M1联合M2型巨噬细胞因子作为生物标志物在类风湿关节炎诊断和治疗监测中的用途制造技术

本发明专利技术涉及一种M1联合M2型巨噬细胞因子作为生物标志物在类风湿关节炎诊断和治疗监测中的用途。解决现有技术中缺乏利用M1联合M2型巨噬细胞因子作为生物标志物进行类风湿关节炎的特异性诊断、治疗监测以及炎症程度评估等问题。本发明专利技术通过实验证实了M1型巨噬细胞因子IL

【技术实现步骤摘要】
M1联合M2型巨噬细胞因子作为生物标志物在类风湿关节炎诊断和治疗监测中的用途


[0001]本专利技术属于风湿免疫病分子生物学领域，具体涉及一种M1联合M2型巨噬细胞因子作为生物标志物在类风湿关节炎诊断和治疗监测中的用途。

技术介绍

[0002]类风湿关节炎(RA)是以关节滑膜炎、骨破坏为特征的自身免疫性疾病。RA炎症反应加剧关节和滑囊破坏而致关节畸形和功能丧失。RA“炎症极化”可分泌大量促炎性细胞因子、趋化因子，激活成纤维细胞和破骨细胞，加速机体炎症反应，造成关节破坏。巨噬细胞能生成多种促炎性细胞因子和趋化因子参与RA致病过程。巨噬细胞在不同因素诱导下呈现不同的表型、功能，即M1型和M2型巨噬细胞，这就是巨噬细胞分泌“炎症极化”现象。M1型巨噬细胞可分泌多种促炎性细胞因子，表达CD86等分子，促进炎症的发展。M2型巨噬细胞高表达抗炎细胞因子，表达CD 163等分子，发挥抗炎作用。有效干预巨噬细胞M1型转为M2型，使M1/M2恢复动态平衡状态，有利于促进RA炎症消退及滑膜关节组织修复。
[0003]在外周血等体液样本中筛选出在类风湿关节炎中异常表达的M1/M2促炎性细胞因子作为生物标志物，并研制相应的辅助诊断试剂盒，将有力推动类风湿关节炎的诊断、治疗以及监测等应用领域，具有极高的临床应用价值。
[0004]另外，目前对于巨噬细胞因子的检测主要采用的是酶联免疫吸附法(ELISA)，但ELISA法诸主要存在如下缺点：(1)试验中的一抗都得用酶标记，但不是每种抗体都适合做标记，费用相对提高。(2)交互反应发生的机率较高。(3)抗原一定得拥有两个以上的抗体结合部位。(4)整体的敏感性和专一性都较差。(5)不能测定抗原量。(6)重复性差。(7)受自身抗体、嗜异性抗体等干扰，易出现假阳性。(8)不论仪器和手工操作，干扰因素较多，影响最大的是温度和时间等缺点。故寻求更好的检测方法尤为重要。

