一种创制高萝卜硫苷含量芥蓝种质的方法技术

本发明专利技术公开了一种创制高萝卜硫苷含量芥蓝种质的方法，涉及农业育种领域；包括以下步骤：(1)母本的选育：中花芥蓝

【技术实现步骤摘要】
一种创制高萝卜硫苷含量芥蓝种质的方法


[0001]本专利技术涉及农业育种领域，特别是涉及一种创制高萝卜硫苷含量芥蓝种质的方法。

技术介绍

[0002]硫代葡萄糖苷(简称硫苷)是内源芥子酶水解产生的富含氮、硫的阴离子产物，是植物中一种重要的植物次生代谢物质，目前发现在植物中存在200多种硫苷，主要在十字花科植物中。
[0003]芥蓝是十字花科、芸薹属重要蔬菜之一，具有独特的风味，含有丰富的维生素C、矿物质和芥子油苷等，其中的有益硫苷具有抗氧化、防癌等功效，使得它逐渐成为研究的热点。萝卜硫苷4
‑
甲基亚磺酰基丁烯基硫苷是芥蓝中一种有益硫苷，其降解产物具有多种生物学功能，不仅是十字花科植物独特风味的主要来源，还是化学保护剂，能防止多种癌症发生的危险，同时也是植物防御体系的重要组成部分，对植物防御反应、预防和控制植物病虫害等都有非常重要的作用，因此，提高芥蓝中萝卜硫苷的含量，不仅能够增加芥蓝的风味，也能提高芥蓝的营养和保健功能。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种创制高萝卜硫苷含量芥蓝种质的方法，以解决上述现有技术存在的问题，本专利技术通过选择萝卜硫苷含量差异比较大的材料进行双列杂交培育出了高萝卜硫苷含量芥蓝种质。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0006]本专利技术提供一种创制高萝卜硫苷含量芥蓝种质的方法，包括以下步骤：
[0007](1)母本的选育：中花芥蓝
‑
2自交留种，进行纯化，经连续自交6代获得萝卜硫苷含量大于0.2μmol/g的自交系；
[0008](2)父本的选育：矮脚香菇
‑
2进行自交留种，每年都从中选择表现优良的单株自交留种，不断地进行自交纯化，经连续自交10代育成萝卜硫苷含量大于0.2μmol/g的自交系；
[0009](3)杂种一代的选育：以步骤(1)获得的自交系为母本，步骤(2)获得的自交系为父本进行杂交，获得杂种一代，即为所述高萝卜硫苷含量芥蓝种质。
[0010]本专利技术公开了以下技术效果：
[0011]本专利技术通过选择萝卜硫苷含量差异比较大的材料进行了双列杂交，以矮脚香菇
‑
2培育成的自交系为父本，中花芥蓝
‑
2培养出的自交系为母本，杂交出了高萝卜硫苷含量芥蓝种质，该种质的抗癌硫苷RAA含量得到了较大的提高，达到了3.18μmol/g FW。
附图说明
[0012]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施
例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0013]图1为亲本和杂交组合萝卜硫苷含量。
具体实施方式
[0014]现详细说明本专利技术的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本专利技术的限制，而应理解为是对本专利技术的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
[0015]应理解本专利技术中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本专利技术。另外，对于本专利技术中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本专利技术内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
[0016]除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本专利技术所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本专利技术仅描述了优选的方法和材料，但是在本专利技术的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
[0017]在不背离本专利技术的范围或精神的情况下，可对本专利技术说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本专利技术的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本专利技术说明书和实施例仅是示例性的。
[0018]关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
[0019]以下实施例中萝卜硫苷含量的检测方法为：
[0020]幼苗时期芥蓝播种于培养室，16小时光照，温度为23℃，8小时黑暗，温度为20℃，75％湿度，2天浇一次水。每个材料设三次重复，每个重复采收正常生长、株型差距不大、生长程度相同的植株30株，当幼苗生长到20天，长出两片真叶时采收，分别采收芥蓝的茎和真叶，用锡箔纸包装，放入液氮中，再放入
‑
80℃冰箱保存，真空冷冻干燥后研磨粉碎，测定其硫苷组分与含量。
[0021]取两个10mL离心管，各加入4mL 70％的甲醇，放入75℃水浴锅中预热，准确称取0.1g冻干样两份，迅速磨成粉末，分别装入上述预热两个离心管中，其中一个加入100μL 5mg
·
mL
‑1的苯甲基硫苷作为内标，在75℃的水浴锅中水浴20min，然后分别加入2mL浓度为0.4mol
·
L
‑1的乙酸钡。离心(4000r
·
min
‑1，10min)，离心完后取上清液，装至另一个离心管，沉淀物再用2mL 70％甲醇重复上述过程，合并上清液，即得提取液。取5mL提取液和500μL 0.5mg
·
mL
‑1硫酸酯酶液(Sigma
‑
Aldrich公司)，依次缓慢流经自制层析柱(填充500μL DEAE Sephadex A25，Amersham Biosciences公司)，室温下反应12h后用1.5mL超纯水洗脱。
[0022]取20μL洗脱液进行HPLC分析，Waters 2695高效液相色谱仪，Waters2489双通道紫外检测器，色谱柱为C18。流动相A：超纯水；B：色谱级乙腈。
[0023]以下实施例中，矮脚香菇
‑
2是从广东汕头购买的矮脚香菇自交10代育成的自交系；中花芥蓝
‑
2是中花芥蓝自交8代获得的自交系。
[0024]实施例1
[0025]创制高萝卜硫苷含量芥蓝种质的方法：
[0026](1)母本的选育
[0027]选择商品性好的芥蓝材料进行纯化，经连续自交6代并获得自交系，通过硫苷含量测定选择萝卜硫苷含量较高(>0.2μmol/g FW)的自交系。
[0028](2)父本的选育
[0029]选择性状优良(长势强，分枝性强)的单株进行自交留种，不断地进行自交纯化，经连续自交10代育成自交系，通过硫苷含量测定选择萝卜硫苷含量较高(>0.2μmol/g FW)的自交系作为父本。
[0030](3)杂种一代的选育...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种创制高萝卜硫苷含量芥蓝种质的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)母本的选育：中花芥蓝
‑
2自交留种，进行纯化，经连续自交6代获得萝卜硫苷含量大于0.2μmol/g的自交系；(2)父本的选育：矮脚香菇
‑
2进行自交留...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈如珠，李沛斯，李树喜，陈坤豪，陈长明，陈银霞，李佳超，黄思楠，
申请(专利权)人：广东和利农农业研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：