本发明专利技术公开了一种基于铝盐混凝预处理的水中病毒含量的检测方法，本发明专利技术提高病毒检测效率的方法包括向待测水样中加入絮凝剂，然后向进行絮凝处理后的包裹病毒的胶体中加入释放剂，使得胶体溶解，病毒从胶体中释放。本发明专利技术的病毒含量检测方法解决了用铝盐混凝沉淀法富集病毒的过程中，病毒因被铝盐包裹而无法有效释放的问题，可以提高病毒的释放效率，用于后续检测。加入的释放剂廉价易得，操作步骤简单高效，设备易得，试剂成本低，一次性投入少，处理时间短，获得结果速度快，具有广泛的适应性，适合推广应用。适合推广应用。
【技术实现步骤摘要】
一种基于铝盐混凝预处理的水中病毒含量的检测方法
[0001]本专利技术涉及一种促进胶体中病毒释放的方法，从而提高水中病毒检测效率，特别涉及污水中病毒的富集、释放及检测方法，属于生物分析测试和环境监测领域。
技术介绍
[0002]环境中存在的各种致病病毒可能对人类健康造成极大的危害。目前已经研究发现，污水中含有多种的病毒，如诺如病毒、脊髓灰质炎病毒、甲肝病毒、轮状病毒等等，这些病毒以水为媒介，经常引起传染病的爆发，因此有必要对其进行快速高效的检测，从而预防传染病大规模爆发。
[0003]但是，不同于生物样品，环境样品尤其是环境水体，由于水样体积巨大，其中杂质含量较多且较为复杂，病毒含量相对较少，现有的研究手段难以直接从水中检出病毒，因此十分有必要在病毒检测前先对水中的病毒进行富集预处理。
[0004]目前对病毒的富集浓缩主要有以下几种方法：吸附洗脱法、絮凝沉淀法、离心超滤法、超速离心法、正电膜/负电膜法等。尽管富集方法较多，但是却存在诸如操作复杂、价格昂贵、耗费时间较长、效果不稳定、易受到水质水量的影响、难以推广等许多问题。其中，铝盐混凝沉淀法由于其操作步骤简单、花费较少、对大型仪器的依赖程度低等优点，脱颖而出。但是多位研究者发现，在形成胶体的过程中，病毒大多被包裹在胶体内部，吸附在胶体表面的病毒占据很少的比例，仅通过对胶体表面病毒的洗脱不足以实现病毒的有效检测。由此需要寻找有效的病毒释放方法，从而有利于后续的核酸提取和定量PCR检测。本专利技术方法的原理是在污水中加入铝盐混凝剂，铝盐在pH＝6条件下水解产生氢氧化铝胶体，带正电荷的氢氧化铝胶体通过吸附电中和与卷扫等作用包裹带负电荷的病毒颗粒，并使其随着氢氧化铝胶体的沉降从水中转移至沉淀中，通过过滤或离心的方式将含病毒的胶体与水溶液分开，收集的沉淀物通过化学溶解的方式释放包裹的病毒颗粒，进而利用核酸提取和实时荧光RT
‑
PCR完成污水中病毒的检测。
[0005]本专利技术能够实现对胶体中病毒的释放，之后采用加热的方式将胶体完全溶解，将释放后的病毒进行核酸提取及荧光定量PCR检测，操作简单、方法检测限低、病毒回收率高。
技术实现思路
[0006]本专利技术的目的是针对现有水中病毒浓度检测过程中，由于富集低浓度病毒存在的技术问题，提供一种提高基于铝盐混凝预处理水中病毒检测效率的方法、以及水中病毒含量检测方法，本专利技术病毒检测过程中，富集于胶体中病毒的释放不受待测水体水质水量的影响，富集于胶体中病毒释放效率高，效果稳定，病毒浓度检测结果准确，检测限低。
[0007]为实现本专利技术的目的，本专利技术一方面提供一种提高水中病毒检测效率的方法，包括向待测水样中加入絮凝剂，然后再向进行絮凝处理后的包裹病毒的胶体中加入释放剂，使得胶体溶解，病毒从胶体中释放。
[0008]其中，所述病毒为新冠病毒、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒
(TGEV)、轮状病毒(PoRV)、禽流感病毒(AIV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)或猪圆环病毒(PCV)，优选为猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)或新冠病毒；所述水选择农村或城市生活污水、医院污水、畜禽养殖厂污水、屠宰污水、农贸市场污水、河，湖等自然水体或饮用水。
[0009]特别是，所述释放剂选择为氨基羧酸盐络合剂、醇胺类络合剂、羟基羧酸盐络合剂、有机膦酸盐络合剂或聚丙烯酸类络合剂中的一种或多种。
[0010]尤其是，所述释放剂选择乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸二钠二水合物、乙二胺四甲叉膦酸钠及其复配物，进一步优选为乙二胺四乙酸二钠或其二水合物。
