一种血清淀粉样蛋白A检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种血清淀粉样蛋白A检测试剂盒，包括R1试剂、R2试剂、稀释液和校准品，所述R1试剂包括缓冲液

【技术实现步骤摘要】
一种血清淀粉样蛋白A检测试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术涉及检测试剂盒
，具体涉及一种血清淀粉样蛋白A检测试剂盒及其制备方法。

技术介绍

[0002]血清淀粉样蛋白A(SAA)，分子量约12KD。血浆中SAA的主要功能：与血浆高密度脂蛋白结合，转运胆固醇到肝脏代谢；募集免疫细胞至炎症部位；诱导降解细胞外基质的酶表达；SAA降解产物能以淀粉样蛋白A原纤维的方式沉淀在不同器官中，参与慢性炎症病理组织学改变。急性时相反应时，在IL
‑
1、IL
‑
6和肿瘤坏死因子等细胞因子刺激下，肝细胞、被激活的巨噬细胞、成纤维细胞乃至脂肪细胞都可大量表达SAA，血浆浓度可升高10
‑
1000倍，而其半衰竭只有50分钟左右，因此是一种灵敏的正性急性时相反应蛋白。
[0003]作为急性时相反蛋白，SAA和C
‑
反应蛋白一样可用于：了解机体急性时相反应程度；辅助鉴别细菌性和除腺病毒外的其他病毒性感染，评估抗菌药疗效和停药指征；早期发现器官移植后排斥反应等；由于前述急性时相反应中SAA大幅度升高及短半衰期等特点，有研究认为SAA和C
‑
反应蛋白更敏感。
[0004]自1974年发现至今，许多检测方法已应用于检测患者的血清SAA。目前，用于临床血清SAA检测的方法主要包括放射性免疫测定法(RIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、乳胶免疫比浊法等。放射性免疫测定法具有分析灵敏度高、特异性好等优点，但同时存在放射线辐射等污染问题，限制临床大面积使用；ELISA法具有定量、高敏感性等优点，但此方法操作复杂，用时较长，不适用于自动化批量检测；乳胶免疫比浊法具有操作简便、快速、定量准确、敏感度高等优点，可满足门急诊等需要，在临床研究中应用越来越广泛。但是，现有市售血清淀粉样蛋白A测定试剂盒多存在试剂不稳定，线性范围窄，存在HOOK效应等缺陷，造成部分高值样本检测出现假阴性，影响检测结果的准确性。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是解决上述的不足，提供一种血清淀粉样蛋白A检测试剂盒及其制备方法。
[0006]为了解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案：一种血清淀粉样蛋白A检测试剂盒，包括R1试剂、R2试剂、稀释液和校准品，所述R1试剂包括缓冲液
①
、促凝剂、稳定剂
①
、抑制剂和防腐剂；所述R2试剂包括人重组血清淀粉样蛋白A抗体胶乳颗粒、缓冲液
②
、稳定剂
②
和防腐剂；所述稀释液为添加稳定剂
③
和防腐剂的生理盐水；所述校准品包括抗原和稀释液。
[0007]进一步的，所述抑制剂包括质量体积百分比浓度为0.1％
‑
1％的氯化胆碱、0.1％
‑
1％的氯化钙和0.1％
‑
1％的甘油。
[0008]进一步的，所述稳定剂
①
包括质量体积百分比浓度为0.8％
‑
0.9％的氯化钠和0.5％
‑
3％的甘露醇。
[0009]进一步的，所述R1试剂中的缓冲液
①
为浓度为50
‑
100mmol/L的磷酸盐缓冲液、MES、HEPES、MOPS或PIPES中的任意一种，优选为磷酸盐缓冲液；
[0010]所述促凝剂为质量体积百分比浓度为1.5％
‑
4.0％的聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、聚乙二醇10000、聚乙二醇20000或PVC中的任意一种，优选为聚乙二醇8000；
[0011]所述防腐剂为质量体积百分比浓度为0.1％的Proclin300、苯甲酸钠、叠氮钠、硫柳汞或庆大霉素中的任意一种，优选为Proclin300。
[0012]进一步的，所述稳定剂
②
包括质量体积百分比浓度为0.9％
‑
8％的氯化钠、1％
‑
5％的海藻糖、1％
‑
4％的牛血清白蛋白和1％
‑
4％的甘氨酸。
[0013]进一步的，所述R2试剂中的人重组血清淀粉样蛋白A抗体胶乳颗粒为鼠抗人血清淀粉样蛋白A单克隆抗体与平均粒径为100
‑
120nm的羧化改性聚苯乙烯胶乳颗粒通过化学交联法致敏得到；
[0014]所述缓冲液
②
为浓度为10
‑
100mmol/L的4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液、MES、Tris或PBS中的任意一种，优选为4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液；
