一种治疗中风的中药制剂指纹图谱检测方法技术

本发明专利技术涉及提供一种治疗中风的中药制剂指纹图谱的检测方法，本发明专利技术采用HPLC方法建立了本方面中药制剂的指纹图谱，并确定了槲皮素、没食子酸、原儿茶酸、紫丁香苷、绿原酸、芍药苷、刺五加苷E、异嗪皮啶和毛蕊异黄酮葡萄糖苷等9种指标性成分，以有效控制本发明专利技术中药制剂的内在质量，进一步保障临床用药安全有效。进一步保障临床用药安全有效。

【技术实现步骤摘要】
一种治疗中风的中药制剂指纹图谱检测方法


本专利技术涉及属于中成药成分分析检测领域，尤其具体涉及一种治疗中风的中药制剂指纹图谱的检测方法。

技术介绍

本专利技术所述治疗中风的中药制剂为龙生蛭胶囊，该药为陕西步长制药有限公司独家生产的中药品种，由黄芪、水蛭、川芎、当归、红花、桃仁、赤芍、木香、石菖蒲、地龙、桑寄生和刺五加浸膏组成，其中水蛭和地龙为全粉入药，刺五加浸膏粉碎入药，其余药味经水煎煮浓缩后入药，本品具有补气活血，逐瘀通络的功效，临床用于动脉硬化性脑梗死恢复期中医辨证为气虚血瘀型中风中经络者，证见半身不遂，偏身麻木，口角歪斜，语言不利等，是陕西步长制药有限公司的独家专利产品，其批准文号为：国药准字：Z20010049，其主要功能主治为补气活血，逐瘀通络，用于治疗气虚血瘀型中风，该药目前执行的标准为2005年试行标准转正(标准号：WS3‑
375(Z
‑
040)
‑
2005(Z))。该药品标准的薄层鉴别质量控制指标有：在薄层鉴别(TLC)鉴别项目中，以水蛭、地龙对照药材、异嗪皮啶、芍药苷对照品进行定性成分鉴定。而且在含量检测方面，仅对黄芪甲苷单一成分进行含量控制。本申请人对该产品已经布局多件专利申请(02114551.2、200510041937.4、200510043066.X、201010213671.8、201210228789.7、201210228897.4、201210228896.X、201811257744.6、202010132575.4)，上述专利保护的技术主题主要围绕从中药处方、制备工艺方法、治疗糖尿病的临床新用途、含量检测方法等方面。但因该本专利技术中药处方的药味较多，倘若仅以黄芪甲苷一个定量指标进行定性检测，无法全面评价该药的内在质量。其也不符合中药复方治疗是多组分多靶点的辩证论治整体观。随着中药质量检测技术的进一步发展，中药指纹图谱是将图谱中的某些重要特征信息或整体信息用于中药材真伪鉴别或中药质量整体控制，是一种综合可量化的质量控制手段，具有整体性和模糊性，这与中医理论的整体性原则相对应，本文首次采用HPLC方法建立了龙生蛭胶囊的指纹图谱，以保证制剂质量稳定，临床用药安全有效。本申请人针对“本专利技术中药制剂含量测定方法”方面的技术文献检索梳理主要包括：高效液相色谱法，薄层扫描法，液相色谱串联质谱法等。如：王巧灵，雷亚贤，姚薇等。蒸发光散射检测
‑
高效液相色谱法测定龙生蛭胶囊中黄芪甲苷的含量[J].时珍国医国药，2007,18(7):1686
‑
1687.该文公开了，采用乙腈
‑
水(33:67)，流速1.0ml/min，漂移管温度105℃，气体流量2.8ml/min，建立了蒸发光散射检测
‑
高效液相色谱法测定龙生蛭胶囊中黄芪甲苷的含量。王晓宏，何念念,陈琳.薄层扫描法测定龙生蛭胶囊中黄芪甲苷的含量[J].基层中药杂志，2002,16(5):19
‑
20，该文以三氯甲烷
‑
甲醇
‑
水(65:35:10)为展开剂，在硅胶G薄层板上分离黄芪甲苷，以10％硫酸乙醇为显色剂，采用双波长反射扫描测定其含量，最大吸收波长λs530nm，参比波长λ
R
690nm，用薄层扫描法测定龙生蛭胶囊中黄芪甲苷的含量。魏紫奕,徐文娟,刘洁,等.基于HPLC
‑
QQQ/MS的龙生蛭胶囊中19种代表性成分含量一致性分析[J].中国中药杂志，2019，44(5):948
‑
953.该论文采用乙腈和0.1％甲酸水溶液梯度洗
脱，三重四级杆电喷雾离子源做为检测器，多反应检测，正负离子扫描，同时测定龙生蛭胶囊中19种代表性成分含量。杨洁,贾志鑫,刘洁,等.HPLC
‑
MS/MS测定龙生蛭胶囊在大鼠血浆中7个活性成分的含量及其药代动力学研究[J].药物分析杂志,2021,41(7):1176
‑
1188.该论文采用乙腈
‑
水(含0.1％甲酸)梯度洗脱，流速0.5mL
·
min
‑1，采用电喷雾离子源，分别选择正或负离子模式进行多反应监检测扫描(MRM)，分析时间正离子模式下6min，负离子模式下3min，完成龙生蛭胶囊在大鼠血浆中7个活性成分的含量测定及其药代动力学研究。以上多数文献研究的质量标准技术主要集中在对黄芪甲苷单一指标成分的含量测定方法上，虽然有多指标成分的含量测定，但是其是基于三重四级杆测定，在质量标准中相对较少，由于本专利技术的中药制剂是由黄芪、水蛭、川芎、当归、红花、桃仁、赤芍、木香、石菖蒲、地龙、桑寄生和刺五加浸膏等多种中药材经过加工、提取、干燥、粉碎、混合等加工步骤制备而成，其药物的活性成分是多种药材的复合成分的中药制剂。而本项目采用中药指纹图谱检测技术手段，它是建立在对中药制剂的众多有效成分研究基础上，该方法主要用于评价中药制剂质量的真实性、有良性和稳定性，为了更全面地评价本专利技术药物的内在质量。

