具有致耐受性肽的深度乳清蛋白水解产物制造技术

本发明专利技术涉及用于制备包含致耐受性肽的超滤乳清蛋白水解产物的方法，其中在超滤之前添加乳化剂和/或离液剂。本发明专利技术还涉及通过该方法可获得的产品。法可获得的产品。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有致耐受性肽的深度乳清蛋白水解产物


[0001]本专利技术属于含有水解牛奶蛋白的配方食品领域，适用于患有牛奶蛋白过敏或有发生牛奶蛋白过敏风险的婴儿。

技术介绍

[0002]在胃肠道中，膳食蛋白质暴露于免疫系统。作为免疫系统的默认反应，对这些无害的食物蛋白质产生了口服耐受性。婴儿中高度存在口服免疫耐受性的发展，婴儿在生命早期通过暴露于膳食蛋白质而暴露于许多无害的蛋白质。这种对无害蛋白质的自然反应发生破坏，就会出现食物过敏。人们普遍认为，近几十年来食物过敏的患病率一直在增加，特别是在西方国家。在生命早期，牛奶过敏(CMA)是最主要的食物过敏，目前有2
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5％的婴儿患有此病。婴儿期CMA代表着日益增加的全球健康和经济负担，这不仅是由于过去几十年患病率的增加引起，而且是由于病症的持续性、严重性和复杂性增加引起。除了急性临床表现外，生命早期的CMA还可能具有长期影响，包括生长发育延迟，以及在生命后期患特应性疾病的风险增加。因此，治疗或预防CMA的策略非常重要。
[0003]婴儿和儿童CMA的标准饮食管理是通过从饮食中消除牛奶来避免过敏原。已经开发了多种配方食品来消除牛奶蛋白。对于患有轻度CMA的婴儿，建议使用深度水解配方食品(eHF)，而对于患有严重CMA的婴儿以及不能耐受eHF或eHF无法解决CMA症状的婴儿，建议使用基于氨基酸的配方食品(AAF)。然而，这种配方食品的缺点是仅仅避免了过敏反应而没有进行治疗。当婴儿或儿童接触牛奶蛋白时，会发生过敏反应。
[0004]另一种方法是专注于能够诱导对蛋白质的口服免疫耐受性但不能引起过敏反应的肽。为此，销售了含有部分水解的牛奶蛋白的配方食品，所述部分水解的牛奶蛋白具有能够诱导口服免疫耐受性的肽。当将完整的牛奶蛋白引入饮食时，这些降低了过敏反应的风险。然而，此类配方食品通常含有过敏原残留物，不适合已经患有过敏的婴儿。
[0005]EP 0 629 350公开了使用基本上不含过敏原的乳清蛋白水解产物，据说其能够诱导牛奶蛋白耐受性。当用淋巴细胞刺激测试进行检测时，包含经超滤的具有3.3％大于5kDa的肽的部分水解的乳清蛋白水解产物的配方食品能够诱导对全牛奶蛋白和α乳清蛋白的免疫耐受性。未发现对β乳球蛋白有影响。
[0006]EP 0 827 697公开了乳清的用途，其已被酶水解用于制备在易感哺乳动物中诱导对牛奶的口服耐受性的组合物。乳清对致敏蛋白的免疫检测水平比未水解的乳清低100倍。
[0007]WO 00/42863公开了一种低致敏性组合物，用于在处于蛋白质过敏风险的婴儿中诱导蛋白质耐受性，该组合物包含非致敏性深度水解的蛋白质主要成分(basis)和/或游离氨基酸主要成分，所述组合物包含作为活性成分的至少一种致敏蛋白的致耐受性肽。实施例表明，在将它们添加到婴儿配方食品中之前，源自β乳球蛋白的致耐受性肽已从水解产物中纯化或化学合成。
[0008]WO 2011/151059公开了含有部分水解的蛋白质和非消化性寡糖的婴儿营养品，用于诱导对天然膳食蛋白质的口服耐受性。特别是成熟β乳球蛋白分子的第13
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48位氨基酸区
域中的肽在诱导口服耐受性诱导方面是有效的。结果表明，深度水解的乳清蛋白不能诱导口服免疫耐受性。
[0009]WO 2013/083691公开了能够治疗过敏的在成熟β乳球蛋白分子的第13
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48位氨基酸区域中的合成的肽。公开了添加此类肽的不含过敏原的配方食品。
[0010]JP 2010
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105915公开了通过水解β乳球蛋白获得并用于食品和饮料的肽。
[0011]WO 2015/090347涉及鉴定的肽，其能够诱导对牛奶的耐受性，尤其是对β乳球蛋白的耐受性。
[0012]WO 2016/0148572公开了使用合成的β乳球蛋白肽和益生菌的特定混合物的口服免疫耐受性。
[0013]Gouw等人，2018 Clin Exp Allergy；48：1345
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1353，示出部分乳清蛋白水解产物包含在成熟β乳球蛋白分子的第13至48位氨基酸区域中的特定的致耐受性肽。
[0014]WO 2014/14713公开了一种过敏原制剂，其在水包油乳液中包含过敏原。
[0015]因此，需要包含乳清蛋白的深度水解产物的营养品，该营养品不含过敏原并含有特定的牛β乳球蛋白肽，并且以简单方便的方式生产(无需纯化或合成的肽)，增强患有食物过敏的受试者的口服免疫耐受性，对食物蛋白质，特别是牛奶蛋白的口服免疫耐受性诱导具有改善的效果。