[0015]所述防腐剂为质量体积百分比浓度为0.1％的Proclin300、苯甲酸钠、叠氮钠、硫柳汞或庆大霉素中的任意一种，优选为Proclin300。
[0016]进一步的，所述R2试剂中的人重组血清淀粉样蛋白A抗体胶乳颗粒是由鼠抗人血清淀粉样蛋白A单克隆抗体与平均粒径为100
‑
120nm的羧化改性聚苯乙烯胶乳颗粒在4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液中通过化学交联法致敏，再经离心、洗涤后，在含有稳定剂
②
和防腐剂的4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液中分散而成。
[0017]进一步的，所述稀释液中的稳定剂
③
包括质量体积百分比浓度为1％
‑
3％的牛血清白蛋白和3％
‑
8％的甘露醇；
[0018]防腐剂为质量体积百分比浓度0.1％的Proclin300、苯甲酸钠、叠氮钠、硫柳汞或庆大霉素中的任意一种，优选为叠氮钠。
[0019]进一步的，所述校准品包括6个通过采用所述稀释液稀释后的不同浓度水平的市售人重组血清淀粉样蛋白A。
[0020]一种血清淀粉样蛋白A检测试剂盒的制备方法，用于制备上述的血清淀粉样蛋白A检测试剂盒，包括如下步骤：
[0021]步骤1，R1试剂配制：取用缓冲液
①
，在缓冲液
①
内分别加入促凝剂、稳定剂
①
、抑制剂和防腐剂，之后采用氢氧化钠调节混合后的溶液pH值为6.5
‑
8.5；
[0022]步骤2，R2试剂配制：
[0023]a.取用聚苯乙烯微球颗粒，对聚苯乙烯微球颗粒进行活化，得到活化聚苯乙烯微球溶液；
[0024]b.将鼠抗人血清淀粉样蛋白A单克隆抗体用缓冲液
②
稀释得到单抗溶液；
[0025]c.将单抗溶液匀速加入活化聚苯乙烯微球溶液中，混匀后置于磁力水浴箱中搅拌偶联；
[0026]d.偶联结束后，对偶联后的溶液离心去上清，用缓冲液
②
洗涤1次，再用缓冲液
②
将洗涤后的溶液分散成乳白色悬液；
[0027]e.对乳白色悬液匀质2次，在匀质分散完成的溶液中加入部分稳定剂
②
和防腐本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种血清淀粉样蛋白A检测试剂盒，其特征在于：包括R1试剂、R2试剂、稀释液和校准品，所述R1试剂包括缓冲液
①
、促凝剂、稳定剂
①
、抑制剂和防腐剂；所述R2试剂包括人重组血清淀粉样蛋白A抗体胶乳颗粒、缓冲液
②
、稳定剂
②
和防腐剂；所述稀释液为添加稳定剂
③
和防腐剂的生理盐水；所述校准品包括抗原和稀释液。2.如权利要求1所述的血清淀粉样蛋白A检测试剂盒，其特征在于：所述抑制剂包括质量体积百分比浓度为0.1％
‑
1％的氯化胆碱、0.1％
‑
1％的氯化钙和0.1％
‑
1％的甘油。3.如权利要求1或2所述的血清淀粉样蛋白A检测试剂盒，其特征在于：所述稳定剂
①
包括质量体积百分比浓度为0.8％
‑
0.9％的氯化钠和0.5％
‑
3％的甘露醇。4.如权利要求1或2所述的血清淀粉样蛋白A检测试剂盒，其特征在于：所述R1试剂中的缓冲液
①
为浓度为50
‑
100mmol/L的磷酸盐缓冲液、MES、HEPES、MOPS或PIPES中的任意一种；所述促凝剂为质量体积百分比浓度为1.5％
‑
4.0％的聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、聚乙二醇10000、聚乙二醇20000或PVC中的任意一种；所述防腐剂为质量体积百分比浓度为0.1％的Proclin300、苯甲酸钠、叠氮钠、硫柳汞或庆大霉素中的任意一种。5.如权利要求1或2所述的血清淀粉样蛋白A检测试剂盒，其特征在于：所述稳定剂
②
包括质量体积百分比浓度为0.9％
‑
8％的氯化钠、1％
‑
5％的海藻糖、1％
‑
4％的牛血清白蛋白和1％
‑
4％的甘氨酸。6.如权利要求5所述的血清淀粉样蛋白A检测试剂盒，其特征在于：所述R2试剂中的人重组血清淀粉样蛋白A抗体胶乳颗粒为鼠抗人血清淀粉样蛋白A单克隆抗体与平均粒径为100
‑
120nm的羧化改性聚苯乙烯胶乳颗粒通过化学交联法致敏得到；所述缓冲液
②
为浓度为10
‑
100mmol/L的4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液、MES、Tris或PBS中的任意一种；所述防腐剂为质量体积百分比浓度为0.1％的Pr...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱雨，李良，梁忠柱，王浩，张金东，
申请(专利权)人：安徽伊普诺康生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：