技术实现思路

本专利技术的目的是提供一种治疗中风中药制剂指纹图谱的检测方法，本专利技术采用HPLC方法建立了本方面中药制剂的指纹图谱，并确定了槲皮素、没食子酸、原儿茶酸、紫丁香苷、绿原酸、芍药苷、刺五加苷E、异嗪皮啶和毛蕊异黄酮葡萄糖苷等9种指标性成分，以有效控制本专利技术中药制剂的内在质量，进一步保障临床用药安全有效。本专利技术所建立的HPLC指纹图谱方法可有效评价本专利技术中药制剂的质量。本专利技术中药制剂不局限于本次研究对象所特指的龙生蛭胶囊药品，还包括含有以水蛭、地龙、黄芪、川芎、当归、红花、桃仁、赤芍、木香、石菖蒲、桑寄生等主要中药材制备而成的具有治疗心脑血管、脑梗、脑中风等功能相近的中药复方制剂。本专利技术所提供的技术方案如下：一种治疗中风的中药制剂指纹图谱检测方法，所述检测方法包括如下步骤：(1)、供试品溶液的制备：取本专利技术中药制剂，称定，加入10％～70％甲醇，超声处理20～40分钟，放冷，用10％～70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得；(2)、混合对照品溶液的制备：分别称取槲皮素、没食子酸、原儿茶酸、紫丁香苷、绿原酸、芍药苷、刺五加苷E、异嗪皮啶和毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品，加甲醇溶解稀释制成混合对照品溶液；(3)、色谱条件：色谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂，以0.05～0.15％磷酸溶液为流动相B，乙腈为流动相A，梯度洗脱比例为：0～6min，3
→
5A％；6～7min，5
→
7A％；7～13min，7
→
8A％；13～26min，8
→
9A％；26～36min，9
→
14A％；36～56min，14
→
14.5A％；56～57min，14.5
→
40A％；检测波长为210～310nm；柱温为20～40℃；流速为每分钟0.8ml～1.2ml；(4)、色谱峰测定：将上述步骤(1)和(2)所制得供试品溶液、混合对照品溶液，注入液相本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种治疗中风的中药制剂指纹图谱检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下步骤：(1)、供试品溶液的制备：取本发明中药制剂，称定，加入10％～70％甲醇，超声处理20～40分钟，放冷，用10％～70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得；(2)、混合对照品溶液的制备：分别称取槲皮素、没食子酸、原儿茶酸、紫丁香苷、绿原酸、芍药苷、刺五加苷E、异嗪皮啶和毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品，加甲醇溶解稀释制成混合对照品溶液；(3)、色谱条件：色谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂，以0.05～0.15％磷酸溶液为流动相B，乙腈为流动相A，梯度洗脱比例为：0～6min，3
→
5A％；6～7min，5
→
7A％；7～13min，7
→
8A％；13～26min，8
→
9A％；26～36min，9
→
14A％；36～56min，14
→
14.5A％；56～57min，14.5
→
40A％；检测波长为210～310nm；柱温为20～40℃；流速为每分钟0.8ml～1.2ml；(4)、色谱峰测定：将上述步骤(1)和(2)所制得供试品溶液、混合对照品溶液，注入液相色谱仪，按照上述步骤(3)的色谱条件，测定记录色谱图，即得。2.如权利要求1所述指纹图谱检测方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈衍斌，张鑫，刘峰，王晓梅，党艳妮，张建，许刚，张笑笑，
申请(专利权)人：陕西步长制药有限公司，
类型：发明
国别省市：