含有包含扩增和富集的超活化细胞因子杀伤T细胞群体的细胞产物的组合物及其制备方法技术

本公开描述了一种药物组合物，其包含药学上可接受的载体和含扩增和富集的超活化细胞因子杀伤T细胞群体的细胞产物；以及制造所述细胞产物的方法。细胞产物的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】含有包含扩增和富集的超活化细胞因子杀伤T细胞群体的细胞产物的组合物及其制备方法
[0001]相关申请
[0002]本申请要求2018年11月13日提交的美国临时申请号62/760,077的权益和优先权，所述临时申请的内容明确地以引用的方式整体并入本文。

技术介绍

[0003]淋巴细胞是一种参与免疫系统调节的白细胞。淋巴细胞在淋巴系统中更为常见，包括B细胞、T细胞、杀伤T细胞和自然杀伤(NK)细胞。有两大类淋巴细胞，即T细胞和B细胞。T细胞负责细胞介导的免疫，而B细胞负责体液免疫(与抗体有关)T细胞之所以如此命名，是因为这些淋巴细胞在胸腺中成熟，而B细胞在骨髓中成熟。B细胞产生与病原体结合以使其被破坏的抗体。CD4+(辅助)T细胞协调免疫反应。CD8+(细胞毒性)T细胞和自然杀伤(NK)细胞能够杀伤例如被病毒感染或展示出抗原序列的人体细胞。
[0004]对入侵病原体的免疫反应需要先天免疫的成功活化，从而通知后续适应性免疫反应的发展。
[0005]自然杀伤T细胞(NKT)是特化T细胞的异质亚类(Brennan等人，Nat Rev Immunol.2013年2月；13(2):101
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17)。这些细胞表现出对抗原暴露快速反应的先天细胞样特征，并与适应性细胞的抗原识别精度和多种效应子反应相结合(Salio等人，Annu Rev Immunol.2014；32():323
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66)。与传统T细胞一样，NKT细胞经历胸腺发育和选择并具有T细胞受体(TCR)来识别抗原(Berzins等人，Immunol Cell Biol.2004年6月；82(3):269
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75)。
[0006]TCR基因的多样性是通过胸腺T细胞发育期间V和J基因区段的重排而产生的。(Makino,Y.等人(1993)J.Exptl Med.177:1399
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1408)。TCR V和J基因区段与Ig基因一样，具有重组信号，其中由12/23bp间隔区隔开的七聚体和九聚体序列两侧为种系V和J基因区段。同前。
[0007]自然杀伤T细胞(NKT)代表T淋巴细胞的小群体，该小群体由αβT细胞受体(TCR)和NK细胞的一些谱系标志物的表达所定义。然而，与传统T细胞不同，NKT细胞表达的TCR识别由保守的非多态性MHC 1类分子CD1d呈递的脂质抗原(Godfrey等人，Nat Immunol.2015年11月；16(11):1114
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23)。除TCR外，NKT细胞还具有与先天细胞诸如NK和先天淋巴样细胞相似的细胞因子(诸如IL
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12、IL
‑
18、IL
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25和IL
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23)的受体(Cohen等人，Nat Immunol.2013年1月；14(1):90
‑
9)。即使在不存在TCR信号的情况下，这些炎性细胞因子的稳态表达也可以激活这些细胞因子受体。因此，NKT细胞可以合并来自TCR介导的刺激和炎性细胞因子两者的信号，以表现出一系列细胞因子的及时释放(Kohlgruber等人，Immunogenetics.2016年8月；68(8):649
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63)。这些细胞因子又可以调节肿瘤微环境(TME)中存在的不同免疫细胞，从而影响宿主对癌症的免疫反应。
[0008]如表1所示，有许多亚型的NKT细胞，所述亚型可以通过其T细胞受体(TCR)的用法、细胞因子的产生、特定表面分子的表达和反应性来确定。
[0009]表1
[0010][0011][0012]I型NKT细胞
[0013]广义地讲，CD1d限制的NKT细胞可根据其TCR多样性和抗原特异性分为两个主要的亚类。NKT细胞最广泛表征的亚型是I型或恒定自然杀伤T细胞(iNKT细胞)(Matsuda等人，Curr Opin Immunol,20:358
