一种基于金纳米簇聚集诱导增强的荧光侧流层析检测三聚氰胺的方法技术

本发明专利技术公开了一种基于金纳米簇聚集诱导增强的荧光侧流层析检测三聚氰胺的方法，属于分析化学技术领域。本发明专利技术基于ATT

【技术实现步骤摘要】
一种基于金纳米簇聚集诱导增强的荧光侧流层析检测三聚氰胺的方法


[0001]本专利技术涉及一种基于金纳米簇聚集诱导增强的荧光侧流层析检测三聚氰胺的方法，属于分析化学


技术介绍

[0002]三聚氰胺(C3H6N6)是一种含氮的三嗪杂环有机化合物，被广泛用于塑料、粘合剂、胶合板、化肥、水泥、清洁剂、染料、织物和油漆等的制造。日常生活中只有非常少量的三聚氰胺能够从环境和包装材料中进入到食品。然而，由于三聚氰胺氮含量高(66.6％)且成本低廉，常被非法添加到牛奶中来提高其表观蛋白浓度，导致了严重的食品安全问题。美国婴儿配方奶粉中三聚氰胺的限量为20.0μM(2.5ppm)，中国为8.0μM(1ppm)。摄入过量的三聚氰胺会导致体内形成不溶性的三聚氰胺氰尿酸盐复合物，可引发婴儿的肾结石、肾衰竭，甚至死亡。因此，对乳制品中的三聚氰胺进行现场监测和快速检测具有重要意义。
[0003]近来，许多快速检测方法已用于三聚氰胺的检测，比如免疫分析、酶联免疫吸附试验(ELISA)、适配体传感器和纳米材料传感器。其中，很多都是基于金属(金、银、铜)和核酸生物大分子进行复合，成本高，且荧光增强的倍数很小；还有一些是基于金属离子(汞离子)间接进行检测，存在需要离子介导、检测体系复杂、容易受到其他离子干扰等问题。
[0004]侧流层析试纸(LFA)是一种方便、直接的现场检测分析形式，因其便携、操作简单、快速、价格低廉而受到了广泛的关注。而目前，关于LFA检测三聚氰胺的报道很少，且大多为比色LFA，或是以抗体和适配体等生物分子作为识别元件，存在生物分子制备成本高、稳定性差等局限。

