一种咖啡体胚培养基制造技术

本发明专利技术公开了一种咖啡体胚培养基。所述咖啡体胚培养基包括分化成熟培养基、萌发培养基；所述的分化成熟培养基以每升计算，其制备方法为：在WPM培养基母液加入2.26～4.52μmol的NAA、7.76～9.84μmol的6

【技术实现步骤摘要】
一种咖啡体胚培养基


[0001]本专利技术涉及植物组织培养技术，具体涉及一种用于改良咖啡体胚质量的咖啡体胚培养基。

技术介绍

[0002]咖啡为茜草科咖啡属多年生常绿灌木或小乔木，是世界三大饮料作物之一，其在全球的消耗量约比可可大三倍，比茶叶大四倍；且在国内市场上，随着东西方文化的相互渗透及人民生活水平的日益提高，国内的咖啡消费量增长至10多万吨/年，而生产量仅占消费量的20％，所以逐步发展优质咖啡种植业具有广阔的市场前景。
[0003]商业栽培的咖啡品种主要包括小粒种和中粒种。其中小粒种咖啡是自花授粉植物，优良株系可通过种子进行繁殖，但品种选育周期长，繁育效率低。中粒种咖啡为异花授粉植物，其后代变异性大。目前，咖啡优良的繁殖主要以扦插繁殖为主，而扦插繁殖不仅容易导致病毒迭代累积，而且插条材料只能选用未木栓化的直生嫩枝，且咖啡树单株直生枝数量较少，进而导致优良咖啡品种无法满足市场需求，因此迫切需要找到一种能快速、高效生产咖啡种苗的途径和方法。
[0004]植物组织培养是近几十年发展起来的一项无性繁殖技术，指从植物体分离出符合需要的组织、器官或细胞等，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
[0005]近年，虽然已有利用咖啡叶片通过间接体胚发生方式成功诱导产生胚性细胞的相关报道，但在诱导体胚成熟和萌发过程中存在的体胚畸形率高、萌发成苗率低等限制咖啡高效繁育再生植株的问题仍然存在。

