一株屎肠球菌LD-NXY01及其在海马养殖中的应用制造技术

本发明专利技术涉及微生物领域，具体公开了一株屎肠球菌LD

【技术实现步骤摘要】
一株屎肠球菌LD
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NXY01及其在海马养殖中的应用


[0001]本专利技术涉及一株屎肠球菌及其应用，具体涉及一株从海马肠道中分离得到的屎肠球菌LD
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NXY01及其在海马养殖中的应用，属于微生物


技术介绍

[0002]海马与其他硬骨鱼类相比，在生殖方式、生活习性、器官的组织结构和功能等方面都存在巨大差异，例如：“雄性卵胎生”并且具有长期稳定的“一雌一雄”繁殖单元；游泳能力弱，运动范围小，种群密度低；体表被覆坚硬骨片，头部与躯体呈直角，直立游泳；消化系统缺少胃，肠道短且盘曲少；缺少胸腺和脾脏等鱼类中的中枢免疫器官以及肠道相关淋巴组织（GALT），因此其免疫系统被认为存在一定缺陷。
[0003]在工厂化养殖中，疾病是制约海马人工繁育快速发展的主要原因之一。在众多疾病中，细菌性疾病的占比最高且危害最为严重，尤其是细菌感染诱发的肠炎具有范围广、危害强、季节性、区域性和复杂性的特点，严重影响海马养殖的效益。目前，已经发现了近20种海马的细菌病原，绝大部分能够诱发海马细菌性肠炎的发生。近期，我们从患细菌性肠炎的海马的肠道中分离出一种新的肠炎致病菌——迟钝爱德华氏菌YT1（Edwardsiella tarda YT1）。被该迟钝爱德华氏菌YT1感染后，海马会出现游泳能力减弱，摄食量下降，肛门发白、突出，肠道积液变多，肠壁充血，腹部肿胀等现象，导致海马大量死亡。通过肠道微生物测序分析发现，海马被迟钝爱德华氏菌YT1感染后，迟钝爱德华氏菌YT1在海马肠道中的丰度显著升高，而其它肠道固有的益生菌属的丰度则显著降低，进而诱发肠道菌群和功能的严重失衡，导致细菌性肠炎发生。因此，探究如何调控和维持海马肠道微生物的健康和平衡，抑制病原菌生长，对于提升海马工厂化养殖的效益具有重要意义。
[0004]益生菌能通过重塑肠道微生物平衡，提高养殖动物的生长速率和免疫力。作为肠道固有菌群的典型代表之一，屎肠球菌的益生作用已在多种动物中被证实。研究发现，屎肠球菌（HDRsEf1）在人体肠道中可上调 TLR1、TLR2 和 TLR6的mRNA 水平，尤其是 TLR2，屎肠球菌（HDRsEf1）可以独立于MyD88的模式激活TLR2 通路，并显著下调 TLR4、TLR5、TLR7和TLR8的mRNA水平，可以调节人类肠细胞样 HT
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29 细胞的炎症反应。在仔猪养殖中，饲粮添加屎肠球菌B13能提高仔猪生产性能、粗蛋白及钙的消化率，增强仔猪免疫力的同时，还能维持仔猪消化道菌群稳态，遏制致病微生物的生长。随着水产养殖的快速发展，有学者发现鱼类饲料中添加屎肠球菌能显著提高养殖鱼的各项生长指标，例如：鲤鱼饲料中添加不同浓度的屎肠球菌可使鲤鱼血清中超氧化物歧化酶（SOD）活力显著上升，溶菌酶（LZM）、碱性磷酸酶（AKP）和过氧化物酶（POD）的活力呈上升趋势，免疫球蛋白M（IgM）的质量浓度也呈上升趋势。因此，屎肠球菌在水产养殖中具有很好的应用前景。
[0005]在水产养殖行业中，益生菌通常被用做饲料添加剂，但饲料在高温制粒时，高温可能会造成益生菌的失活，从而影响益生菌的使用效果。目前，海马养殖主要以活体动物和冰冻糠虾为饵料，尚无可用商品化饲料。因此，将活化的益生菌剂直接投于养殖水体中，是最直接、简便且有效的方法，益生菌剂在改善水质的同时，通过海马摄食进入海马肠道，逐渐
对海马产生益生作用。
[0006]目前，益生菌在海马养殖中的应用还处于初步阶段。近期，商品化乳酸菌冻干粉首次成功在海马养殖中用于预防和治疗弧菌引起的海马肠炎；另有研究表明，添加复合益生菌能够提高幼年海马的存活率、生长率以及肠道乳酸菌的丰度。综上，目前海马中益生菌的应用报道十分有限，多是经验性使用已有水产用益生菌剂，缺乏针对由迟钝爱德华氏菌YT1诱发的海马肠炎使用益生菌的相关研究和报道；此外，复合益生菌的使用无法探究具体益生菌作用的明确机制，不利于用法、用量的优化，以及具有复合抗菌效果益生菌剂的开发。
[0007]本专利技术率先从海马自身肠道中筛选、纯化得到益生菌菌株，针对迟钝爱德华氏菌YT1，通过在海马体外和体内进行验证，明确分离得到的益生菌菌株对病原的抗性，并系统研究其对海马生长、发育、肠道消化酶和菌群的影响。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的在于：提供一株海马肠道益生菌——屎肠球菌LD
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NXY01及其应用，该屎肠球菌LD
