一种肠多糖含量的检测方法技术

本发明专利技术属于分析检测技术领域，具体涉及一种肠多糖含量的检测方法。该方法以硫酸皮肤素作为对照品，甲苯胺蓝作为显色剂，通过分光光度法测定吸光度值，根据对照品和待测样品的吸光度值，结合对照品浓度，可以非常方便地计算得到肠多糖的含量；并且，该方法操作简单，结果准确、精密，不需要笨重且昂贵的仪器，检测周期大大缩短，非常适用于肠多糖片溶出度、血药浓度检测等的检测中，应用范围广。应用范围广。应用范围广。

【技术实现步骤摘要】
一种肠多糖含量的检测方法


[0001]本专利技术属于分析检测
更具体地，涉及一种肠多糖含量的检测方法。

技术介绍

[0002]肠多糖是从健康猪十二指肠中提取的黏多糖类物质，具有降低心肌耗氧量、缓和抗凝血、减少动脉粥样化斑块、消除心绞痛、心悸、胸闷气短等作用，主要用于高血脂、冠动脉粥样硬化心脏病的治疗，常用剂型为片剂。
[0003]肠多糖为黏多糖类物质，目前对该类物质含量的测定方法主要有分光光度法、荧光法、共振瑞丽散射法、毛细管电泳法。荧光法使用荧光试剂(吖啶橙、中性红等)与黏多糖相互作用，操作时需要避光、快速，对实验技术水平要求较高；共振瑞丽散射法和高效毛细管电泳法均需要使用昂贵的仪器设备，不利于方法的普及；因此，主要采用操作简便、结果准确有效的分光光度法对肠多糖含量进行检测。如国家药品标准WS
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10001
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(HD
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0814)
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2002提供了一种肠多糖含量检测方法，该方法以盐酸氨基葡萄糖作为对照品，将对照品或供试品用酸水解制成溶液后加入乙酰丙酮溶液，加热反应完全，迅速冷却停止反应，再加入无醛乙醇，60℃保温，加入二甲氨基苯甲醛、无醛乙醇、盐酸，60℃反应完全，迅速冷却停止反应，525nm波长处测定吸光度，计算肠多糖的含量。但是上述方法需要分为2个阶段进行，操作较为繁琐，一次实验需要时间约3小时，极大地限制了该方法的应用。

