一种核酸提取试剂盒以及提取核酸的方法技术

本申请涉及生物技术领域，具体公开了一种核酸提取试剂盒以及提取核酸的方法，该核酸提取试剂盒包括：裂解缓冲液、蛋白酶K冻干粉、漂洗缓冲液、洗脱液以及磁珠吸附液；蛋白酶K冻干粉包括：MOPSO、蛋白酶K、防腐剂、甘露醇以及葡聚糖。通过上述方式，核酸提取试剂盒中蛋白酶K的剂型为冻干粉，可在室温下长期稳定储存，从而克服了已有蛋白酶K溶液存在的缺点。而克服了已有蛋白酶K溶液存在的缺点。而克服了已有蛋白酶K溶液存在的缺点。

【技术实现步骤摘要】
一种核酸提取试剂盒以及提取核酸的方法


[0001]本申请涉及生物
，特别是涉及一种核酸提取试剂盒以及提取核酸的方法。

技术介绍

[0002]核酸的分离与纯化技术是分子生物学实验的一项基本技术，从最初的目的基因提取到PCR产物纯化或“胶回收”、以及基因克隆中质粒的提取等实验过程，都离不开核酸提取。
[0003]现有技术中，常用蛋白酶K作为核酸提取的催化剂，但是蛋白酶K溶液需要在
‑
20℃下低温储存。
[0004]但是，本申请专利技术人在长期研发过程中发现，蛋白酶K溶液无色透明，产生沉淀即失效，如果频繁开启试剂盒查看蛋白酶K溶液的状态，会造成盒内空气与外界产生热交换，蛋白酶K活性显著降低，难以达到长期稳定储存的要求。