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NXY01既可以预防和治疗海马由迟钝爱德华氏菌YT1诱发的肠炎，又可以促进海马生长和发育，其应用包括：在制备预防和治疗海马由迟钝爱德华氏菌YT1诱发的肠炎的菌剂中的应用，以及在制备促进海马生长和发育的菌剂中的应用。
[0009]为了实现上述目标，本专利技术采用如下的技术方案：一株屎肠球菌LD
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NXY01，其特征在于，所述屎肠球菌LD
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NXY01分离自未患肠炎的海马的肠道，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：中国北京，保藏日期为：2021年12月06日，保藏编号为：CGMCC No. 24041，分类命名为屎肠球菌 Enterococcus faecium。
[0010]前述的屎肠球菌LD
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NXY01的应用，其特征在于，所述应用包括：在制备预防和治疗海马由迟钝爱德华氏菌YT1诱发的肠炎的菌剂中的应用，以及在制备促进海马生长和发育的菌剂中的应用。
[0011]前述的应用，其特征在于，所述菌剂的制备方法如下：在无菌环境中将冻存的屎肠球菌LD
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NXY01菌液融化，然后接种于MRS液体培养基中，在37℃、150rpm摇床中培养13h，之后将菌液离心，除去上清，用灭菌海水冲起沉淀并将菌液浓度调至10
11 cfu/ml。
[0012]前述的应用，其特征在于，每1L养殖水中添加0.1ml所述浓度为10
11 cfu/ml的屎肠球菌LD
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NXY01菌液，养殖水中屎肠球菌LD
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NXY01的终浓度为10
7 cfu/ml。
[0013]前述的应用，其特征在于，每4天向养殖水中添加一次所述浓度为10
11 cfu/ml的屎肠球菌LD
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NXY01菌液。
[0014]本专利技术的有益之处在于：（1）本专利技术分离得到的屎肠球菌LD
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NXY01，通过体外抑菌实验和体内病原胁迫实验可知，对迟钝爱德华氏菌YT1具有抗性，所以可以预防和治疗海马由迟钝爱德华氏菌YT1诱发的肠炎；（2）本专利技术分离得到的屎肠球菌LD
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NXY01，通过迟钝爱德华氏菌YT1病原胁迫实验和屎肠球菌不同投喂策略益生菌饲养实验可知，可以调节海马肠道内菌群平衡和提高肠道内消化酶活性，所以可以促进海马生长和发育；（3）本专利技术针对海马自身的特点和养殖业的特点，为海马工厂化健康养殖提供了
min，冷却至 50℃左右后倒平板，待平板冷却后封口4℃本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株屎肠球菌LD
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NXY01，其特征在于，所述屎肠球菌LD
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NXY01分离自未患肠炎的海马的肠道，分类命名为屎肠球菌Enterococcus faecium，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为中国北京，保藏日期为2021年12月06日，保藏编号为CGMCC No. 24041。2.权利要求1所述的屎肠球菌LD
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NXY01的应用，其特征在于，所述应用包括：在制备预防和治疗海马由迟钝爱德华氏菌YT1诱发的肠炎的菌剂中的应用，以及在制备促进海马生长和发育的菌剂中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述菌剂的制备方法如下：在无菌环境中将冻存的屎肠球菌LD<...

【专利技术属性】
技术研发人员：王凯，田雅楠，侯玉平，张乐乐，薛圆圆，吕春晖，张旭，高龙坤，马振豪，姜广峻，郑诗怡，贾龙武，闫瀚升，俞兰良，秦耿，刘雅莉，林强，
申请(专利权)人：鲁东大学，
类型：发明
国别省市：