一种用于脑恶性胶质瘤诊断和预后的趋化因子及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物诊断和医药技术领域，具体为胶质瘤标志物基因的表达产物在制备用于胶质瘤诊断、筛查和/或预后的检测试剂盒中的应用。本发明专利技术研究表明，胶质瘤患者肿瘤组织CCL18的mRNA和蛋白水平显著高于健康人群，且其基因和/或基因的表达产物与患者病情及预后显著性相关。因此CCL18基因及其表达产物能够作为预后评估和治疗效果的分子标志物，并应用于胶质瘤患者病情及预后评估的试剂中。本发明专利技术还提供用于胶质瘤诊断、筛查和/或预后的检测试剂盒，包括用于对样本中CCL18蛋白表达量进行检测的检测试剂。检测试剂。检测试剂。

【技术实现步骤摘要】
一种用于脑恶性胶质瘤诊断和预后的趋化因子及其应用


[0001]本专利技术属于生物诊断和医药
，具体涉及一种潜在的胶质瘤生物标记物CCL18基因功能及其应用，包括CCL18在恶性胶质瘤诊断、治疗以及预后中的应用。

技术介绍

[0002]胶质母细胞瘤（Glioblastoma, GBM）是成人大脑及中枢神经系统中最常见的原发性恶性肿瘤，由于缺乏有效的早期诊断和治疗手段，发病率和致死率都极高，被认为是神经外科中最棘手的难治性肿瘤之一。2016年世界卫生组织（WHO）将胶质瘤分为Ⅰ至 IV 级。其中GBM作为IV 级胶质瘤，恶性程度最高，进展快、易复发，患者中位总生存期（overallsurvival,OS）时间约为8个月，五年生存率仅为约6.8%。GBM细胞的高度侵袭性、对于化疗和放疗的耐受性、胶质瘤周边脑组织高水平的血管形成、复杂的肿瘤微环境以及由于血脑屏障导致化疗药物难以浸润等，导致目前针对胶质瘤的手术切除、放疗和化疗效果欠佳。近年来，新的治疗方法陆续出现，这些治疗方法可能改善GBM患者的生活质量，但不能显著性提高GBM患者的总生存期。因此，在胶质瘤组织中寻找具有指标意义的的肿瘤标志物和治疗靶点对于患者诊治具有重要意义。
[0003]肿瘤微环境（TME）是GBM发展和治疗的关键因素之一，是肿瘤细胞与宿主免疫系统之间的主要相互作用位置。通过趋化因子和趋化因子受体之间的相互作用，不同的免疫细胞亚群被招募到TME中。根据蛋白质序列中的前两个半胱氨酸（C）残基位置，可将细胞趋化因子分为四个类别：CC
‑<br/>趋化因子、CXC
‑
趋化因子、C
‑
趋化因子和CX3C
‑
趋化因子。趋化因子对肿瘤生长、转移、进展和预后具有明显的影响。其中，CCL18（C
‑
C Motif Chemokine Ligand 18）主要由抗原呈递细胞（APC）产生，对初始T细胞、CD4
+
和CD8
+ T细胞及未活化的淋巴细胞具有趋化活性，因此可能在体液免疫和细胞免疫中发挥作用。研究发现高危GBM患者表现出较高的CCL18表达水平，这与高水平的Tim
‑
3相关，表明由趋化因子介导的免疫细胞浸润与GBM预后之间存在关联。越来越多的研究表明，趋化因子可直接影响癌细胞增殖从而调控肿瘤进展，或通过间接调节免疫细胞的募集，影响肿瘤生长和转移。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供趋化因子CCL18在预测胶质瘤预后中的应用。
[0005]本专利技术研究表明，CCL18在胶质瘤中显著高表达，可用于胶质瘤的辅助诊断；高表达的CCL18基因和蛋白均与胶质瘤的不良预后相关，提示CCL18基因及其表达产物能够作为预后评估和治疗效果的分子标志物。
[0006]本专利技术通过生物信息学分析方法，检测CCL18基因在胶质母细胞瘤（GBM）组织（Tumor）及正常组织（Normal）中的mRNA表达量，显示CCL18基因在胶质母细胞瘤组织（Tumor）与正常组织（Normal）的mRNA表达存在差异，CCL18在癌组织的表达水平均显著高于正常组织。
[0007]本专利技术通过Cox回归方法分析CCL18 mRNA水平与GBM患者总生存期的相关性，对比
CCL18基因低表达的患者，CCL18高表达的GBM患者总生存期（OS）、疾病特异性生存期（DSS）及无进展生存期（PFI）显著降低，提示CCL18基因的表达产物能作为GBM的预后标志物。通过检测CCL18基因的表达，可以评估GBM患者的预后、提示患者的潜在生存时间，同时可以用于评估GBM的治疗效果。更有意义的是，与其它34种趋化因子相比，CCL18对于GBM患者总生存率风险比（HR）更高，即CCL18高表达的GBM患者总生存率更短，提示CCL18可作为GBM诊断与预后更准确的分子标志物。