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68,2008)。I型(恒定)NKT细胞(iNKT细胞)因其有限的TCR库而如此命名，表达的半恒定TCR(iTCR)α链(小鼠中的Vα14
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Jα18，人类中的Vα24
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Jα18)与异质Vβ链库(小鼠中的Vβ2,7或8.2及人类中的Vβ11)配对(Brennan等人，Nat Rev Immunol.2013年2月；13(2):101
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17；Salio等人，Annu Rev Immunol.2014；32():323
‑
66)。I型NKT细胞的原型抗原是半乳糖神经酰胺(α
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GalCer或KRN 7000)，其是从海上海绵中作为抗肿瘤筛选的一部分分离出来的(Kawano等人，Science.1997年11月28日；278(5343):1626
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9)α
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GalCer是I型NKT细胞的有效活化剂，诱导它们释放大量干扰素
‑
γ(IFN
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γ)，干扰素
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γ有助于活化CD8+ T细胞和抗原呈递细胞(APC)(Kronenberg,Nat Rev Immunol.2002年8月；2(8):557
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68)。用于研究I型NKT细胞的主要技术包括使用载有CD1d的α
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GalCer四聚体对I型NKT细胞进行染色和鉴定，施用α
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GalCer以活化和研究I型NKT细胞的功能，以及最后使用CD1d缺陷型小鼠(缺乏I型和II型NKT两者)或Jα18缺陷型小鼠(仅缺乏I型NKT)(Berzins等人，Immunol Cell Biol.2004年6月；82(3):269
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75)。已经报道，Jα18缺陷型小鼠除了在Traj18基因区段中具有缺失(对于I型NKT细胞发育是必需的)外，还表现出因转基因对Traj18上游几个Jα区段重排的影响而引起总体TCR较低，从而使得从Jα18缺陷型小鼠获得的数据的解释变复杂(Bedel等人，Nat Immunol.2012年7月19日；13(8):705
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6)。为了克服这个缺点，已经产生了缺乏I型NKT细胞而保持总体TCR库的Jα18缺陷型小鼠的新品系，以促进关于I型NKT细胞的进一步研究(Chandra等人，Nat Immunol.2015年8月；16(8):799
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80)。可以基于CD4和CD8的表面表达将I型NKT细胞进一步细分为CD4+和CD4
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CD8
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(双阴性或DN)亚类，以及
在人类中发现的一小部分CD8+细胞(Bendelac等人，Science.1994年3月25日；263(5154):1774
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8；Lee等人，J Exp Med.2002年3月4日；195(5):637
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41)。I型NKT细胞存在于小鼠和人类中的不同组织中，但是在小本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种制备药物组合物的方法，所述药物组合物包含含有扩增和富集的超活化细胞因子杀伤T细胞(SCKTC)群体的细胞产物，所述方法按顺序包括：(a)分离包含细胞因子杀伤T细胞(CKTC)群体的单核细胞(MC)群体；(b)任选地在无菌条件下将(a)的制备物运输至加工设施；(c)在培养系统中培养所述MC群体；(d)使步骤(c)的所述培养系统与α
