一种粗皂苷活性成分的系统制备方法技术方案

本发明专利技术公开了一种粗皂苷活性成分的系统制备方法，包括首先利用乙醇水溶液热回流提取油茶饼粕或皂荚果皮中活性成分，过滤，减压浓缩得活性成分粗提物；对乙醇提取物采用蒸馏水溶解，加入石油醚萃取油脂，过滤，减压回收试剂；接着加入乙酸乙酯萃取黄酮苷粗提物，过滤，减压回收试剂；然后在水相中加入正丁醇萃取皂苷粗提物，过滤，减压回收试剂；剩余水相过滤，减压浓缩得多糖粗提物；回收试剂用于高速逆流色谱两相溶剂体系的配置，对粗提物分别使用高速逆流色谱进行分离纯化，得到精制的多糖、黄酮苷和皂苷活性成分。本发明专利技术对具有潜在应用价值的活性成分进行了高纯度富集，为相关组分的高附加值利用提供了物质基础。高附加值利用提供了物质基础。高附加值利用提供了物质基础。

【技术实现步骤摘要】
一种粗皂苷活性成分的系统制备方法


[0001]本专利技术属于植物天然产物活性成分制备领域，具体涉及一种从皂荚果皮或油茶饼粕中活性成分的系统制备方法。

技术介绍

[0002]皂荚属于生态经济型树种，我国皂荚分布面积广，皂荚种植面积超过100万亩。油茶(Camellia oleifera Abel)为山茶科(Theaceae)山茶属(Camellia)多年生木本植物(中国植物志，第49(3)卷)，分为普通油茶、红花油茶，小果油茶等。脱壳油茶籽仁中含油40％～60％，油脂中富含油酸等单不饱和脂肪酸(80％)，长期食用可以降低血脂，预防心血管疾病。但是工业榨油后的废弃物油茶饼粕中仍然残留油脂，同时其中还含有皂苷、黄酮苷、茶多糖等多种生物活性物质。皂苷作为非离子表面活性剂，具有乳化和分散等优越性能；同时具有消炎、抑菌、抗肿瘤、溶血性等生物活性，在农业、化妆品、水产养殖、生物医药等领域被广泛应用。现代研究表明，黄酮类化合物具有抗氧化、抗病毒、免疫调节等多种生理功能作用，可应用于食品、药品和化妆品产品中。油茶饼粕含有一定量的水溶性多糖，具有保健作用和药用价值。然而，目前油茶饼粕一般用于动物饲料，清塘剂、燃料等，甚至废弃，造成资源的极大浪费。因此，使油茶饼粕变废为宝、形成商业链条成为亟待解决的问题。
[0003]近年来，高速逆流色谱(HSCCC)技术在植物功能成分分离方面取得了进展。HSCCC是一种无需固体载体作为固定相的技术，基于液液色谱分配技术。与传统分离方法相比，避免了固体载体的不可逆吸附，工艺复杂，成本高，耗时长等缺点。为了获得高成功率的分离模型，有时也需要优化主要工艺参数。目前双相萃取结合高速逆流色谱系统分离纯化油茶饼粕中活性成分的研究还尚未见报道。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于设计提供一种系统制备粗皂苷活性成分的方法，该方案具有重现性好、分离度高、操作简等优点。
[0005]所述的一种粗皂苷活性成分的系统制备方法，其特征在于包括以下工艺步骤：1)乙醇提取物的制备：将皂荚果皮或工业脱油脂的废弃物
─
油茶饼粕进行粉碎并过筛20目，50℃真空干燥，取烘干的粉末溶解于乙醇水溶液，80℃下热回流提取3次，过滤，合并滤液，减压浓缩至无乙醇程度，50℃条件下真空干燥24h得粗皂苷乙醇提取物；2)油脂的制备：取步骤1)得到粗皂苷乙醇提取物粉末溶解于蒸馏水中，接着加入石油醚，剧烈搅拌15min，待静置分层，萃取3次，合并石油醚层过滤，减压回收试剂，干燥得油脂；3)活性成分粗提物的制备：取步骤2)粗皂苷乙醇提取物水相，接着加入乙酸乙酯，剧烈搅拌15min，待静置分层，萃取3次，合并乙酸乙酯层过滤，减压回收试剂，干燥得黄酮苷粗提物；然后在水相中加入正丁醇，剧烈搅拌15min，待静置分层，萃取3次，合并正丁醇层，减压回收试剂，干燥得皂苷粗提物；最后将水相过滤减压浓缩，干燥得多糖粗提物；4)活性成分精制物的制备：两相溶剂体系的配置，将乙酸乙酯、正丁醇、酸水
(0.8％乙酸)按一定体积比混合，剧烈振荡15min，静置过夜，待溶液分层，上相作为流动相，下相作为固定相；样品制备，取步骤3中的活性成分粗提物溶解于20mL的流动相中，超声20min溶解，过0.45μm膜，得到样品溶液；分离纯化，将固定相以流速15mL/min的流速充满整个仪器，洗脱方向是从首向尾，开启主机转速达到600～900rpm，以固定的流速泵入流动相，待管道出口处流出液体为双相并且工作站基线平衡，注射进样，根据ELSD色谱图检测不同分离部分，收集色谱峰对应的液体，分离完毕后使用氮气吹出仪器保留液体，50℃减压浓缩除去溶剂，50℃真空干燥得活性成分精制物，其中第一色谱峰是第一部分为多糖，第二和第三色谱峰是第二部分为黄酮苷，氮气推出液体是第三部分为皂苷。
[0006]所述的一种粗皂苷活性成分的系统制备方法，其特征在于所述步骤1)中乙醇溶液浓度为50～90％，温度70～80℃，料液比1:10～20。