技术实现思路

[0004]本专利技术要解决的技术问题是克服现有肠多糖含量检测方法复杂繁琐或要求昂贵仪器，难以普及应用的缺陷和不足，提供一种操作简单、结果准确的肠多糖含量的检测方法。
[0005]本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：
[0006]一种肠多糖含量的检测方法，包括以下步骤：
[0007]S1、待测样品制备：以硫酸皮肤素作为对照品制备对照品溶液，制备肠多糖供试品溶液；
[0008]S2、显色反应：于待测样品中加入甲苯胺蓝充分反应，加入疏水有机溶剂充分混合后静置分层，得下层水层溶液；
[0009]S3、吸光度测定：将水层溶液在629～634nm波长处测定吸光度值，计算肠多糖含量。
[0010]本专利技术中，以硫酸皮肤素作为对照品，其与肠多糖的色谱出峰时间一致，可以用其作为对照品，表示出肠多糖的含量。与此同时，肠多糖在溶液中会解离成多个带负电荷的大阴离子团，可以与阳离子染料(如甲基红、亚甲蓝、甲苯胺蓝等)缔合形成大分子复合物，从而实现显色功能；但研究发现，甲基红、亚甲蓝的显色效果较差，且不稳定，无法形成稳定的显色大分子复合物，无法拟合得到符合要求的标准曲线，不能利用来测定肠多糖含量；特别是在肠多糖片溶出度检测过程中，需要用到较酸的反应体系，更不适用于甲基红、亚甲蓝等
显色体系。
[0011]优选地，步骤S3中，所述波长为632nm。
[0012]进一步地，步骤S1中，所述对照品溶液的浓度为0～14μg/ml。
[0013]更进一步地，步骤S2中，所述甲苯胺蓝的终浓度为12～25μg/ml。
[0014]进一步地，步骤S2中，所述甲苯胺蓝以甲苯胺蓝溶液的形式加入，所述甲苯胺蓝溶液用0～0.2％氯化钠溶液溶解制备得到。
[0015]更进一步地，步骤S2中，所述反应的时间为0.5～3分钟，充分混匀即可。
[0016]进一步地，步骤S2中，所述疏水有机溶剂选自2
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丁醇、正丁醇、四氯化碳、氯仿、乙酸乙酯、二氯甲烷、正戊烷、正己烷、正庚烷中的一种或多种。优选地，所述疏水有机溶剂选自正丁醇、氯仿、乙酸乙酯、二氯甲烷、正己烷中的一种或多种。
[0017]更进一步地，所述检测方法的反应体系pH为1.0～6.8。
[0018]进一步地，所述检测方法的检测限为0～29.80μg/ml。
[0019]本专利技术具有以下有益效果：
[0020]本专利技术以硫酸皮肤素作为对照品，甲苯胺蓝作为显色剂，通过分光光度法测定吸光度值，根据对照品和待测样品的吸光度值，结合对照品浓度，可以非常方便地计算得到肠多糖的含量；并且，该方法操作简单，结果准确、精密，不需要笨重且昂贵的仪器，检测周期大大缩短，非常适用于肠多糖片溶出度、血药浓度等的检测中，应用范围广。
附图说明
[0021]图1为实施例3肠多糖片溶出曲线图。
[0022]图2为实施例4肠多糖色谱图。
[0023]图3为实施例4硫酸皮肤素色谱图。
[0024]图4为实施例5硫酸皮肤素标准曲线溶液在pH3.8溶出介质中的波长扫描图；由上至下硫酸皮肤素浓度依次为0、1、3、6、10、14μg/ml。
具体实施方式
[0025]以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本专利技术，但实施例并不对本专利技术做任何形式的限定。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。
[0026]其中，肠多糖片(山东惠诺药业有限公司，批号161203，规格：10mg)、硫酸皮肤素对照品(欧洲药典标准品Y0001321，批号：3.0，10mg/ml)。
[0027]除非特别说明，以下实施例所用其余试剂和材料均为市购。
[0028]实施例1肠多糖片的含量测定
[0029]1、实验材料：
[0030]硫酸皮肤素对照品溶液：精密量取硫酸皮肤素对照品0.1ml，用水稀释至100.0ml。
[0031]0.005％甲苯胺蓝溶液：称取5mg甲苯胺蓝，加入100ml水溶解，即得。
[0032]供试品溶液制备：取10片肠多糖片(标示含肠多糖10mg/片)，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于肠多糖1mg)，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
[0033]2、实验方法：
[0034]精密量取供试品溶液2.5ml，精密加入0.005％甲苯胺蓝溶液2.5ml振荡混匀0.5～1分钟，再加入5.0ml正己烷，振摇1～2分钟使分层，取下层水相，以水为空白，照紫外
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可见分光光度法(2020年版《中国药典》四部通则0401)，在632nm的波长处测定吸光度。硫酸皮肤素对照品溶液同法测定。计算出本批次肠多糖的含量(以硫酸皮肤素计)。
[0035]3、实验结果：
[0036]表1肠多糖片的含量测定(以硫酸皮肤素计)
[0037][0038]实施例2肠多糖片的溶出度检测
[0039]1、实验材料：
[0040]溶出介质：称取醋酸钠0.67g，加入2mol/L醋酸溶液(量取冰醋酸114ml，加水稀释至1000ml)22.6ml，再加水溶解并稀释至1000ml，摇匀，得pH＝3.8的醋酸盐缓冲液。
[0041]硫酸皮肤素对照品溶液：精密量取硫酸皮肤素对照品0.1ml，用溶出介质稀释至100.0ml。
[0042]0.005％甲苯胺蓝溶液：称取5mg甲苯胺蓝，加入100m本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肠多糖含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、待测样品制备：以硫酸皮肤素作为对照品制备对照品溶液，制备肠多糖供试品溶液；S2、显色反应：于待测样品中加入甲苯胺蓝充分反应，加入疏水有机溶剂充分混合后静置分层，得下层水层溶液；S3、吸光度测定：将水层溶液在629～634nm波长处测定吸光度值，计算肠多糖含量。2.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，步骤S1中，所述对照品溶液的浓度为0～14μg/ml。3.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，步骤S2中，所述甲苯胺蓝的终浓度为12～25μg/ml。4.根据权利要求3所述检测方法，其特征在于，步骤S2中，所述甲苯胺蓝以甲苯胺蓝溶液的形式加入，所述甲苯胺蓝溶液用0～0.2％氯化钠溶液溶解制备得到。5.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋玉辉，梁蔚阳，刘佳玲，
申请(专利权)人：广东省药品检验所广东省药品质量研究所，广东省口岸药品检验所，
类型：发明
国别省市：