一种从土壤中分离产淀粉酶的微生物的方法技术

本发明专利技术属于微生物领域，涉及一种从土壤中筛选产淀粉酶的微生物的方法，并进行了菌株鉴定。通过碘染色法产生水解圈进行初筛，采用3，5

【技术实现步骤摘要】
一种从土壤中分离产淀粉酶的微生物的方法


[0001]本专利技术属于微生物领域，具体涉及一种从土壤中分离产淀粉酶的微生物的方法。

技术介绍

[0002]公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
[0003]淀粉是高等植物自然储存的多糖，是由葡萄糖分子聚合而成的均聚物。它具有良好的生物降解性和可再生性。淀粉制品不仅仍然是现今人类所不可或缺的基本食物来源，也为现代工业和生产活动提供了大量重要的原材料。利用淀粉酶对淀粉进行异糖化的作用而产生葡萄糖、麦芽糊精糖和麦芽糖等。
[0004]淀粉酶作为一种生物催化剂，是中国最早的投入研制到实现工业化的生产应用的主要酶制剂种类之一。按照其水解作用方式的不同，可以将淀粉酶分为两大类，分别为α
‑
淀粉酶、β
‑
淀粉酶。作为生活中常用的淀粉酶，α
‑
淀粉酶是一种钙金属酶，在缺钙时不能发挥作用。它能催化淀粉及其衍生物内部的α
‑
1，4
‑
糖苷键断裂，也能跨越α
‑
1，6
‑
糖苷键。其在动物消化方面起到促进作用。β
‑
淀粉酶是一类可以把淀粉水解为麦芽糖的作用酶。仅作用于非还原端，每次切割下一个麦芽糖为单位，主要催化α
‑
1，4
‑
糖苷键。常见于甘薯中，不存在于动物组织中。淀粉酶的生产制备方法包括微生物发酵及动植物提取。微生物发酵产淀粉酶具有高稳定性，高生产率和较低的生产成本等优点，所以工业应用上优先选择微生物发酵法。淀粉酶的用途广泛，涉及到食品业、纺织业、造纸业、医疗卫生、饲料业等工业中，并且在环境保护、化学试剂生产等方面也发挥了重要作用，有较高的经济价值和社会效益，其产量约占工业酶总产量的85％以上。随着近几年学术界对生物制酶工业及其发展现状的认识的提高，选育高产淀粉酶的优良菌株日益成为一个当下重要研究和发展热点。目前仍然以自然分离野生型产酶菌株后驯化或诱变育种为主，需要持续从自然界中筛选挖掘具有较高性能的菌株，为淀粉酶的工业生产提供新的选择，增添新的动力，尽可能的为工业生产方面减少人力、物力等成本。
[0005]土壤中蕴含着丰富的微生物资源，富含可以产生出各种特殊酶类作用的优良菌株。从土壤微生物中分离出来的产淀粉酶菌株大多以芽孢杆菌属为主，例如Bacillus megaterium(巨大芽孢杆菌)、Bacillus amyloliquefaciens(解淀粉芽孢杆菌)等，也有分离出放线菌，曲霉，酵母等微生物。针对淀粉酶的研究，目前集中于产淀粉酶菌株的选育，基于产酶条件的培养基优化与控制和菌株诱变效应等机制的研究。但仍缺少拥有优越性能，酶的生物活性较高的菌株，以满足工业生产的需求。