‑
半乳糖神经酰胺(αGalCer)或其类似物或功能等同物以及与包含CD1d和αGalCer或其类似物或功能等同物的细胞群体接触，其中所述接触足以刺激所述CKTC群体的扩增；(e)使步骤(d)的所述培养系统与IL
‑
2、IL
‑
7、IL
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15和IL
‑
12以预定的添加顺序和时间接触，并与包含CD1d和αGalCer或其类似物或功能等同物的新鲜细胞群体接触，其中所述接触足以刺激扩增的CTKC群体中的一些的活化，从而形成所述扩增和富集的SCKTC群体；并且(f)从所述培养系统中收集所述扩增和富集的SCKTC群体，以形成SCKTC细胞产物；其中(f)的包含所述扩增和富集的SCKTC群体的所述细胞产物的特征在于以下中的一项或多项：与(a)的所述CKTC群体相比，分泌效应细胞因子的能力提高或细胞毒性提高；以及(g)用药学上可接受的载体配制(f)的包含所述扩增和富集的SCKTC群体的所述细胞产物，以形成包含含有所述扩增和富集的SCKTC群体的所述细胞产物的药物组合物。2.如权利要求1所述的方法，其中(a)中的单核细胞(MC)的来源是血液。3.如权利要求1所述的方法，其包括在步骤(e)和(f)之间，将所述培养物从所述加工设施运输到治疗设施。4.如权利要求3所述的方法，其中所述运输步骤在添加IL12后约1小时至约24小时内开始。5.如权利要求1所述的方法，其中步骤(c)任选地包括在进行步骤(d)之前，使所述MC重新悬浮并将所述MC调节至范围为约5
×
105个细胞/ml至约3
×
106个细胞/ml的浓度。6.如权利要求1所述的方法，步骤(e)包括将包含CD1d和αGalCer t或其类似物或功能等同物的新鲜细胞群体添加到所述培养系统。7.如权利要求1所述的方法，其中从步骤(d)至步骤(f)，将所述αGalCer或其类似物或功能等同物维持在恒定浓度。8.如权利要求7所述的方法，其中αGalCer或其类似物或功能等同物的浓度在约50ng/ml至约500ng/ml之间。9.如权利要求1所述的方法，其中从步骤(e)至步骤(f)，将IL
‑
2维持在恒定浓度。10.如权利要求9所述的方法，其中所述IL
‑
2的浓度范围为约10U/ml至约100U/ml。11.如权利要求1所述的方法，其中从步骤(e)至步骤(f)，将所述IL
‑
7维持在恒定浓度。12.如权利要求11所述的方法，其中IL
‑
7的浓度范围为约20ng/ml至200ng/ml。13.如权利要求1所述的方法，其中在培养的约第7天添加IL
‑
2和IL
‑
7。14.如权利要求1所述的方法，其中在培养的约第14天添加IL
‑
15。15.如权利要求1所述的方法，其中在培养的约第20天添加所述IL
‑
12。16.如权利要求1所述的方法，其中步骤(f)在培养的至少约第21天进行。17.如权利要求1所述的方法，其中从步骤(e)至步骤(f)，将所述IL
‑
15维持在恒定浓
度。18.如权利要求17所述的方法，其中IL
‑
15的浓度范围为约10ng/ml至约100ng/ml。19.如权利要求1所述的方法，其中从步骤(e)至步骤(f)，将所述IL
‑
12维持在恒定浓度。20.如权利要求19所述的方法，其中IL
‑
12的浓度范围为约10ng/ml至约100ng/ml。21.如权利要求1所述的方法，其还包括通过流式细胞术来表征所述扩增和富集的SCKTC群体的细胞表面标志物的表达的步骤。22.如权利要求21所述的方法，其中所述扩增和富集的SCKTC群体的亚群包含CD3+Vα24+Vβ11细胞、CD3+Vα24
‑
细胞或CD3+CD56+细胞中的一种或多种。23.如权利要求21所述的方法，其中所述SCKTC的亚群还包含Vβ11+细胞。24.如权利要求1所述的方法，其中所述扩增和富集的SCKTC群体占所述CKTC总群体的约40％至约60％。25.如权利要求1所述的方法，其中将IL
‑
2和IL
‑
7同时添加到所述培养物。26.如权利要求1所述的方法，其中将IL
‑
2、IL
‑
7和IL
‑
15同时添加到所述培养物。27.如权利要求1所述的方法，其中步骤(c)中的所述MC群体包含约5
×
105个细胞/ml至约3
×
106个细胞/ml。28.如权利要求1所述的方法，其中包含CD1和α
‑
半乳糖神经酰胺(αGalCer)的所述细胞是抗原呈递细胞。29.如权利要求28所述的方法，其中所述抗原呈递细胞是树突细胞(DC)。30.如权利要求29所述的方法，其中所述树突细胞负载有αGalCer。31.如权利要求30所述的方法，其中负载有αGalCer的所述树突细胞源自所述MC并且是贴壁细胞。32.如权利要求30所述的方法，其中通过以下方法制备负载有αGalCer的所述树突细胞，所述方法包括：(a)分离单核细胞(MC)群体；(b)在培养系统中培养所述MC群体；(c)使所述培养系统与IL
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4和GM

【专利技术属性】
技术研发人员：徐建青，X，
申请(专利权)人：中美生物科技控股公司，
类型：发明
国别省市：