一种康土抑草菌的制备方法技术

本方案属于抑草菌领域，具体涉及一种康土抑草菌的制备方法，通过独特的培养基原料配比以及专门的工艺流程，利用生产的微生物及其代谢产物来防治农业草害，改良土壤，与人工及机械除草相比，其具有投资少、经济效益高、有效期长等优点。与化学除草剂草甘膦相比，其具有对环境安全，相容性好，对作物不产生药害，不但对土壤无污染，同时还可以改良土壤促进作物成长。对人和动物安全无影响，符合可持续绿色发展的要求。展的要求。展的要求。

【技术实现步骤摘要】
一种康土抑草菌的制备方法


[0001]本方案属于抑草菌领域，具体涉及一种康土抑草菌的制备方法。

技术介绍

[0002]目前，国内外农业防治草害通常采用化学除草剂
‑‑‑
草甘膦。它是一种常用的灭生性有机磷化学除草剂，随着草甘膦化学除草剂的大量施用，其对生态环境造成的负面影响逐渐显现，使得环境受到严重污染，还使得作物或非靶标生物及后茬作物产生药害，长期施用还可使得杂草产生抗性，除草效果降低。草甘膦的危害主要表现在对土壤微生物的影响，对水生生物鱼类的毒性，以及它在土壤中易吸附、难降解。草甘膦能够在土壤中吸附、迁移，并通过扩散转移到水体，对环境和生物产生影响，并且能够通过生物富集对人体产生影响。当施用高浓度草甘膦后，土壤微生物数量普遍会降低，微生物活性被抑制，草甘膦进入水体中，对水生生物也会产生一定的毒害影响。动物畜禽误饮被草甘膦污染的水或者误食被草甘膦污染的食物都会造成畜禽中毒。在喷洒草甘膦时，当人们防护不当药液直接与人体接触又或者污染饮食而进入人体后会危害人体健康，人体吸入雾液也会导致呼吸系统不适，眼睛接触雾液还会引起结膜炎，皮肤接触雾液会引发皮肤炎症。因此，我们迫切需要专利技术一种更为生态友好的方法、产品来进行农业草害的防治。
[0003]众所周知，化学农药污染程度高，环境危害大，破坏生态平衡，农副产品中的药残对人类造成直接威胁。一些长期使用化学除草剂的地块出现了残留累积的现象，严重影响后茬作物的生长，危害土壤生境，破坏生态环境，而生物农药是一种利用生物活体或其代谢产物对靶标生物进行防治的一类农药制剂，其具有对非靶标生物安全，选择性强，对人畜及有益动物无伤害，对生态环境无影响等优点，成为目前本领域技术人员研究的热点。
[0004]因此，急需一种具有除草活性、适应性强、稳定性好、不易老化的抑草菌，并合理利用特种植物提取物与微生物与微生物代谢产物及微生物酶之间的协同作用，通过发酵技术生产，可实现工业化生产，用于有机绿色可持续农业种植业，可有效保护生态环境，避免人畜及有益动物伤害，具有发展成为防治农业草害及土壤修复的新型绿色除草剂的潜力，市场前景广阔。