技术实现思路

[0005]基于此，本申请提供一种核酸提取试剂盒以及提取核酸的方法，该核酸提取试剂盒中蛋白酶K的剂型为冻干粉，可在室温下长期稳定储存，从而克服了已有蛋白酶K溶液存在的缺点。
[0006]为解决上述技术问题，本申请采用的一个技术方案是：提供一种核酸提取试剂盒，包括：裂解缓冲液、蛋白酶K冻干粉、漂洗缓冲液、洗脱液以及磁珠吸附液；蛋白酶K冻干粉包括：MOPSO、蛋白酶K、防腐剂、甘露醇以及葡聚糖。
[0007]为解决上述技术问题，本申请采用的另一个技术方案是：提供一种提取核酸的方法，该方法基于前述的核酸提取试剂盒，该方法包括以下步骤：将裂解缓冲液、蛋白酶K冻干粉以及磁珠吸附液与样品混合，以便获得吸附有核酸的磁珠；采用漂洗缓冲液对吸附有核酸的磁珠进行清洗处理，清洗后固液分离，并收集吸附有核酸的磁珠；采用洗脱液对清洗后的吸附有核酸的磁珠进行洗脱处理，洗脱后固液分离，并收集上清液，以便获得核酸溶液。
[0008]本申请的有益效果是：区别于现有技术的情况，本申请核酸提取试剂盒包括裂解缓冲液、蛋白酶K冻干粉、漂洗缓冲液、洗脱液以及磁珠吸附液，蛋白酶K冻干粉可在室温下长期稳定储存，改善了制剂的稳定性，克服了现有技术蛋白酶K溶液于在
‑
20℃下冷冻储存时由于频繁开启试剂盒所带来的蛋白酶K活性显著降低的弊病。在使用时，将蛋白酶K冻干粉于裂解缓冲液、磁珠吸附液中溶解后使用，操作方便。
附图说明
[0009]为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他
的附图。其中：
[0010]图1是本申请一实施例提供的提取核酸的方法的流程示意图。
具体实施方式
[0011]下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性的劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。
[0012]本申请的一种核酸提取试剂盒，包括：裂解缓冲液、蛋白酶K冻干粉、漂洗缓冲液、洗脱液以及磁珠吸附液。蛋白酶K冻干粉包括：MOPSO、蛋白酶K、防腐剂、甘露醇以及葡聚糖。
[0013]具体而言，本申请的蛋白酶K为蛋白酶K(E.C.3.4.21.64)是真菌Tritirachium album Limber合成的胞外内肽3969224酶，它是具有典型催化三元组Asp
‑
His
‑
Ser的丝氨酸蛋白酶类中的一员，能够切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键，起到破裂细胞、释放核酸的作用。此外，蛋白酶K还能降解与核酸结合的蛋白质，促进核酸的分离。
[0014]蛋白酶K具有高于30U/mg的特异活性，是已知的内肽酶中最有活性的之一，并且非特异性水解天然的和变性的蛋白质。成熟蛋白酶K由279个氨基酸组成，两个二硫桥和两个键合的钙离子使得紧密结构稳定。蛋白酶K在高温(达65℃)和宽pH范围(pH＝7.5
‑
12.0)具有高稳定性。在变性剂例如脲或SDS存在下其活性得以提高。上述性质使得蛋白酶K在要求非特异性蛋白质降解的生物
中具有很好的应用，特别是从粗提取液中分离核酸(DNA或RNA)以及在DNA分析中预制备样品，另外蛋白酶K也可应用于蛋白质分析领域，例如结构释析。
[0015]3‑
(N
‑
吗啡啉)
‑2‑
羟基丙磺酸(MOPSO)的缓冲液是一种非离子性缓冲液，其pH范围在6.2
‑
7.6之间，可有效抑制RNA酶和DNA酶的活性。
[0016]稳定剂可以作为冻干骨架，有助于保持蛋白酶K的活性，尤其是在4℃
‑
30℃的温度下长时间贮藏过程中。
[0017]在另一个实施例中，稳定剂可以进一步包含至少一种填充剂，填充剂可以包括葡聚糖、麦芽糖糊精、聚乙烯吡咯烷酮、羟乙基淀粉或其组合。
[0018]在某些实施例中，稳定剂可以进一步包含至少一种糖醇，糖醇可以包括山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、麦芽糖醇或其组合。
[0019]在另一个实施例中，稳定剂可以进一步包含至少一种非还原性寡糖，非还原性寡糖可以包括海藻糖、蔗糖、棉子糖或其组合。
[0020]本申请还提供了进一步包含至少一种填充剂和至少一种糖醇的稳定剂，其中糖醇可以包括填充剂可以包括葡聚糖、麦芽糖糊精、聚乙烯吡咯烷酮、羟乙基淀粉或其组合，并且其糖醇可以包括山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、麦芽糖醇或其组合。
[0021]防腐剂可以包括NaN3或ProClin300或其组合。
[0022]需要说明的是，蛋白酶K冻干粉可以由蛋白酶K溶液经过冷冻干燥得到。具体地，将MOPSO缓冲液、蛋白酶K、防腐剂以及稳定剂转移至冻干瓶中，将冻干瓶置于
‑
20℃以下低温乙醇浴中转动冻干瓶，使溶质尽量薄且均匀地涂布于瓶壁上，待溶液蒸发干后，牢固地固定冻干瓶于冻干机上10小时；取下内壁载有冻干粉的冻干瓶，抽真空密封，置于4
‑
30℃下保
存。
[0023]区别于现有技术的情况，本申请核酸提取试剂盒包括裂解缓冲液、蛋白酶K冻干粉、漂洗缓冲液、洗脱液以及磁珠吸附液，蛋白酶K冻干粉可在室温下长期稳定储存，改善了制剂的稳定性，克服了现有技术蛋白酶K溶液于在
‑
20℃下冷冻储存时由于频繁开启试剂盒所带来的蛋白酶K活性显著降低的弊病。在使用时，将蛋白酶K冻干粉于裂解缓冲液、磁珠吸附液中溶解后使用，操作方便。
[0024]在一实施例中，核酸提取试剂盒的储存温度为4
‑
30℃。
[0025]具体而言，由于本申请的蛋白酶K冻干粉可在4
‑
30℃下长期稳定储存，而核酸提取试剂盒中的其他溶液均可在室温下长期稳定储存，因此，本申请的核酸提取试剂盒可储存在4
‑
30℃的环境中。
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种核酸提取试剂盒，其特征在于，包括：裂解缓冲液、蛋白酶K冻干粉、漂洗缓冲液、洗脱液以及磁珠吸附液；所述蛋白酶K冻干粉包括：MOPSO、蛋白酶K、防腐剂、稳定剂。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述核酸提取试剂盒的储存温度为4
‑
30℃。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述裂解缓冲液包括：MOPSO缓冲液、异硫氰酸胍、非离子去垢剂、阴离子去垢剂、EDTA、二硫苏糖醇、异丙醇、氯化钠以及防腐剂；所述漂洗缓冲液包括：氯化钠和乙醇；所述洗脱液包括：无RNA酶的水；所述磁珠吸附液包括：0.5
‑
1.5μm磁珠、40
‑
300nm磁珠、MOPSO缓冲液、以及防腐剂。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，在所述裂解缓冲液中，所述MOPSO缓冲液的浓度为10
‑
100mM，所述MOPSO缓冲液的pH值在6.2～7.6之间，所述异硫氰酸胍的质量百分比浓度为0.1％
‑
5％，所述非离子去垢剂的质量百分比浓度为0.1％
‑
5％，所述阴离子去垢剂的质量百分比浓度为0.01％
‑
1％，所述二硫苏糖醇的浓度为1
‑
20M，所述EDTA的质量百分比浓度为0.1
‑
200mM、所述异丙醇的质量百分比浓度为10％
‑
99.5％，所述氯化钠的浓度为1
‑
200mM，所述防腐剂的质量百分比浓度为0.01％
‑
0.1％。5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，在所述漂洗缓冲液中，所述氯化钠的浓度为1
‑
200mM，所述乙醇的浓度为10％
‑
100％。6.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，在所述磁珠吸附液中，所述0.5
‑
1.5μm磁珠的浓度为10
‑<...

【专利技术属性】
技术研发人员：ꢀ七四专利代理机构，
申请(专利权)人：深圳市帝迈生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：