含有HBV，为解决HBV感染的快速现场诊断提供有力工具。
[0040](五)将本专利技术抗体应用于乙肝相关基础科学研究可以大幅提高实验灵敏度和精确性，有望解决常规抗体自身无法克服的缺陷如体积大、稳定性差等导致的技术难题。
附图说明
[0041]图1为本专利技术较佳实施例本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.乙肝病毒不同亚型表面S蛋白高亲和力纳米抗体或其抗原结合片段，其特征在于，其高变区CDR1、CDR2和CDR3分别选自SEQ ID NO:9
‑
15、SEQ ID NO:16
‑
22和SEQ ID NO:23
‑
30任一所示的氨基酸序列；所述抗原结合片段为Fv、Fab、Fab'、scFv、F(ab')2、多价化或多特异片段。2.根据权利要求1所述的纳米抗体或其抗原结合片段，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1
‑
8任一所示；或者SEQ ID NO:1
‑
8任一所示序列经截短得到的氨基酸序列；或者，将SEQ ID NO:1
‑
8任一所示序列经取代、缺失和/或增加一个或多个氨基酸得到的具有相同功能的抗体或抗原结合片段。3.基因工程抗体，其特征在于，其包含权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段；其中，所述基因工程抗体为人源化抗体、嵌合抗体、多价化或多特异性抗体。4.融合蛋白，其特征在于，其包含权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段或权利要求3所述的基因工程抗体；其中，所述融合蛋白还包含标签多肽、检测蛋白或辅助蛋白。5.偶联物，其特征在于，其包含权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段或权利要求3所述的基因工程抗体或权利要求4所述的融合蛋白；其中，所述偶联物还包含可检测标记物、造影剂、药物、细胞因子、放射性核素、酶、金...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨鹏远，王楷，林逸桓，刘兰兰，
申请(专利权)人：中国科学院生物物理研究所，
类型：发明
国别省市：