一种粒细胞缺乏症动物模型及其构建方法以及ikzf1和cmyb在构建模型中的应用技术

本发明专利技术涉及疾病动物模型技术领域，具体涉及一种粒细胞缺乏症动物模型及其构建方法以及ikzf1和cmyb在构建模型中的应用。斑马鱼模型构建方法，包括以下依次进行的步骤：获取F0代斑马鱼；所述F0代斑马鱼包括ikzf1

【技术实现步骤摘要】
一种粒细胞缺乏症动物模型及其构建方法以及ikzf1和cmyb在构建模型中的应用


[0001]本专利技术涉及疾病动物模型
，具体涉及一种粒细胞缺乏症动物模型及其构建方法以及ikzf1和cmyb在构建模型中的应用。

技术介绍

[0002]重症先天性粒细胞缺乏症是一种影响骨髓细胞生成的疾病，造成严重的先天性中性粒细胞减少。其粒细胞的发育停止在早幼粒细胞或中幼粒细胞阶段，故周围血内成熟粒细胞数量减少，通常不伴有其他脏器畸形，为常染色体显性或隐性遗传，60％～80％有中性粒细胞弹力酶基因ELA2等多种突变。虽然，重症先天性粒细胞缺乏症已经被列入《第一批罕见病目录》，受到社会的广泛关注，但是，现有技术中仍然缺乏重症先天性粒细胞缺乏症的动物模型，导致深入研究该疾病的致病机制和分子机理，以及对该疾病的药物筛选和药效测试，无法有效进行。
[0003]斑马鱼(Danio rerio)是一种常见的热带鱼，斑马鱼的细胞标记技术、组织移植技术、突变技术、单倍体育种技术、转基因技术、基因活性抑制技术等已经成熟，且有数以千计的斑马鱼胚胎突变体，是研究胚胎发育分子机制的优良资源，有的还可做为人类疾病模型。由于斑马鱼基因与人类基因的相似度达到87％，这意味着在其身上做药物实验所得到的结果在多数情况下也适用于人体；斑马鱼的胚胎是透明的，所以生物学家很容易观察到药物对其体内器官的影响；雌性斑马鱼可产卵200枚，胚胎在24小时内就可发育成形，这使得生物学家可以在同一代鱼身上进行不同的实验，进而研究病理演化过程并找到病因。如何利用斑马鱼作为疾病动物模型的优势，建立重症先天性粒细胞缺乏症的动物模型，进而深入研究该疾病的致病机制并进行药物筛选和药效测试，是目前亟待解决的问题。