技术实现思路

[0016]本领域惯用的是对乳清蛋白水解产物进行超滤步骤以减少致敏蛋白，尤其是β乳球蛋白的量。由于蛋白质的大小大于肽的大小，因此选择对大蛋白质不可渗透但允许较小肽通过的孔径，从而预期致耐受性肽能够渗透。然而，应用这种传统技术，专利技术人发现成熟β乳球蛋白分子的第13至48位氨基酸区域中的致耐受性β乳球蛋白肽不存在于常规的超滤乳清蛋白水解产物中。虽然发现这些肽实际上是在蛋白质被蛋白水解酶降解的第一步中产生的，但在膜过滤步骤之后的渗透物中不存在这些肽，而是保留在渗余物(retentate)中，如实施例1所示。这种保留不能用肽的大小来解释，它远低于超滤膜的截止值。
[0017]因此，专利技术人开发了用于生产超滤乳清蛋白水解产物的改进方法。专利技术人惊奇地发现，通过在乳清蛋白水解之前、期间或之后但在膜过滤步骤之前添加食品级乳化剂(实施例2)或离液剂(实施例3)，致耐受性β乳球蛋白肽能够通过膜并出现在渗透物中。这导致水解乳清蛋白富含致耐受性β乳球蛋白肽，而没有较大的致敏性肽和蛋白质(如免疫原性β乳球蛋白)的残留物的存在。
[0018]在第一方面，本专利技术涉及制备超滤乳清蛋白水解产物的方法，所述方法包括：
[0019]a)用一种或多种蛋白水解酶对乳清蛋白A进行水解1，从而获得乳清蛋白水解产物B，和
[0020]b)对乳清蛋白水解产物B进行膜超滤2，从而获得渗透物C1和渗余物C2，
[0021]其中：
[0022](i)在水解1之前或期间将乳化剂E添加到乳清蛋白A中，或者其中在膜超滤2之前将乳化剂和/或离液剂E添加到乳清蛋白水解产物B中，
[0023]其中超滤乳清蛋白水解产物在渗透物C1中，
[0024]和/或其中：
[0025](ii)在步骤b)之后
[0026]c)将乳化剂E和/或离液剂E加入渗余物C2中，从而获得渗余物C3，
[0027]d)对渗余物C3进行膜超滤3，从而获得渗透物D1和渗余物D2，和
[0028]e)将渗透物D1的至少一部分添加到渗透物C1中，从而获得渗透物D3，其中超滤乳清蛋白水解产物在渗透物D3中。
[0029]步骤a)中提供的乳清蛋白A可以源自一种或多种乳清蛋白来源。不受理论束缚，专利技术人相信在不存在乳化剂和/或离液剂E的情况下致耐受性片段成簇。簇的大小使得它们不会渗透超滤膜。通过添本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.制备超滤乳清蛋白水解产物的方法，所述方法包括：a)用一种或多种蛋白水解酶对乳清蛋白A进行水解1，从而获得乳清蛋白水解产物B，和b)对乳清蛋白水解产物B进行膜超滤2，从而获得渗透物C1和渗余物C2，其中(i)在水解1之前或期间将乳化剂E添加到乳清蛋白A中，或者其中在膜超滤2之前将乳化剂和/或离液剂E添加到乳清蛋白水解产物B中，其中超滤乳清蛋白水解产物在渗透物C1中，和/或其中：(ii)在步骤b)之后c)将乳化剂和/或离液剂E加入渗余物C2中，从而获得渗余物C3，d)对渗余物C3进行膜超滤3，从而获得渗透物D1和渗余物D2，和e)将渗透物D1的至少一部分添加到渗透物C1中，从而获得渗透物D3，其中超滤乳清蛋白水解产物在渗透物D3中。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述超滤乳清蛋白水解产物包含至少一种β乳球蛋白肽，所述至少一种β乳球蛋白肽包含根据SEQ ID No.2
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70中任一项的氨基酸序列，优选地根据SEQ ID No.31
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70中任一项的氨基酸序列。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述超滤乳清蛋白水解产物包含每克蛋白质小于100mg、优选地小于50mg、更优选地小于10mg的大小大于5kDa的肽；和/或其中所述超滤乳清蛋白水解产物包含每克蛋白质小于30mg，优选地每克蛋白质小于10mg，最优选地每克蛋白质小于5mg的大小大于10kDa的肽。4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述超滤乳清蛋白水解产物包含每克蛋白质至少300mg的大小为1kDa或以下的肽，甚至更优选地每克蛋白质至少500mg；和/或其中所述超滤乳清蛋白水解产物包含每克蛋白质至少900mg大小为5kDa或以下的肽，甚至更优选地每克蛋白质至少950mg，最优选地每克蛋白质至少990mg。5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述超滤乳清蛋白水解产物的水解度为5