[0008]结合ROC曲线分析表明，1年预测期内，CCL18基因应用于GBM总生存期（OS）、疾病特异性生存期（DSS）及无进展生存期（PFI）诊断的曲线下面积（AUC）值均高于0.6，显示其作为胶质母细胞瘤诊断和预后标志物具有高特异性和高灵敏度。通过检测CCL18基因表达，及时评估胶质母细胞瘤患者的预后，对调整临床治疗策略，进一步提高临床治疗效果，改善患者生存质量具有指导意义。
[0009]据此，本专利技术提供的趋化因子CCL18在预测胶质瘤预后中的应用，具体包括提供胶质瘤标志物CCL18基因和/或CCL18基因的表达产物在制备用于胶质瘤诊断、筛查和/或预后的检测试剂中的应用。所述CCL18基因，其序列如SEQ ID NO: 1所示。
[0010]可选择地，上述的胶质瘤标志物CCL18基因的表达产物包括CCL18 mRNA和/或CCL18蛋白。所述CCL18蛋白序列如SEQ ID NO: 2所示。
[0011]本专利技术还提供一种用于胶质瘤诊断、筛查和/或预后的检测试剂盒。
[0012]所述检测试剂盒包括：用于对待测样品进行预处理以获得样本的预处理试剂，用于对样本中CCL18蛋白表达量进行检测的检测试剂。
[0013]本专利技术中，所述检测试剂包括：特异识别/结合CCL18基因的表达产物的抗体。
[0014]所述抗体，包括单克隆抗体、多克隆抗体或纳米抗体；优选单克隆抗体。
[0015]所述的特异识别/结合CCL18基因的表达产物的抗体，可识别人源全长CCL18蛋白，亲和力达到20 pg/mL或更高。
[0016]所述检测试剂具体包括：组织裂解液、CCL18蛋白的特异性抗体包被的96孔板、CCL18蛋白标准样品冻干粉、标准样品稀释剂、生物素偶联的二抗、生物素偶联抗体稀释剂、过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素、链霉亲和素稀释剂、三甲基苯（TMB）底物溶液、反应终止剂、洗涤缓冲液等。
[0017]此外，所述检测试剂盒还包括：标签或使用说明书；所述标签或使用说明书注明所述试剂盒用于预测胶质瘤的预后等。定量CCL18蛋白的试剂可基于免疫学的已知方法来发挥其功能：例如，蛋白质印迹、酶联免疫吸附测定法（ELISA）、放射免疫测定法、免疫组织化学法、免疫荧光标记法等，定量检测CCL18蛋白。
[0018]本专利技术中，所述待测样品为胶质瘤患者脑组织。
[0019]本专利技术中，所述的胶质瘤包括WHO 2016年胶质瘤分类中的
Ⅰ‑Ⅳ
级胶质瘤。
[0020]本专利技术中，人源CCL18基因的蛋白编码区（CDS）序列可参考美国国家生物技术信息中心（NIH）Gene ID:6362（NM_002988），具体序列如下：atgaagggccttgcagctgccctccttgtcctcgtctgcaccatggccctctgctcctgtgcacaagttggtaccaacaaagagctctgctgcctcgtctatacctcctggcagattccacaaaagttcatagttgactattctgaaaccagccc本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.胶质瘤标志物基因的表达产物在制备用于胶质瘤诊断、筛查和/或预后的检测试剂中的应用；所述CCL18基因，其序列如SEQ ID NO: 1所示。2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的胶质瘤标志物CCL18基因的表达产物为CCL18 mRNA和/或CCL18蛋白；所述CCL18蛋白序列为SEQ ID NO: 2所示。3.一种用于胶质瘤诊断、筛查和/或预后的检测试剂盒，其特征在于，包括：用于对待测样品进行预处理以获得样本的预处理试剂，用于对样本中CCL18蛋白表达量进行检测的检测试剂；所述CCL18蛋白序列为SEQ ID NO: 2所示。4.根据权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂包括：特异识别/结合CCL18基因的表达产物的抗体。5.根据权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于，所述抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体或纳米抗体。6. 根据权利要求5所述的检测试剂盒，其特征在于，所述的特异识别...

【专利技术属性】
技术研发人员：李继喜，李媛媛，高文青，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：