[0011]本专利技术另一方面提供一种基于铝盐混凝预处理的水中病毒含量检测方法，包括如下顺序进行的步骤：
[0012]1)测定或/和调节待测水样的pH，然后加入絮凝剂并混合均匀；
[0013]2)向水样中加入pH调节剂，调节水样pH为4
‑
9，进行絮凝处理；然后进行固液分离处理，获得包裹病毒的絮凝胶体或固体；
[0014]3)向絮凝胶体中加入释放剂，混合均匀，胶体溶解成液态，病毒从胶体中释放出来，获得病毒富集溶液；
[0015]4)对病毒富集溶液进行核酸提取，并进行核酸定量PCR测定。
[0016]其中，步骤1)所述待测水样选择农村或城市生活污水、医院污水、畜禽养殖厂污水、屠宰污水、农贸市场污水、河，湖，江，海等自然水体或饮用水。
[0017]本专利技术中的待测水样除了上述水样之外，其他任何水样均适用于本专利技术。
[0018]特别是，步骤1)中所述的絮凝剂选择铝盐絮凝剂。
[0019]尤其是，所述铝盐絮凝剂选择为氯化铝、硫酸铝、聚合氯化铝或聚合硫酸铝铁。
[0020]特别是，所述絮凝剂的添加量为加入絮凝剂后，水样中絮凝剂铝离子的浓度为0.001
‑
0.01M，优选为0.003M。
[0021]尤其是，步骤1)中所述待测水样的pH为4
‑
9，优选为5
‑
7，进一步优选为6。
[0022]特别是，调节待测水样的pH为4
‑
9，优选为5
‑
7，进一步优选为6。
[0023]若测定的水的pH值为4
‑
9，则不需要进行pH调节；如果测定的水的pH值不在4
‑
9之间，则添加pH调节剂，调整水的pH至4
‑
9，优选为5
‑
7，进一步优选为6。pH调节剂选盐酸或氢氧化钠溶液，优选为1M盐酸溶液或氢氧化钠溶液。所述絮凝处理是将调节pH值后的水进行搅拌，絮凝剂与水液充分混合。
[0024]絮凝处理时间至少15min，优选为15
‑
20min。将调节pH值后的水置于摇床中，在转速为100
‑
200rpm的条件下混合至少15min，优选为15
‑
20min。
[0025]其中，步骤2)中采用离心、过滤或抽滤的方法进行所述固液分离处理。
[0026]特别是，所述絮凝处理过程中调节水样的pH为5
‑
7。
[0027]尤其是，将水样pH调节为4
‑
9后，还包括对水样进行混合，使得加入到水样中的絮凝剂形成胶体，水体中的病毒与形成的胶体充分接触并吸附于胶体，絮凝、沉淀水体中的病毒。
[0028]特别是，将水样pH调节为4
‑
9后，将水样置于摇床上进行混合。
[0029]其中，步骤2)中所述絮凝处理时间至少15min，优选为15
‑
20min。
[0030]特别是，步骤2)中采用离心方法进行所述固液分离的过程中，离心处理温度为4
‑
25℃，优选为4℃；离心力为1700
‑
2500g；离心处理时间为5
‑
15min。
[0031]尤其是，固液本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种提高基于铝盐混凝预处理的水中病毒检测效率的方法，其特征是，包括向待测水样中加入絮凝剂，然后向进行絮凝处理后的包裹病毒的胶体中加入释放剂，使得胶体溶解，病毒从胶体中释放。2.如权利要求1所述的方法，其特征是，所述释放剂选择为氨基羧酸盐络合剂、醇胺类络合剂、羟基羧酸盐络合剂、有机膦酸盐络合剂或聚丙烯酸类络合剂中的一种或多种。3.一种基于铝盐混凝预处理的水中病毒含量的检测方法，其特征是，包括如下顺序进行的步骤：1)测定或/和调节待测水样的pH，然后加入絮凝剂并混合均匀；2)向水样中加入pH调节剂，调节水样pH为4
‑
9，进行絮凝处理；然后进行固液分离处理，获得包裹病毒的絮凝胶体或固体；3)向絮凝胶体中加入释放剂，混合均匀，胶体溶解成液态，病毒从胶体中释放出来，获得病毒富集溶液；4)对病毒富集溶液进行核酸提取，并进行核酸定量PCR测定。4.如权利要求3所述的检测方法，其特征是，步骤1)所述待测水样选择农村或城市生活污水、医院污水、畜禽养殖厂污水、屠宰...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨敏，于丽娜，田哲，
申请(专利权)人：中国科学院生态环境研究中心，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。