一种用于早期诊断妊娠糖尿病的miRNA分子标志物及其应用制造技术

本发明专利技术属于妊娠糖尿病诊断标志物分子的技术领域，具体涉及:一种用于早期诊断妊娠糖尿病的miRNA分子标志物及其应用。所述miRNA分子标志物包括miRNA

【技术实现步骤摘要】
一种用于早期诊断妊娠糖尿病的miRNA分子标志物及其应用


[0001]本专利技术属于妊娠糖尿病诊断标志物分子的
，具体涉及一种用于早期诊断妊娠糖尿病的miRNA分子标志物及其应用。

技术介绍

[0002]妊娠期糖尿病(GDM)定义为任何程度的胰岛素抵抗和葡萄糖耐受不良，在怀孕期间发病或首次发现。GDM是最常见的妊娠并发症之一，其患病率从4％到15％不等。GDM患者在分娩后发生多种慢性疾病的风险增加，包括2型糖尿病，独立于其他临床危险因素。此外，GDM孕妇更容易发生羊水过多、难产、死胎、死产、巨大儿等不良妊娠事件，而GDM婴儿新生儿疾病发生率较高。GDM及其相关的代谢紊乱正在全球范围内迅速蔓延，对孕妇及其新生儿造成健康和生命危险，这种危险可能持续到成年。然而，GDM的发病机制尚不清楚，大多数妇女在怀孕前没有糖尿病或只有轻微的症状，加重的糖尿病只发生在怀孕期间，但一旦妇女分娩血糖水平和其他生理变化恢复正常，这是GDM的主要临床特征。这表明，在怀孕期间短暂出现的胎盘是这种情况的主要效应器官。妊娠期间糖皮质激素、催乳素、孕酮、胎盘生长激素等激素水平升高，可进一步促进胰岛素抵抗和GDM的发生。
[0003]在孕妇的胎盘组织上，PI3K/AKT信号通路在胰岛素抵抗中其关键作用，在分析糖尿病发病机制时常用于研究。葡萄糖转运体(GLUTs)是PI3K/AKT通路的重要组成部分，迄今已鉴定出6中GLUT蛋白
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glut1
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5和glut7，其中GLUT4是进入骨骼肌的关键葡萄糖转运蛋白。GLUT4由SLC2A4(染色体17p13)编码，在胰岛素信号刺激下可从细胞间室转移到细胞膜表面，在糖稳态和糖尿病发病机制中起重要作用。因此以上观察结果表明，胎盘可能也是PI3K/AKT/GLUT4信号通路的靶点。GDM对产妇及婴儿的危害极大，但目前的临床诊断方法十分局限，主要是空腹血糖检测及口服葡萄糖耐量OGTT实验，这些都是在GDM发生后检出的确诊实验，临床急需开发出用于GDM风险预测的早筛和疾病早期诊断的分子标志物。
[0004]MicroRNAs(miRNAs)由一类19
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24个核苷酸长的小非编码RNA分子组成。它们虽然高度保守，但表达谱多样性广泛，并通过在转录后水平调控靶基因表达参与许多生物学过程。多项研究表明，miRNAs参与II型糖尿病的发病机制，但是，哪些miRNAs在胰岛素通路介导的GDM中发挥调控作用及主要功能尚不清楚，而这些问题的解决有助于开发出GDM早期诊断的分子诊断产品。

技术实现思路

[0005]针对上述问题，本专利技术的目的在于提供一种用于早期诊断妊娠糖尿病的miRNA分子标志物及其应用，所述miRNA
‑
372标志物可用于早期诊断GDM以及作为治疗GDM的靶点。
[0006]本专利技术的
技术实现思路
如下：
[0007]本专利技术提供了一种用于早期诊断妊娠糖尿病的miRNA分子标志物，所述miRNA分子标志物包括miRNA
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372标志物、miRNA
‑
22标志物的一种或两种组合；
[0008]所述miRNA
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372标志物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示；
[0009]所述miRNA
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22标志物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.2所示；
[0010]本专利技术还提供了一种miRNA
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372标志物的模拟物，其特征在于，其正向引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.3所示，反向引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.4所示。
[0011]本专利技术还提供了一种miRNA
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22标志物的模拟物，其正向引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.5所示，反向引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.6所示。
[0012]本专利技术还提供了一种miRNA
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372标志物在制备妊娠糖尿病诊断试剂盒的应用；
[0013]所述试剂盒包括上述正向引物、反向引物分子以及PCR反应常用的酶和试剂。
[0014]本专利技术还提供了一种的miRNA
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22标志物在制备妊娠糖尿病诊断试剂盒的应用；
[0015]所述试剂盒包括上述正向引物、反向引物分子以及PCR反应常用的酶和试剂。
[0016]本专利技术还提供了一种早期诊断妊娠糖尿病的miRNA分子标志物的靶点基因SLC2A4，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.20所示。
[0017]本专利技术的有益效果如下：
[0018]本专利技术所述miRNA分子标志物，包括miRNA
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372标志物、miRNA
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22标志物的一种或两种组合，用于早期诊断妊娠糖尿病以及制备试剂盒，可作为治疗GDM的靶点；与正常葡萄糖条件下培养的细胞相比，高糖培养的HTR8/SVneo细胞表现出更低的miR
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372和miRNA
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22表达，表明它们均可作为胰岛素信号通路的调节器。Western blot结果显示，转染miR
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372或miRNA
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22模拟物的高糖培养细胞中GLUT4的表达显著增加，而转染miR
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372或miRNA
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22抑制剂的细胞中GLUT4的表达则相反。miR
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372或miRNA
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22的模拟物或抑制剂处理的细胞中，PI3K、AKT和IRS的表达均显著降低。提示GLUT4是胰岛素通路中miR
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372的主要靶点。当GLUT4表达水平升高时，可促进对葡萄糖的摄取和利用。由于miR
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372和miRNA
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22对GLUT4具有明显的正调控作用，可降低GDM中葡萄糖积累，改善高血糖，凸显其作为GDM治疗靶点的潜力，miR
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22和miR
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372表达的下调可能通过调控PI3K/GLUT4通路促进GDM的胰岛素抵抗，而miR
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22和miR
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372表达的增加可以对抗这些影响，并且miR
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22和miR
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372直接靶向SLC2A4的3'utr并调控其表达。
附图说明
[0019]图1为miR
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372在胎盘组织中的表达水平结果图；
[0020]图2为miR
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372在HRT8/SVneo(人绒毛膜滋养层)细胞中的表达水平结果图；
[0021]图3为胎盘组织中胰岛素信号通路的IRS/PI3K/AKT表达结果图；
[0022]图4为IRS/PI3K/AKT对miR
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372诱导的胰岛素信号通路的调控作用表达结果图；
[0023]图5为双荧光素酶基因报告。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于早期诊断妊娠糖尿病的miRNA分子标志物，其特征在于，所述miRNA分子标志物包括miRNA
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372标志物、miRNA
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22标志物的一种或两种组合；所述miRNA
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372标志物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示；所述miRNA
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22标志物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.2所示。2.一种权利要求1所述miRNA
‑
372标志物的模拟物，其特征在于，其正向引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.3所示，反向引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.4所示。3.一种权利要求1所述miRNA
‑
22标志物的模拟物，其特征在于，其正...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁贤琳，
申请(专利权)人：广州天源高新科技有限公司，
类型：发明
国别省市：