技术实现思路

[0005]本方案的目的在于提供一种康土抑草菌的制备方法，以解决使用化学除草剂对生态环境有不良影响的问题。
[0006]为了达到上述目的，本方案提供一种康土抑草菌的制备方法，包括以下步骤：
[0007]步骤S10：从广西国有高峰林场桉树人工林中，选择杂草密度大且有零散杂草枯萎的地块进行土壤取样；
[0008]步骤S20：用灭菌药匙取10克土样加入装有玻璃珠的盛有100ML无菌水三角瓶中，塞上硅胶塞，在室温条件下置于摇床200转每分钟震荡洗涤30分钟，此样品浓度记为10
‑1稀释液，吸取1ML稀释液加入到装有9ML无菌水试管中，充分混均，此时的溶液浓度记为10
‑2稀
释液，以同样的方法依次进行稀释，将土样稀释为10
‑5稀释液；然后在超净工作台内将浓度为10
‑3、10
‑4和10
‑5三个不同稀释度的稀释液用移液枪移取200微升涂布于高氏一号培养基中，所述高氏一号培养基中加入有浓度为50毫克每升的重铬酸钾，各个浓度培养重复三次；将上述接种过土壤悬液的平板倒置与30摄氏度恒温培养箱中，培养7天；
[0009]步骤S30：依据菌落形态产孢的特征，挑选具有链霉菌典型菌落的单菌落进行重复平板划线，直到平板上长出的菌落外部形态一致，从而获得链霉菌单菌落；
[0010]步骤S40：将典型链霉菌菌落分别接种到发酵培养基，进行发酵，并得到其发酵上清液；
[0011]步骤S50：将上述发酵上清液滴加于无菌滤纸片上，以枯草芽孢杆菌为检定菌，滤纸片置于培养基平板上，在滤纸片另侧相距1厘米处放置一片含谷氨酰胺的滤纸片，于34摄氏度培养24小时，选择对检定菌有抑制作用，且在谷氨酰胺滤纸片一侧抑菌圈消失的菌株，从而获得对谷氨酰胺生物合成有竞争抑制作用的链霉菌；
[0012]步骤S60：通过US
‑
EMS复合诱变，重复上述试验，直至筛选到具有高除草活性的生产菌株，命名为A菌株；
[0013]步骤S70：将A菌株的斜面菌株接入灭菌的种子培养基，在30摄氏度200转每分钟摇床震荡培养36小时，得到A种子液；
[0014]步骤S80：将A种子液以1％的接种量接入一级种子灌灭菌培养基中，在30摄氏度转速100
‑
360转每分钟，无菌空气通气量0.1
‑
0.5v/vmin，灌压0.03MP的条件下培养30小时，得到B种子液；
[0015]步骤S90：将B种子液以6％的接种量接入二级发酵灌灭菌培养基，在温度26
‑
30摄氏度转速150
‑
300转每分钟，无菌空气通气量0.2
‑
0.8v/vmin，灌压0.03
‑
0.06MP的条件下培养72小时；
[0016]步骤S100：每隔24小时向发酵液流加发酵总重量5％灭菌营养液，再在步骤S90的条件下培养144小时，即得抑草菌发酵母液。
[0017]本方案利用微生物及其代谢产物来防治农业草害，改良土壤，与人工及机械除草相比，其具有投资少、经济效益高、有效期长等优点。与化学除草剂草甘膦相比，其具有对环境安全，相容性好，对作物不产生药害，不但对土壤无污染，同时还可以改良土壤促进作物成长。对人和动物安全无影响，符合可持续绿色发展的要求。
[0018]进一步，还包括步骤S110：取步骤S90中的剩余的种子液，并加入淀粉制成固态的球状空心培养基；然后利用注射器往球状空心培养基中注入抑草菌发酵母液，之后将可降解的膜包覆在球状空心培养基的表面。
①
相对于传统的将抑草菌发酵母液稀释后喷洒的方式，将抑草菌发酵母液注入到球状空心培养基内，可以直接丢到土壤里，对草的根部进行抑制，这样抑草效果更好；
②
由于不用喷洒，不会被叶子或者农作物的叶子挡住，可大幅度的减少浪费。
③
利用步骤S90中剩余的种子液并加入淀粉制成固态的球状空心培养基，可以为抑草菌提供持续的养分，这样可大幅度增加本抑草菌的效果时间，同时也算是废物利用，大幅度的节约了成本；
④
可降解的膜的设置，可使得施药时机非常可控，如果需要让其晚一点生效，正常投放即可，如果需要其立马生效，则可撕坏表面的膜即可，非常的方便；
⑤
由于是采用注射器进行注入的，注入的时候会留下一个注射口，注射口的设置，一方面可保证可降解膜降解后球状空心培养基不会处于密封的状态，抑菌能出一个正常的工作状态；另一方
面注射口的尺寸也不会过大，可避免球状空心培养基内的抑草菌快速的流失，最后，这些功能都是本身注射这个流程带来的好处，也就是说无需额外的工序即可达成，非常方便。
[0019]进一步，还包括步骤S120：制作尺寸更大的固态的球状空心培养基，同时将步骤S11本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种康土抑草菌的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤S10：从广西国有高峰林场桉树人工林中，选择杂草密度大且有零散杂草枯萎的地块进行土壤取样；步骤S20：用灭菌药匙取10克土样加入装有玻璃珠的盛有100ML无菌水三角瓶中，塞上硅胶塞，在室温条件下置于摇床200转每分钟震荡洗涤30分钟，此样品浓度记为10
‑1稀释液，吸取1ML稀释液加入到装有9ML无菌水试管中，充分混均，此时的溶液浓度记为10
‑2稀释液，以同样的方法依次进行稀释，将土样稀释为10
‑5稀释液；然后在超净工作台内将浓度为10
‑3、10
‑4和10
‑5三个不同稀释度的稀释液用移液枪移取200微升涂布于高氏一号培养基中，所述高氏一号培养基中加入有浓度为50毫克每升的重铬酸钾，各个浓度培养重复三次；将上述接种过土壤悬液的平板倒置与30摄氏度恒温培养箱中，培养7天；步骤S30：依据菌落形态产孢的特征，挑选具有链霉菌典型菌落的单菌落进行重复平板划线，直到平板上长出的菌落外部形态一致，从而获得链霉菌单菌落；步骤S40：将典型链霉菌菌落分别接种到发酵培养基，进行发酵，并得到其发酵上清液；步骤S50：将上述发酵上清液滴加于无菌滤纸片上，以枯草芽孢杆菌为检定菌，滤纸片置于培养基平板上，在滤纸片另侧相距1厘米处放置一片含谷氨酰胺的滤纸片，于34摄氏度培养24小时，选择对检定菌有抑制作用，且在谷氨酰胺滤纸片一侧抑菌圈消失的菌株，从而获得对谷氨酰胺生物合成有竞争抑制作用的链霉菌；步骤S60：通过US
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EMS复合诱变，重复上述试验，直至筛选到具有高除草活性的生产菌株，命名为A菌株；步骤S70：将A菌株的斜面菌株接入灭菌的种子培养基，在30摄氏度200转每分钟摇床震荡培养36小时，得到A种子液；步骤S80：将A种子液以1％的接种量接入一级种子灌灭菌培养基中，在30摄氏度转速100
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360转每分钟，无菌空气通气量0.1
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0.5v/vmin，灌压0.03MP的条件下培养30小时，得到B种子液；步骤S90：将B种子液以6％的接种量接入二级发酵灌灭菌培养基，在温度26
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30摄氏度转速150
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300转每分钟，无菌空气通气量0.2
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0.8v/vmin，灌压0.03
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0.06MP...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴立潮，李辉，唐健，谢太理，王修海，唐亚斌，覃妹英，
申请(专利权)人：广西地源之本肥业有限公司，
类型：发明
国别省市：