一种副地衣芽孢杆菌nmxc2-1及其发酵产物、菌剂与应用制造技术

本发明专利技术涉及微生物技术领域，具体涉及一种副地衣芽孢杆菌nmxc2

【技术实现步骤摘要】
一种副地衣芽孢杆菌nmxc2
‑
1及其发酵产物、菌剂与应用


[0001]本专利技术涉及微生物
，具体涉及一种副地衣芽孢杆菌nmxc2
‑
1及其发酵产物、菌剂与应用。

技术介绍

[0002]根结线虫(Meloidogyne spp.)是当前农业生产中为害十分严重的专性内寄生线虫。据文献记载，根结线虫能够侵染5500多种植物，包括谷物，豆类，蔬菜和各种树木、水果、香料作物等，造成很大的经济损失。根结线虫二龄幼虫从卵内孵化后经由根尖侵染植物，并在侵染中后期通过在根内形成的固定性取食位点(巨大细胞)获取营养来维持自身的生长及繁殖。巨大细胞的形成破坏了根组织的正常生理功能，扰乱了水分及营养物质向植物地上部分的传导，从而造成植物地上部分营养不良、生长缓慢、抗逆能力和产量下降。目前生产上多采取施用化学农药的方法来防治根结线虫，虽然化学防治使用方便、见效快，但由于线虫体壁结构的特殊性，许多杀线剂往往是高毒的，不仅容易造成环境及水体污染且对人体健康存在安全隐患，因此许多剧毒高毒杀线虫剂因为环境安全问题陆续被禁用或限用。而生物防治作为一种对环境友好且有效的方法越来越受到重视。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的是为了解决现有生产中应用化学防治存在的高污染，高成本的问题，提供一种副地衣芽孢杆菌及其应用。
[0004]为了实现本专利技术的目的，本专利技术的技术方案如下：
[0005]本专利技术提供副地衣芽孢杆菌(Bacillus paralicheniformis)nmxc2
‑
1，其保藏编号为CGMCC No.24270。
[0006]进一步地，本专利技术还提供副地衣芽孢杆菌(Bacillus paralicheniformis)nmxc2
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1的发酵产物。含有副地衣芽孢杆菌(Bacillus paralicheniformis)nmxc2
‑
1和/或其发酵产物的菌剂。
[0007]本专利技术所述的菌剂可以为液体菌剂或固体菌剂，可采用常规技术手段、加入微生物制剂领域允许的辅料制备得到。
[0008]本专利技术还提供一种根结线虫杀虫剂、植物生长促进剂和根结线虫熏蒸剂，其含有副地衣芽孢杆菌(Bacillus paralicheniformis)nmxc2
‑
1和/或其发酵产物。
[0009]本专利技术另提供一种副地衣芽孢杆菌(Bacillus paralicheniformis)nmxc2
‑
1，或其发酵产物，或上述菌剂在促进植物生长或防治根结线虫中的应用。
[0010]优选，所述植物为黄瓜。
[0011]所述应用的方式为：将副地衣芽孢杆菌(Bacillus paralicheniformis)nmxc2
‑
1发酵液施用到土壤中或熏蒸到空气中。
[0012]本专利技术的有益效果在于：
[0013]本专利技术副地衣芽孢杆菌是从植物中分离得到的，来源于自然，并容易在土壤中迅
速繁殖并定殖，对根结线虫兼具直接触杀及熏蒸触杀的双重效果，且防治效果稳定。同时，该菌株还有促进植物生长的效果，对无公害蔬菜的生产有重要的应用价值。
具体实施方式
[0014]下面将结合实施例对本专利技术的优选实施方式进行详细说明。需要理解的是以下实施例的给出仅是为了起到说明的目的，并不是用于对本专利技术的范围进行限制。本领域的技术人员在不背离本专利技术的宗旨和精神的情况下，可以对本专利技术进行各种修改和替换。
[0015]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0016]实施例1菌株nmxc2
‑
1的分离、纯化及鉴定
[0017]一、菌株nmxc2
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1的分离、纯化