技术实现思路

[0005][技术问题][0006]目前采用试纸检测三聚氰胺，都是需要以抗体和适配体等生物分子作为识别元件，存在生物分子制备成本高、稳定性差等问题。
[0007][技术方案][0008]为了解决上述问题，本专利技术基于ATT
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AuNCs(6
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氮杂
‑2‑
硫代胸腺嘧啶
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金纳米簇)的聚集诱导增强效应(AIE)构建了荧光侧流层析试纸(ATT
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AuNCs
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LFA)，用于三聚氰胺的检测。本专利技术中的荧光侧流层析试纸作用机理是通过鱼精蛋白(Protamine)的胍基与ATT配体间的氢键作用将ATT
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AuNCs探针固定在检测线(T线)上，样品中若存在三聚氰胺则可以被探针捕获，探针的荧光强度与目标物浓度呈正比；而当三聚氰胺不存在时，检测线的荧光强度不发生明显变化。基于荧光开启模式实现了对三聚氰胺的检测及定量判定，本专利技术的方法可用于牛奶样品中三聚氰胺的测定。
[0009]本专利技术的第一个目的是提供一种检测溶液中三聚氰胺的方法，包括如下步骤：
[0010](1)ATT
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AuNCs的制备：
[0011]将6
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氮杂
‑2‑
硫代胸腺嘧啶(ATT)溶液和氯金酸(HAuCl4)溶液混合，避光进行反应，反应结束后，纯化，得到所述的ATT
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AuNCs溶液；
[0012](2)检测：
[0013]在待测溶液中加入ATT
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AuNCs溶液和二甲亚砜(DMSO)，避光孵育；之后在410nm激发下测试得到荧光发射光谱；最后将荧光发射光谱530nm处荧光强度带入标准曲线，即得到待测溶液中三聚氰胺的浓度。
[0014]在本专利技术的一种实施方式中，步骤(1)所述6
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氮杂
‑2‑
硫代胸腺嘧啶(ATT)溶液是以氢氧化钠(NaOH)溶液为溶剂制备得到80mM的ATT溶液；其中氢氧化钠溶液的浓度为0.2M。
[0015]在本专利技术的一种实施方式中，步骤(1)所述氯金酸(HAuCl4)溶液的浓度为10mg/mL。
[0016]在本专利技术的一种实施方式中，步骤(1)所述6
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氮杂
‑2‑
硫代胸腺嘧啶(ATT)溶液和氯金酸(HAuCl4)溶液的体积比为1：1。
[0017]在本专利技术的一种实施方式中，步骤(1)所述反应是25℃、800rpm连续搅拌反应1h。
[0018]在本专利技术的一种实施方式中，步骤(1)所述纯化是经50kDa的Millipore超滤管纯化。
[0019]在本专利技术的一种实施方式中，步骤(1)制备的ATT
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AuNCs溶液需要在4℃黑暗环境中保存。
[0020]在本专利技术的一种实施方式中，步骤(1)制备的ATT
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AuNCs溶液的浓度为10mg/mL。
[0021]在本专利技术的一种实施方式中，步骤(2)所述的待测溶液、ATT
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AuNCs溶液、二甲亚砜(DMSO)的体积比为1：8：1。
[0022]在本专利技术的一种实施方式中，步骤(2)所述的避光孵育30℃下避光孵育10min。
[0023]在本专利技术的一种实施方式中，步骤(2)所述的ATT
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AuNCs溶液是步骤(1)中ATT
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AuNCs溶液稀释600倍得到的。
[0024]在本专利技术的一种实施方式中，步骤(2)所述标准曲线的构建方法为：
[0025]用水制备了一系列不同浓度(0、0.5、1、2.5、5、10、25、50、100、200μM)的三聚氰胺溶液；在160μL的ATT
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AuNCs溶液(稀释倍数为600)中加入20μL的二甲亚砜(DMSO)和20μL的不同浓度的三聚氰胺溶液，30℃下避光孵育10min；在410nm激发下测试得到荧光发射光谱；根据荧光发射光谱在530nm处荧光强度与水(不添加三聚氰胺)中荧光强度的比值，与三聚氰胺的浓度构建标准曲线。
[0026]在本专利技术的一种实施方式中，步骤(3)所述标准曲线为(F
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F0)/F0＝0.485LgC
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1.2791；其中F为待测溶液的荧光发射光谱在530nm处荧光强度；F0为不含有三聚氰胺的水溶液的荧光发射光谱在530nm处荧光强度；C为待测溶液中三聚氰胺的浓度(μM)；R2＝0.9947；检测限为45nM(3σ/s)，检测范围为0.5
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200μM。
[0027]本专利技术的第二个目的是提供一种制备检测三聚氰胺的侧流层析试纸(LFA)的方法，包括如下步骤：
[0028]将鱼精蛋白溶液喷在硝化纤维素膜(NC)上，之后将ATT
‑
AuNCs溶液固定在同样的位置，形成含有检测线的硝化纤维素膜(NC)；
[0029]之后将含有检测线的硝化纤维素膜(NC)、样品垫、吸水垫依次粘贴在PVC底板上，其中，样品垫叠在含有检测线的硝化纤维素膜(NC)上，二者重叠2mm；吸水垫叠在含有检测
线的硝化纤维素膜(NC)上，二者重叠2mm；检测线和吸水垫之间的距离为24mm。
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测溶液中三聚氰胺的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)ATT
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AuNCs的制备：将6
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氮杂
‑2‑
硫代胸腺嘧啶ATT溶液和氯金酸HAuCl4溶液混合，避光进行反应，反应结束后，纯化，得到所述的ATT
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AuNCs溶液；(2)检测：在待测溶液中加入ATT
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AuNCs溶液和二甲亚砜，避光孵育；之后在410nm激发下测试得到荧光发射光谱；最后将荧光发射光谱530nm处荧光强度带入标准曲线，即得到待测溶液中三聚氰胺的浓度。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述的待测溶液、ATT
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AuNCs溶液、二甲亚砜的体积比为1：8：1。3.一种制备检测三聚氰胺的侧流层析试纸的方法，其特征在于，包括如下步骤：将鱼精蛋白溶液喷在硝化纤维素膜上，之后将ATT
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AuNCs溶液固定在同样的位置，形成含有检测线的硝化纤维素膜；之后将含有检测线的硝化纤维素膜、样品垫、吸水垫依次粘贴在PVC底板上；其中，样品垫叠在含有检测线的硝化纤维素膜上，二...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭池方，岳鑫，钱志娟，谢正军，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：