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50％，优选地10
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30％，更优选地15
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25％。6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述超滤乳清蛋白水解产物源自牛属、野牛属、水牛属或山羊属、更优选地牛属的物种的奶，优选地源自牛奶。7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中用于膜超滤2和/或膜超滤3的膜具有截止值在5
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1 5kDa、优选地5
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11kDa，更优选地9
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11kDa范围内的孔径。8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中添加乳化剂E，其中所述乳化剂优选地选自由柠檬酸单双甘油酯(Citrem)、双乙酰酒石酸单双甘油酯(Datem)、单酰基甘油(MAG)、二酰基甘油(DAG)、蔗糖酯(SE，E473)和大豆卵磷脂，以及其组合组成的组，更优选地是或包含Citrem。9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在水解之前或期间，优选地在水解之前，将乳化剂E添加到乳清蛋白中；并且优选地浓度为每克其添加到的蛋白质中至少50mg和/或浓度为至少1g/L。10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中添加离液剂，优选地浓度为每100ml至少1克和/或每克其添加到的蛋白质中至少25mg；并且其中所述离液剂优选地是或包含尿
素。11.根据权利要求10所述的方法，其中在膜超滤之前将离液剂E添加到乳清蛋白水解产物B中。12.可通过根据前述权利要求中任一项的方法获得的超滤乳清蛋白水解产物。13.根据权利要求12所述的超滤乳清蛋白水解产物，其包括：
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每克蛋白质少于6微克致敏性β乳球蛋白；和/或基于总蛋白质，小于3％，优选地小于1％的大小为5kDa的肽，和
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至少一种β乳球蛋白肽，其包含根据SEQ ID No.2
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30中任一项，优选地，根据SEQ ID No.31
‑
57中任一项，更优选地，根据SEQ ID No.58
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70中任一项的氨基酸序列；和
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优选地，每克蛋白质至少50mg离液剂和/或每克蛋白质至少5mg乳化剂。14.超滤乳清蛋白水解产物，其中所述超滤乳清蛋白水解产物包含具有以下大小分布的肽：基于水解产物的总蛋白质，60
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90％，大小＜1kDa，10
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40％大小为1至＜5kDa的肽，0
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0.5％...

【专利技术属性】
技术研发人员：塞尔吉奥，
申请(专利权)人：纽崔西亚公司，
类型：发明
国别省市：