一种细胞免疫调节蛋白及其应用制造技术

本发明专利技术涉及基因工程技术领域，尤其是涉及一种细胞免疫调节蛋白及其应用，所述细胞免疫调节蛋白为pIL

【技术实现步骤摘要】
一种细胞免疫调节蛋白及其应用


[0001]本专利技术涉及基因工程
，尤其是涉及一种细胞免疫调节蛋白及其应用。

技术介绍

[0002]细胞免疫是把双刃剑，免疫太弱会使机体更容易感染病原微生物，而免疫太强会导致免疫细胞疯狂地攻击发炎部位周边的细胞、组织、器官，引起免疫过激反应，造成对自身的损害，从而引发“细胞因子风暴”。
[0003]研究发现，IL
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18mRNA在多种细胞(单核细胞、血管平滑肌细胞及内皮细胞等)中表达，并在含有这些细胞的器官及组织(肝、肾、骨骼肌等)中可检测到IL
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18mRNA的表达。IL
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18具有多种有效的生物学功能，可通过诱导T细胞及自然杀伤细胞产生IFN
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γ的作用，在抗感染、免疫调节、抗肿瘤及慢性炎性疾病的发生发展中扮演着重要角色。
[0004]目前，在发生结肠炎的患者中，干扰素
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γ可以促进炎症并加剧肠道内的炎症反应，从而加重沙门氏菌引起的结肠炎，细胞免疫可以加重疾病的严重程度，此时应用本专利技术提供的蛋白可降低干扰素
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γ的分泌，降低炎症反应。研究表明，IL
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18与重组IL
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18bp结合可通过干预关键炎症相关通路和杀伤细胞凋亡保护小鼠肝脏免受炎症损伤。
[0005]根据人类疾病发展与IL
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18BP的关系研究，具有调节免疫作用的IL
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18BP在猪的疾病康复过程中也具有良好应用前景，目前国内外对猪IL
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18BP的研究尚处于空白。
[0006]本专利技术提供的细胞免疫调节蛋白(pIL
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18BP
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X2)是通过基因工程方法从猪肺泡巨噬细胞(PAM)获得，其具有降低猪干扰素伽马(pIFN
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γ)分泌的作用。该蛋白能高亲和力与IL
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18结合并抑制IL
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18相关的生物学活性,从而降低其所参与的炎性反应，丰富了细胞免疫调节剂。并且，本专利技术提供的细胞免疫调节蛋白可在大肠杆菌大量表达制备便于纯化。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种新型的细胞免疫调节蛋白，丰富了细胞免疫调节剂，为临床上调节细胞免疫提供了帮助。
[0008]根据本专利技术实施例的第一方面，提供一种细胞免疫调节蛋白，所述细胞免疫调节蛋白为pIL
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18BP
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X2，且所述pIL
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18BP
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X2的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。
[0009]本专利技术的细胞免疫调节蛋白pIL
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18BP
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X2，全长190个氨基酸，理论分子量为21kDa，经证实，本专利技术的细胞免疫调节蛋白与已证明的细胞免疫调节蛋白同源性低，其为一种新型的可开发利用的免疫调节蛋白，丰富了细胞免疫调节剂。
[0010]根据本专利技术实施例的第二方面，提供一种细胞免疫调节剂，包括上述的细胞免疫调节蛋白，也理应属于本专利技术的保护范围。
[0011]根据本专利技术实施例的第三方面，提供一种上述细胞免疫调节蛋白的应用，所述细胞免疫调节蛋白在制备细胞免疫调节剂中的应用，也理应属于本专利技术的保护范围。
[0012]根据本专利技术实施例的第四方面，提供一种表达细胞免疫调节蛋白的基因，所述基因的碱基序列如SEQ IDNO.2所示。
[0013]本专利技术使用PCR方法克隆了表达细胞免疫调节蛋白的基因，该基因全长570bp，其DNA序列如SEQ IDNO.2所示。
[0014]根据本专利技术实施例的第五方面，提供一种制备上述基因的引物组合物，所述引物组合物包括pIL
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18BP
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X2
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F(EcoRI)和pIL
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18BP
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X2
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R(XhoI)；
[0015]优选地，所述pIL
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18BP
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X2
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F(EcoRI)的序列如SEQ IDNO.3所示，所述pIL
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18BP
‑
X2
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R(XhoI)的序列如SEQ IDNO.4所示。
[0016]根据本专利技术实施例的第六方面，提供一种重组表达载体，其包括上述的基因。
[0017]根据本专利技术实施例的第七方面，提供一种上述重组表达载体的制备方法，将所述基因插入到表达载体的限制性酶切位点之间，所述表达载体为pET
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28a。
[0018]本专利技术还提供了一种包括上述细胞免疫调节蛋白pIL
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18BP
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X2基因的重组表达载体的制备方法，具体为将本专利技术的细胞免疫调节蛋白pIL
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18BP
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X2基因插入到表达载体合适的限制性酶切位点之间，使其核苷酸序列可操作的与表达调控序列相连接，并且本专利技术的表达载体优选为pET
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28a。
[0019]作为本技术方案优选地，所述限制性酶切位点为pET
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28a上的EcoRI和XhoI，所得到的重组表达载体的重组大肠杆菌表达载体pET
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28a
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X2。
[0020]根据本专利技术实施例的第八方面，提供一种重组工程菌株，将上述的重组表达载体转化宿主细胞，得到重组工程菌株。
[0021]在本专利技术中宿主细胞优选为大肠杆菌BL21，得到的重组工程菌株为BL21(pET
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28a
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X2)。
[0022]根据本专利技术实施例的第九方面，提供一种上述细胞免疫调节蛋白的制备方法，使用权利要求9所述的重组工程菌株制备，具体包括：
[0023]1)将含pIL
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18BP
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X2基因的重组表达载体转化宿主细胞，得重组工程菌株；
[0024]2)培养重组工程菌株，诱导重组细胞免疫调节蛋白pIL
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18BP
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X2的表达；
[0025]3)回收并纯化所表达的细胞免疫调节蛋白pIL
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18BP
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X2。
[0026]本专利技术的细胞免疫调节蛋白，与现有技术相比，具有以下优点：
[0027]1、本专利技术从猪肺泡巨噬细胞(PAM)获得的细胞免疫调节蛋白pIL
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18BP
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X2在大肠杆菌表达系统中可实现高效表达，并且经NI柱纯化后可得到单一性蛋白；
[0028]2、本专利技术的细胞免疫调节蛋白具有降低猪干扰素伽马(pIFN
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γ)分泌的小分子蛋白质，可显著抑制pIFN
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γ的mRNA表达量，因此，其具有调节pIFN<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种细胞免疫调节蛋白，其特征在于，所述细胞免疫调节蛋白为pIL
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18BP
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X2，且所述pIL
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18BP
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X2的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.一种细胞免疫调节剂，其特征在于，包括权利要求1所述的细胞免疫调节蛋白。3.一种权利要求1所述细胞免疫调节蛋白的应用，其特征在于，所述细胞免疫调节蛋白在制备细胞免疫调节剂中的应用。4.一种表达权利要求1所述细胞免疫调节蛋白的基因，其特征在于，所述基因的碱基序列如SEQ ID NO.2所示。5.一种制备权利要求4所述基因的引物组合物，其特征在于，所述引物组合物包括pIL
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18BP
‑
X2
‑
F(EcoRI)和pIL
‑
18BP
‑
X2
‑
R(XhoI)；优选地，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：王凤雪，温永俊，赵洪哲，康斌，赵炳武，董鹏，张金龙，武玉梅，
申请(专利权)人：金河佑本生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：