技术实现思路

[0006]基于此，本专利技术的目的在于，提供一种咖啡体胚培养基，其具有在咖啡体胚成熟阶段降低体胚畸形率和提高体胚成熟率，并在咖啡体胚萌发成苗阶段提高体胚萌发率和体胚成苗率的优点。
[0007]本专利技术提供一种咖啡体胚培养基，包括分化成熟培养基和萌发培养基，其中：
[0008]所述的分化成熟培养基以每升计算，其制备方法为：在WPM培养基母液加入2.26～4.52μmol的NAA、7.76～9.84μmol的6
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BA、1.33～4.65μmol的GA3和30～90g的蔗糖后用水定容至一升，调节PH值为5.8～6.0后加入3～9g的卡拉胶；
[0009]所述的萌发培养基以每升计算，其制备方法为：在WPM培养基母液加入4.92～12.76μmol的KT和30g的蔗糖后用水定容至一升，调节PH值为5.8～6.0后加入0～3g的活性炭和3g的卡拉胶。
[0010]本专利技术中，所述NAA是1
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萘乙酸的简称；所述6
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BA是6
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苄氨基嘌呤的简称；所述GA3是赤霉素的简称；所述KT是6
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糠氨基嘌呤的简称。本专利技术中，所述WPM培养基是适用于木本植物的培养基，其配方为硝酸铵(NH4NO3)400mg/L、硝酸钙(Ca(NO3)2·
4H2O)556mg/L、磷酸二
氢钾(KH2PO4)170mg/L、七水合硫酸镁(MgSO4·
7H2O)370mg/L、硫酸钾(K2SO4)990mg/L、无水氯化钙(CaCl2)72.47mg/L、硫酸锰(MnSO4·
4H2O)22.3mg/L、七水合硫酸锌(ZnSO4·
7H2O)8.6mg/L、碘化钾(KI)0.83mg/L、硼酸(H3BO3)6.2mg/L、钼酸钠(NaMoO4·
2H2O)0.25mg/L、氯化钴(CoCl2·
6H2O)0.025mg/L、硫酸铜(CuSO4)0.025mg/L、乙二胺四乙酸二钠盐(Na2‑
EDTA)37.3mg/L、七水合硫酸亚铁(FeSO4·
7H2O)27.8mg/L、烟酸VB5 0.5mg/L、盐酸硫胺素VB1 0.1mg/L、盐酸吡哆醇VB6 0.5mg/L、甘氨酸2mg/L、肌醇100mg/L。
[0011]与现有技术相比，本专利技术所述的咖啡体胚培养基，通过在咖啡体胚分化成熟阶段调整培养基中蔗糖和卡拉胶的浓度对培养基的渗透压进行调控，达到降低体胚畸形率和提高体胚成熟率的目的，并通过在咖啡体胚萌发培养阶段调整吸附剂活性炭的浓度以提高体胚萌发率。
[0012]进一步地，所述分化成熟培养基以每升计算，其制备方法为：在WPM培养基母液加入4.52μmol的NAA、9.84μmol的6
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BA、4.65μmol的GA3和30～90g的蔗糖后用水定容至一升，调节PH值为5.8～6.0后加入3～9g的卡拉胶；所述的萌发培养基以每升计算，其制备方法为：在WPM培养基母液加入4.92μmol的KT和30g的蔗糖后用水定容至一升，调节PH值为5.8～6.0后加入0～3g的活性炭和3g的卡拉胶。
[0013]进一步地，所述分化成熟培养基中以每升计算，添加蔗糖的量优选为45～75g，更优选为60～75g/。
[0014]进一步地，所述分化成熟培养基中以每升计算，添加卡拉胶的量优选为6～9g，更优选为6g。
[0015]进一步地，所述萌发培养基中以每升计算，添加活性炭的量优选为1～3g，更优选为2～3g。
[0016]进一步地，所述咖啡体胚培养基还包括成苗培养基，所述的成苗培养基以每升计算，其制备方法为：在WPM培养基母液加入30g的蔗糖后用水定容至一升，调节PH值为5.8～6.0后加入0～3g的活性炭和3g的卡拉胶。
[0017]进一步地，所述成苗培养基中以每升计算，添加活性炭的量优选为1～3g，更优选为2～3g。
附图说明
[0018]为使本专利技术的技术方案更清楚明白，本专利技术提供如下附图说明：
[0019]图1为小粒种咖啡组织培养再生的不同阶段，其中a是作为外植体的小粒种咖啡叶片，b是初级愈伤组织诱导阶段，c为胚性愈伤组织诱导阶段，d是胚性愈伤组织悬浮培养阶段，e是体胚分化成熟阶段，f是体胚萌发阶段。
具体实施方式
[0020]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0021]基础实施例：
[0022]一种咖啡组织悬浮培养再生的方法，包括以下步骤：
[0023](1)咖啡体胚分化成熟培养
[0024]本实施例以小粒种咖啡叶片作为外植体材料，按常规方法诱导得到胚性愈伤组织后悬浮培养，并以悬浮细胞诱导分化出的球形胚作为本专利技术的起始材料。
[0025]以所述球形胚为材料，将其接种到分化成熟培养基上，置于25℃，光周期8/16h，光照强度20μmol
·
m
‑2s
‑1的条件下进行培养。
[0026]所述分化成熟培养基以每升计算，其制备方法为：在WPM培养基母液加入4.52μmol的NAA、9.84μmol的6
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BA、4.65μmol的GA3和30～90g的蔗糖后用水定容至一升，调节PH值为5.8后加入3～9g的卡拉胶本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种咖啡体胚培养基，包括分化成熟培养基、萌发培养基，其特征在于：所述的分化成熟培养基以每升计算，其制备方法为：在WPM培养基母液加入2.26～4.52μmol的NAA、7.76～9.84μmol的6
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BA、1.33～4.65μmol的GA3和30～90g的蔗糖后用水定容至一升，调节PH值为5.8～6.0后加入3～9g的卡拉胶；所述的萌发培养基以每升计算，其制备方法为：在WPM培养基母液加入4.92～12.76μmol的KT和30g的蔗糖后用水定容至一升，调节PH值为5.8～6.0后加入0～3g的活性炭和3g的卡拉胶。2.根据权利要求1所述的咖啡体胚培养基，其特征在于：所述的分化成熟培养基以每升计算，其制备方法为：在WPM培养基母液加入4.52μmol的NAA、9.84μmol的6
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BA、4.65μmol的GA3和30～90g的蔗糖后用水定容至一升，调节PH值为5.8～6.0后加入3～9g的卡拉胶；所...

【专利技术属性】
技术研发人员：张连娟，林亮，万阳，袁万立，张方圆，
申请(专利权)人：云南龙藏生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：