一种广谱中和抗体的筛选方法技术

本发明专利技术公开了一种广谱中和抗体的筛选方法，包括以下步骤：包被免疫管：将100ug广谱中和抗体加入到2mLPBS中并加入到免疫管中，4度过夜孵育，封闭：将扩增和纯化噬菌体文库后的噬菌体500ul加入到1mL3％BSA中，抗原和噬菌体孵育：将封闭后的免疫管用含有0.01％吐温的PBS洗3次，清洗：将抗原和噬菌体孵育后的免疫管用含有0.01％吐温的PBS洗20次：本发明专利技术通过设置包被免疫管、封闭、抗原和噬菌体孵育、清洗、洗脱和ELISA鉴定的方法流程，解决了目前的广谱中和抗体的筛选方法不能够简便、快速、高通量的筛选，从而造成筛选成本高的问题，该广谱中和抗体的筛选方法，具备能够有效不能够简便、快速、高通量的筛选，从而造成筛选成本高的问题的优点。问题的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种广谱中和抗体的筛选方法


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体为一种广谱中和抗体的筛选方法。

技术介绍

[0002]抗体是指机体由于抗原的刺激而产生的具有保护作用的蛋白质。它免是一种由浆细胞分泌，被免疫系统用来鉴别与中和外来物质如细菌、病毒等的大型Y形蛋白质，仅被发现存在于脊椎动物的血液等体液中，及其B细胞的细胞膜表面。抗体能识别特定外来物的一个独特特征，该外来目标被称为抗原，抗体是一类能与抗原特异性结合的免疫球蛋白。抗体按其反应形式分为凝集素、沉降素、抗毒素、溶解素、调理素、中和抗体、补体结合抗体等。按抗体产生的来源分为正常抗体、如血型ABO型中的抗A和抗B的抗体，和免疫抗体如抗微生物的抗体。按反应抗原的来源分为异种抗体，异嗜性抗体，同种抗体和自身抗体。按抗原反应的凝集状态分为完全抗体IgM和不完全抗体IgG等。抗体在医疗实践中应用甚为广泛。如用于疾病的预防、诊断和治疗方面都有一定的作用。临床上用丙种球蛋白预防病毒性肝炎、麻疹、风疹等，国际上用抗Rh免疫球蛋白预防因Rh血型不合引起的溶血症。诊断上如类风湿因子用于类风湿性关节炎，抗核抗体(ANA)、抗DNA抗体用于系统性红斑狼疮，抗精子抗体用于原发性不孕症的诊断等；治疗上如毒素中毒用抗毒治疗以及免疫缺陷性疾病的治疗等。目前的广谱中和抗体的筛选方法不能够简便、快速、高通量的筛选，从而造成筛选成本高，为此提出一种广谱中和抗体的筛选方法，来解决此问题。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供一种广谱中和抗体的筛选方法，解决了目前的广谱中和抗体的筛选方法不能够简便、快速、高通量的筛选，从而造成筛选成本高的问题。
[0004]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种广谱中和抗体的筛选方法，包括以下步骤：
[0005]步骤1：包被免疫管：将100ug广谱中和抗体加入到2mLPBS中并加入到免疫管中，4度过夜孵育；
[0006]步骤2：封闭：将扩增和纯化噬菌体文库后的噬菌体500ul加入到1mL3％BSA中，室温旋转孵育2h；
[0007]步骤3：抗原和噬菌体孵育：将封闭后的免疫管用含有0.01％吐温的PBS洗3次，每次5分钟；
[0008]步骤4：清洗：将抗原和噬菌体孵育后的免疫管用含有0.01％吐温的PBS洗20次，每次5分钟；
[0009]步骤5：洗脱：往免疫管中加入1mL100mMTrimethymime，室温孵育10分钟，加入1MTris
‑
HCl中和Trimethymime，将最后1.5mL的洗脱噬菌体转移到新的离心管中，将洗脱的噬菌体按照扩增和纯化噬菌体文库；
[0010]步骤6：ELISA鉴定：将上一步筛选得到的噬菌体稀释10^6倍后，取100ul加入到
OD600为0.5的SS320菌液中，37度培养30分钟后涂布含有四环素和氨苄霉素的2XYT培养板上，37度过夜培养第二天得到单克隆菌落。
[0011]优选的，所述步骤5中，将洗脱的噬菌体按照扩增和纯化噬菌体文库，扩增后再重复筛选过程2次，逐次减半包被免疫管的抗体量，得到3次筛选后的洗脱噬菌体。
[0012]优选的，所述步骤6中，挑选96个单克隆菌落到含有四环素和氨苄霉素的2XYT培养液的96孔细胞培养板上，37度培养3
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4小时后往培养孔中加入卡那霉素和20:1的辅助噬菌体，30度过夜培养。
[0013]优选的，所述步骤6中，第二天将过夜培养后的细胞液离心，获得上清液。
[0014]优选的，所述步骤6中，将过夜包被抗原和用3％BSA封闭过后的96孔ELISA板中加入上一步获得的噬菌体上清液，室温孵育1h。
[0015]优选的，所述步骤6中，用含有0.05％吐温的PBS清洗3次后，用噬菌体抗体作为一抗，用相应的二抗TMB显色后在波长450读取每个孔的吸光值。
[0016]优选的，所述步骤6中，选取吸光值读数最高的SS320菌落送去测序，得到抗体的基因序列。