技术实现思路

[0006]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种从土壤中分离产淀粉酶的微生物的方法。
[0007]本专利技术是通过以下技术方案实现的：以下所涉及的浆料的浓度若无特殊说明，均
为质量百分数；所涉及的试剂、药品的用量，若无特殊说明，都是相对于绝干浆而言。
[0008]本专利技术的第一个方面，提供了一种从土壤中分离产淀粉酶的微生物的方法，包括：
[0009]取地表土壤，加入无菌水，混合均匀，得到样品稀释液；
[0010]将所述样品稀释液注入固体筛选培养基进行倒置培养，然后，对不同形态的单菌落进行分类和纯化，保藏；
[0011]对纯化的菌株进行分子生物学鉴定、溶圈试验、酶活性测定，得到产淀粉酶的微生物。
[0012]本专利技术筛选出了拥有优越性能，酶的生物活性较高的菌株，为后续淀粉酶的研究提供更多的目标菌株，为工业生产提供具有潜在开发价值的菌株。
[0013]本专利技术的第二个方面，提供了上述的方法筛选出的产淀粉酶的微生物，包括：巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium、灿烂类芽孢杆菌Paenibacillus lautus、草地链霉菌Streptomyces pratensis、细黄链霉菌Streptomyces microflavus、暗黑链霉菌Streptomyces atratus、田无链霉菌Streptomyces tanashiensis、华西肠杆菌Enterobacter huaxiensis、非脱羧勒克菌Leclercia adecarboxylata、黑曲霉Aspergillus niger、黄曲霉Aspergillus flavus、DT06Simplicillium lanosoniveum、产红青霉Penicillium rubens、酒色青霉Penicillium vinaceum、产黄青霉Penicillium chrysogenum，链格孢Alternaria alternata、枝孢菌Cladosporium allicinum。
[0014]本专利技术的有益效果在于：
[0015](1)本专利技术采用添加可溶性淀粉的平板从土壤中分离出31株产淀粉酶菌株，经过基因序列比对，鉴定出9株巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)，1株灿烂类芽孢杆菌(Paenibacillus lautus)，1株草地链霉菌(Streptomyces pratensis)，1株细黄链霉菌(Streptomyces microflavus)1株暗黑链霉菌(Streptomyces atratus)，1株田无链霉菌(Streptomyces tanashiensis)，1株华西肠杆菌(Enterobacter huaxiensis)，1株非脱羧勒克菌(Leclercia adecarboxylata)，2株黑曲霉(Aspergillus niger)，2株黄曲霉(Aspergillus flavus)，2株DT06(Simplicillium lanosoniveum)，1株产红青霉(Penicillium rubens)，1株酒色青霉(Penicillium vinaceum)，5株产黄青霉(Penicillium chrysogenum)，1株链格孢(Alternaria alternata)，1株枝孢菌(Cladosporium allicinum)。使用碘染色法对已经成功分离出的菌株进行了初筛，可知有29株菌株是可以明显的观察到产生了透明圈，H/C值的大小直接反映出菌株产酶能力水平上的相对强弱，比值越大，产酶能力越强。可以初步快速的筛选出产酶能力较强的菌株。
[0016](2)本专利技术的方法简单、成本低、实用性强，易于推广。
附图说明
[0017]构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。
[0018]图1为本专利技术实施例1中细菌16SrRNA系统发育树；
[0019]图2为本专利技术实施例1中真菌ITS系统发育本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种从土壤中分离产淀粉酶的微生物的方法，其特征在于，包括：取地表土壤，加入无菌水，混合均匀，得到样品稀释液；将所述样品稀释液注入固体筛选培养基进行倒置培养，然后，对不同形态的单菌落进行分类和纯化，保藏；对纯化的菌株进行分子生物学鉴定、溶圈试验、酶活性测定，得到产淀粉酶的微生物。2.如权利要求1所述的从土壤中分离产淀粉酶的微生物的方法，其特征在于，取地表5～10cm深的土壤。3.如权利要求1所述的从土壤中分离产淀粉酶的微生物的方法，其特征在于，固体筛选培养基中各物质的浓度为：硫酸铵10～12g/L、氯化钠5～8g/L、磷酸氢二钠8～10g/L、可溶性淀粉10～20g/L，另外加入1.5％～2％琼脂粉。4.如权利要求1所述的从土壤中分离产淀粉酶的微生物的方法，其特征在于，富集培养基中各物质的浓度为：蛋白胨10～12g/L、氯化钠10～12g/L、酵母粉5～8g/L、可溶性淀粉10～12g/L。5.如权利要求1所述的从土壤中分离产淀粉酶的微生物的方法，其特征在于，液体淀粉培养基：蛋白胨1～3g/L、可溶性淀粉10～12g/L、酵母粉0.5～0.8g/L、氯化钠1～3g/L、磷酸氢二钾2～4g/L、硫酸镁0.1～0.3g/L、氯化钙0.1～0.3g/L、硫酸锰0.001～0.003g/L。6.如权利要求1所述的从土壤中分离产淀粉酶的微生物的方法，其特征在于，倒置培养的条件为：35～37℃下培养2～3天。7.如权利要求1所述的从土壤中分离...

【专利技术属性】
技术研发人员：高翠娟，刘晶晶，李军奇，李德龙，
申请(专利权)人：临沂大学，
类型：发明
国别省市：