[0018]菌株nmxc2
‑
1是从香料植物柠檬香草叶片中分离得到的，具体分离步骤为：称取1g柠檬香草植物叶片，经1％次氯酸钠消毒5min，无菌水漂洗五遍后置于无菌研钵中充分研磨后加入含有100ml无菌水中混匀，依次进行梯度稀释，取100μL稀释104的稀释液于LB培养基上用涂布棒均匀涂布，进行生防细菌的分离。每个稀释梯度设置3个重复。用封口膜封口后将平板倒置于30℃培养箱中培养。培养2
‑
3d后观察细菌的生长情况，挑取单菌落于LB培养基上进行纯化。将挑取的单菌落命名为nmxc2
‑
1。
[0019]二、菌株nmxc2
‑
1的鉴定
[0020]采用平板划线法观察菌株nmxc2
‑
1的形态特征，并对其进行革兰氏染色。参考《伯杰氏细菌鉴定手册》等对其进行初步鉴定。最后提取生防细菌的总DNA，利用16S rRNA鉴定引物27F/1492R及gyrA基因鉴定引物p
‑
gyrA
‑
f/p
‑
gyrA
‑
r进行基因片段扩增。纯化回收后送公司进行测序，序列返回后利用BLAST的方法进行序列一致性比较，确定细菌种类。
[0021](1)形态观察：通过观察nmxc2
‑
1菌落形状，边缘，培养基颜色变化等，记录其生长特征。
[0022]结果：nmxc2
‑
1菌落颜色为白色，菌落形状不规则，边缘为锯齿状，培养基颜色未见明显变化。经革兰氏染色显示为紫色，为革兰氏阳性菌。
[0023](2)生理生化鉴定：通过淀粉水解，明胶液化，柠檬酸盐，菌膜形成，伏普试验，甲基红试验，耐盐性试验等重要特征进行鉴定。结果见表1。
[0024]表1
[0025][0026][0027]注：“+”表示阳性。
[0028](3)分子鉴定：利用康为世纪公司的细菌DNA提取试剂盒提取nmxc2
‑
1菌株的总DNA。采用16SrDNA细菌通用引物27F/1492R(27F：5
′‑
AGAGTTTGATCCTGGCTCAG
‑3′
,SEQ ID No.1；1492R：5
′‑
GGTTACCTTGTTACGACTT
‑3′
，SEQ ID No.2)及gyrA基因鉴定引物p
‑
gyrA
‑
f/p
‑
gyrA
‑
r(p
‑
gyrA
‑
f：CAGTCAGGAAATGCGTACGTCCTT，SEQ ID No.3；p
‑
gyrA
‑
r：CAAGGTAATGCTCCAGGCATTGCT，SEQ ID No.4)分别进行PCR扩增。PCR反应体系(25μL)：10X Buffer 2.5μL，dNTP 2μL，引物F/R各1μL，rTaq0.5μL，ddH2O 1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.副地衣芽孢杆菌(Bacillus paralicheniformis)nmxc2
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1，其特征在于，保藏编号为CGMCC No.24270。2.权利要求1所述的副地衣芽孢杆菌(Bacillus paralicheniformis)nmxc2
‑
1的发酵产物。3.一种菌剂，其特征在于，含有权利要求1所述的副地衣芽孢杆菌(Bacillus paralicheniformis)nmxc2
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1和/或权利要求2所述的发酵产物。4.一种根结线虫杀虫剂，其特征在于，含有权利要求1所述的副地衣芽孢杆菌(Bacillus paralicheniformis)nmxc2
‑
1和/或权利要求2所述的发酵产物。5.一种植物生长促进剂，其特征在于，含有权利要求1所述的副地衣芽孢杆菌(Bacillus paralicheniformis)nmxc2
‑
1和/或权利要求2所述的发酵产物。6...

【专利技术属性】
技术研发人员：史倩倩，赵洪海，宋雯雯，段方猛，梁晨，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：