[0017]优选的，所述步骤5中，扩增后再重复筛选过程2次，逐次减半包被免疫管的抗体量，得到3次筛选后的洗脱噬菌体。
[0018]优选的，所述步骤3中，将封闭后的噬菌体文库加入到封闭后的免疫管中，添加PBS直至2
‑
3mL，室温旋转孵育1h。
[0019]优选的，所述步骤2中，同时往包被好的免疫管中加入2
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3mL3％BSA，室温旋转孵育2h。
[0020]与目前技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术通过设置包被免疫管、封闭、抗原和噬菌体孵育、清洗、洗脱和ELISA鉴定的方法流程，解决了目前的广谱中和抗体的筛选方法不能够简便、快速、高通量的筛选，从而造成筛选成本高的问题，该广谱中和抗体的筛选方法，具备能够有效不能够简便、快速、高通量的筛选，从而造成筛选成本高的问题的优点。
具体实施方式
[0021]下面将通过实施例的方式对本专利技术作更详细的描述，这些实施例仅是举例说明性的而没有任何对本专利技术范围的限制。
[0022]本专利技术提供一种技术方案：一种广谱中和抗体的筛选方法，包括以下步骤：
[0023]步骤1：包被免疫管：将100ug广谱中和抗体加入到2mLPBS中并加入到免疫管中，4度过夜孵育；
[0024]步骤2：封闭：将扩增和纯化噬菌体文库后的噬菌体500ul加入到1mL3％BSA中，室温旋转孵育2h；
[0025]步骤3：抗原和噬菌体孵育：将封闭后的免疫管用含有0.01％吐温的PBS洗3次，每次5分钟；
[0026]步骤4：清洗：将抗原和噬菌体孵育后的免疫管用含有0.01％吐温的PBS洗20次，每次5分钟；
[0027]步骤5：洗脱：往免疫管中加入1mL100mMTrimethymime，室温孵育10分钟，加入1MTris
‑
HCl中和Trimethymime，将最后1.5mL的洗脱噬菌体转移到新的离心管中，将洗脱的
噬菌体按照扩增和纯化噬菌体文库；
[0028]步骤6：ELISA鉴定：将上一步筛选得到的噬菌体稀释10^6倍后，取100ul加入到OD600为0.5的SS320菌液中，37度培养30分钟后涂布含有四环素和氨苄霉素的2XYT培养板上，37度过夜培养第二天得到单克隆菌落。
[0029]实施例一：
[0030]包被免疫管：将100ug广谱中和抗体加入到2mLPBS中并加入到免疫管中，4度过夜孵育；封闭：将扩增和纯化噬菌体文库后的噬菌体500ul加入到1mL3％BSA中，室温旋转孵育2h；抗原和噬菌体孵育：将封闭后的免疫管用含有0.01％吐温的PBS洗3次，每次5分钟；清洗：将抗原和噬菌体孵育后的免疫管用含有0.01％吐温的PBS洗20次，每次5分钟；洗脱：往免疫管中加入1mL100mMTrimethymime，室温孵育10分钟，加入1MTris
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HCl中和Trimethymime，将最后1.5mL的洗脱噬菌体本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种广谱中和抗体的筛选方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1：包被免疫管：将100ug广谱中和抗体加入到2mLPBS中并加入到免疫管中，4度过夜孵育；步骤2：封闭：将扩增和纯化噬菌体文库后的噬菌体500ul加入到1mL3％BSA中，室温旋转孵育2h；步骤3：抗原和噬菌体孵育：将封闭后的免疫管用含有0.01％吐温的PBS洗3次，每次5分钟；步骤4：清洗：将抗原和噬菌体孵育后的免疫管用含有0.01％吐温的PBS洗20次，每次5分钟；步骤5：洗脱：往免疫管中加入1mL100mMTrimethymime，室温孵育10分钟，加入1MTris
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HCl中和Trimethymime，将最后1.5mL的洗脱噬菌体转移到新的离心管中，将洗脱的噬菌体按照扩增和纯化噬菌体文库；步骤6：ELISA鉴定：将上一步筛选得到的噬菌体稀释10^6倍后，取100ul加入到OD600为0.5的SS320菌液中，37度培养30分钟后涂布含有四环素和氨苄霉素的2XYT培养板上，37度过夜培养第二天得到单克隆菌落。2.根据权利要求1所述的一种广谱中和抗体的筛选方法，其特征在于：所述步骤5中，将洗脱的噬菌体按照扩增和纯化噬菌体文库，扩增后再重复筛选过程2次，逐次减半包被免疫管的抗体量，得到3次筛选后的洗脱噬菌体。3.根据权利要求1所述的一种广谱中和抗体的筛选方法，其特征在于：所述步骤6中，挑选96个单克隆菌落到含有四环素和氨苄霉素的2XYT培养液的96孔细胞培养板上，37度培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔雨晨，赵晓宇，
申请(专利权)人：苏州复因普肽生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：