技术实现思路

[0004]本专利技术意在提供一种粒细胞缺乏症动物模型的构建方法，以解决现有技术中缺少关于重症先天性粒细胞缺乏症的疾病模型的技术问题。
[0005]为达到上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0006]一种粒细胞缺乏症动物模型的构建方法，包括以下依次进行的步骤：
[0007]S1：获取F0代斑马鱼；所述F0代斑马鱼包括单基因突变的杂合子ikzf1
+/
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品系和单基因突变的杂合子cmyb
+/
‑
品系；
[0008]S2：单基因突变的ikzf1
+/
‑
品系和单基因突变的cmyb
+/
‑
品系交配，获得F1代斑马鱼；所述F1代斑马鱼包括双基因突变的杂合子ikzf1
+/
‑
cmyb
+/
‑
品系；
[0009]S3：ikzf1
+/
‑
cmyb
+/
‑
品系自交，获得F3代斑马鱼；所述F3代斑马鱼包括kzf1
+/
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cmyb
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/
‑
品系、ikzf1
‑
/
‑
cmyb
+/
‑
品系和ikzf1
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‑
cmyb
‑
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‑
品系；
[0010]其中，+表示野生型等位基因，
‑
表示突变型等位基因；突变型等位基因由野生型等位基因经基因敲除后获得。
[0011]本方案还提供了根据一种粒细胞缺乏症动物模型的构建方法所获得的斑马鱼模型。
[0012]本方案还提供了一种ikzf1基因和cmyb基因在构建粒细胞缺乏症斑马鱼模型中的应用。
[0013]本方案的原理及优点是：
[0014]通过将ikzf1基因突变体杂合子斑马鱼(ikzf1
+/
‑
品系)和cmyb基因突变体杂合子斑马鱼(cmyb
+/
‑
品系)进行交配，获得ikzf1基因和cmyb基因同时缺陷的斑马鱼突变体杂合品系(ikzf1
+/
‑
cmyb
+/
‑
品系)。然后再通过品系内自交，获得包括kzf1
+/
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cmyb
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品系、ikzf1
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cmyb
+/
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品系和ikzf1
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‑
cmyb
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‑
品系在内的F3代斑马鱼，在这些品系的幼鱼中，出现了粒细胞大量消失或者完全消失的显现，可以作为研究粒细胞缺乏症的模型用于致病机制研究以及药物筛选等实践操作中。ikzf1
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‑
cmyb
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‑
品系的粒细胞缺失现象最为显著。在ikzf1
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背景上，cmyb功能缺失一半，或者cmyb
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背景上，ikzf1功能缺失一半，也会出现较为严重的粒细胞缺乏现象。
[0015]专利技术人研究发现，Ikzf1基因和cmyb基因具有协同调控粒细胞发育、分化和功能的作用，这是现有的研究未曾报道。其中，ikzf1蛋白和cmyb蛋白能够协同组成一个复合体来调控粒细胞产生，当两个因子同时缺失时候，粒细胞不能产生。粒细胞缺失的程度(病情的严重程度)和这两个因子的在体剂量相关。所以，使用ikzf1基因和cmyb基因的突变体进行杂交，可获得这两个因子同时缺陷且缺陷程度不同的一系列斑马鱼幼鱼，从而创建一个病情严重不同重症先天性粒细胞缺乏症的疾病动物模型，以适应于多种研究需求。
[0016]现有技术中，关于重症先天性粒细胞缺乏症的疾病模型也非常少，本技术方案填补了本领域的不足，解决了现有技术中缺少相关疾病模型的技术问题，可以用于粒细胞缺乏相关疾病的致病机理研究，也可以用于药物筛选和药效测试。
[0017]其中，基因右上角的“+”和
“‑”
分别表示野生型等位基因和突变型等位基因；突变型等位基因由野生型等位基因经基因敲除后获得。在具体的实施方式中，单基因突变的杂合子ikzf1
+/
‑
品系为ikzf1
+/Δ4+3
品系；单基因突变的杂合子cmyb
+/
‑
品系为cmyb
+/hkz3
品系；双基因突变的杂合子ikzf1
+/
‑
cmyb
+/
‑
品系为ikzf1
+/Δ4+3
cmyb
+/hkz3
品系；kzf1
+/
‑
cmyb
‑
/
‑
品系、ikzf1
‑
/
‑
cmyb
+/
‑
品系和ikzf1...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种粒细胞缺乏症动物模型的构建方法，其特征在于，包括以下依次进行的步骤：S1：获取F0代斑马鱼；所述F0代斑马鱼包括单基因突变的杂合子ikzf1
+/
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品系和单基因突变的杂合子cmyb
+/
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品系；S2：单基因突变的ikzf1
+/
‑
品系和单基因突变的cmyb
+/
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品系交配，获得F1代斑马鱼；所述F1代斑马鱼包括双基因突变的杂合子ikzf1
+/
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cmyb
+/
‑
品系；S3：ikzf1
+/
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cmyb
+/
‑
品系自交，获得F2代斑马鱼；所述F2代斑马鱼包括ikzf1
+/
‑
cmyb
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/
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品系、ikzf1
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/
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cmyb
+/
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品系和ikzf1
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cmyb
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品系；其中，+表示野生型等位基因，
‑
表示突变型等位基因；突变型等位基因由野生型等位基因经基因敲除后获得。2.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：李礼，何跃鹏，李洋，邵奕博，黄雪，
申请(专利权)人：润康生物医药苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：