[0007]所述的一种粗皂苷活性成分的系统制备方法，其特征在于所述步骤2)中乙醇提取物与蒸馏水的质量比为1:10～20，水相与石油醚相的体积比为1:1～2。
[0008]所述的一种粗皂苷活性成分的系统制备方法，其特征在于所述步骤3)中水相与乙酸乙酯相和正丁醇相的体积比为1:1～2。
[0009]所述的一种粗皂苷活性成分的系统制备方法，其特征在于所述步骤4)中两相溶剂为乙酸乙酯、正丁醇和酸水(0.8％乙酸)的混合溶液，体积比为3～7:7～3:10。
[0010]所述的一种粗皂苷活性成分的系统制备方法，其特征在于所述步骤4)中溶解样品质量为50mg～500mg。
[0011]所述的一种粗皂苷活性成分的系统制备方法，其特征在于所述步骤4)中主机转速为600～900rpm时，流动相以流速1.8～2.4mL/min泵入仪器分离柱。
[0012]所述的一种粗皂苷活性成分的系统制备方法，其特征在于所述步骤4)中检测器为蒸发光散射检测器，具体条件为：撞击器开，雾化蒸发温度为80～100℃，氮气流速1.8～2.4mL/min。
[0013]本专利技术的有益效果：本专利技术不仅对油茶中主要活性成分
─
油脂进行了二次富集，而且首次采用双相梯度萃取结合高速逆流色谱对粗皂苷中具有潜在应用价值的主要活性成分(多糖、皂苷和黄酮苷)进行了高纯度富集，为后续油茶饼粕的高附加值利用提供物质基础。具体优点表现在。
[0014]1.本专利技术对脱油脂废弃物
─
油茶饼粕中的主要活性成分进行系统制备，最大化其经济价值。
[0015]2.本专利技术优化了高速逆流色谱的分离条件及ELSD检测条件，操作简单，重现性高。
[0016]3.本专利技术对原料的预处理及高速逆流色谱分离纯化采用的均是双相体系，且有机相均是乙酸乙酯、正丁醇或两者混合物，回收后可以循环利用，节约成本，保护环境。
[0017]4.本专利技术优化的高速逆流色谱可以一步直接分离得到黄酮苷单体成分，纯度达90％以上，为黄酮苷的结构分析和应用提供理论基础。
[0018]5.本专利技术优化的高速逆流色谱也可以一步实现粗皂苷中主要活性成分(多糖、黄酮苷和皂苷)的同时分离,为粗皂苷的活性成分提供快速检测和制备手段。
[0019]6.本专利技术与传统方法相比，避免了极性较大的活性成分(多糖、黄酮苷和皂苷)在固体固定相上的死吸附，理论回收率可达100％。
附图说明
[0020]图1为实施例组合的工艺流程图。
[0021]图2为实施例组合的HSCCC色谱分离图。
具体实施方式
[0022]下面结合如下实施例，进一步阐述专利技术。应该理解，这些实施例仅用于阐述本专利技术。而不是用于限制本专利技术的范围。
[0023]实施例11)乙醇提取物的制备：将工业脱油脂的废弃物
─
油茶饼粕进行粉碎并过筛20目，50℃真空干燥，取烘干的粉末100g溶解于1L的80％乙醇，80℃下热回流提取3次，每次时间3h本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种粗皂苷中活性成分的系统制备方法，其特征在于包括以下工艺步骤：1)乙醇提取物的制备：将皂荚果皮或工业脱油脂的废弃物
─
油茶饼粕进行粉碎并过筛20目，50℃真空干燥，取烘干的粉末溶解于乙醇水溶液，80℃下热回流提取3次，过滤，合并滤液，减压浓缩至无乙醇程度，50℃条件下真空干燥24h得粗皂苷乙醇提取物；2)油脂分离：取步骤1)得到粗皂苷乙醇提取物粉末溶解于蒸馏水中，接着加入石油醚，剧烈搅拌15min，待静置分层，萃取3次，合并石油醚层过滤，减压回收试剂，干燥得油脂；3)活性成分粗提物的制备：取步骤2)粗皂苷乙醇提取物水相，加入乙酸乙酯，剧烈搅拌15min，待静置分层，萃取3次，合并乙酸乙酯层过滤，减压回收试剂，干燥得黄酮苷粗提物；然后在水相中加入正丁醇，剧烈搅拌15min，待静置分层，萃取3次，合并正丁醇层，减压回收试剂，干燥得皂苷粗提物；最后将水相过滤减压浓缩，干燥得茶多糖粗提物；4)活性成分精制物的制备：两相溶剂体系的配置，将乙酸乙酯、正丁醇、酸水(0.8％乙酸)按一定体积比混合，剧烈振荡15min，静置过夜，待溶液分层，上相作为固定相，下相作为流动相；样品制备，取步骤3)中的活性成分粗提物溶解于20mL的流动相中，超声20min溶解，过0.45μm膜，得到样品溶液；分离纯化，将固定相以流速15～20mL/min的流速充满整个仪器，洗脱方向是从首向尾，开启...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋建新，李维新，陈殿松，庞天鸿，吉骊，
申请(专利权)人：广州德谷个人护理用品有限公司，
类型：发明
国别省市：