技术实现思路

[0005]针对目前类风湿关节炎缺乏诊断标志物等缺点，本专利技术提供了一种M1联合M2型巨噬细胞因子作为生物标志物在类风湿关节炎诊断和治疗监测中的用途，用于解决现有技术中缺乏利用M1联合M2型巨噬细胞因子作为生物标志物进行类风湿关节炎的特异性诊断、治疗监测以及炎症程度评估等问题。
[0006]为了实现该目的，首先，本专利技术提供了一种M1联合M2型巨噬细胞因子作为生物标志物在制备或筛选类风湿关节炎诊断试剂中的用途，所述试剂用于测定体液样品中M1型巨噬细胞因子IL
‑
1R1、IFN
‑
γ、iNOS2以及M2型巨噬细胞因子MRC1的表达量，所述体液样品选自血清、血浆、血液中的至少一种，所述体液样品中M1型巨噬细胞因子IL
‑
1R1、IFN
‑
γ、iNOS2的表达量与类风湿关节炎的严重程度正相关，M2型巨噬细胞因子MRC1的表达量与类风湿关节炎的严重程度负相关。
[0007]其次，本专利技术还提供了一种检测M1和M2型巨噬细胞因子存在的试剂在制备用于诊
断、预后评估和治疗监测类风湿关节炎的药剂中的用途，所述试剂用于测定体液样品中M1型巨噬细胞因子IL
‑
1R1、IFN
‑
γ、iNOS2以及M2型巨噬细胞因子MRC1的表达量，所述体液样品选自血清、血浆、血液中的至少一种，所述体液样品中M1型巨噬细胞因子IL
‑
1R1、IFN
‑
γ、iNOS2的表达量与类风湿关节炎的严重程度正相关，M2型巨噬细胞因子MRC1的表达量与类风湿关节炎的严重程度负相关。
[0008]在本专利技术的一些实施例中，所述试剂通过多因子蛋白定量芯片检测技术检测RA、AS患者血清M1型巨噬细胞分泌的特点炎症因子标志物。
[0009]在本专利技术的一些实施例中，所述药剂用于诊断或监测类风湿关节炎的存在和/或过程和/或严重程度和/或预后。
[0010]与现有技术相比，本专利技术的有益效果表现在：
[0011]1、本专利技术所提出的M1型巨噬细胞因子IL
‑
1R1、IFN
‑
γ、iNOS2，联合M2型巨噬细胞因子MRC1在制备或筛选类风湿关节炎诊断试剂中的用途，一方面，本专利技术通过实验证实了M1型巨噬细胞因子IL
‑
1R1、IFN
‑
γ、iNOS2，联合M2型巨噬细胞因子MRC1可以作为类风湿关节炎的诊断指标，使诊断结果更为准确；另一方面，本专利技术还提供了M1型巨噬细胞因子IL
‑
1R1、IFN
‑
γ、iNOS2，联合M2型巨噬细胞因子MRC1可以作为评估类风湿关节炎炎症严重程度的一个指标。从而更好的用于类风湿关节炎的诊断、预后评估和治疗监测。
[0012]2、本专利技术首次将多因子蛋白定量芯片检测技术应用于患者血清巨噬细胞因子生物标志物的检测，该检测技术具有以下优点：(1)高通量性：一个样品一次可以检测多种因子，同时快速的发现多个生物标志物，且几小时内可以完成上百个样品的检测。(2)样品处理简单：可以直接用粗生物样品(血清、血浆、尿、体液等)进行分析，只需经过离心处理即可；可适用比较不纯的样本，而且数据再现性很高。(3)样品用量少：可以低至10μl
‑
100μl样品检测。(4)特异性和灵敏度高：抗体芯片特异性高，可鉴定未知抗原/蛋白质，以减少测定蛋白质序列的工作量，且蛋白芯片的高灵敏度可以发现低丰度蛋白质及生物标志物。(5)可测定疏水蛋白质，与“双向电泳加质谱”相比，除了有相似功能外，并可增加测定疏水蛋白质的表达和功能。(6)集成性：在同一系统中集发现和检测为一体。(7)可定量检测：可同时绘制多种因子的标准曲线，故可定量检测生物标记物，但一般飞行质谱不用于定量分析。(8)代替和互补传统检测方法：利用抗体芯片，可替代Western Blot；利用定量抗体芯片，可代替ELISA定量检测；抗体芯片互补流式细胞仪不足的功能，如将细胞溶解，可测定细胞内的抗原，而且灵敏度远高于流式细胞仪。(9)性能价格比高：利用定量芯片一次性检测大量目标因子，平均定量每个因子所需的费用远比ELISA便宜，降低RA、AS患者费用。(10)准确、高效、安全可靠优点。
附图说明
[0013]图1为标曲稀释步骤示意图。
[0014]图2为M1型细胞因子IL
‑
1R1在类风湿关节炎RA中的表达量检测结果。
[0015]图3为M1型细胞因子IFN
‑
γ在类风湿关节炎RA中的表达量检测结果。
[0016]图4为M1型细胞因子iNOS2在类风湿关节炎RA中的表达量检测结果。
[0017]图5为M2型细胞因子MRC1在类风湿关节炎RA中的表达量检测结果。
[0018]图6为M1型细胞因子IL
‑
1R1与类风湿关节炎RA的疾病活动性指标相关性检测结
果。
[0019]图7为M1型细胞因子IFN
‑
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种M1联合M2型巨噬细胞因子作为生物标志物在制备或筛选类风湿关节炎诊断试剂中的用途，其特征在于，所述试剂用于测定体液样品中M1型巨噬细胞因子IL
‑
1R1、IFN
‑
γ、iNOS2以及M2型巨噬细胞因子MRC1的表达量，所述体液样品选自血清、血浆、血液中的至少一种，所述体液样品中M1型巨噬细胞因子IL
‑
1R1、IFN
‑
γ、iNOS2的表达量与类风湿关节炎的严重程度正相关，M2型巨噬细胞因子MRC1的表达量与类风湿关节炎的严重程度负相关。2.一种检测M1和M2型巨噬细胞因子存在的试剂在制备用于诊断、预后评估和治...

【专利技术属性】
技术研发人员：万磊，刘健，黄传兵，王坤，姜辉，
申请(专利权)人：安徽中医药大学第一附属医院安徽省中医院，
类型：发明
国别省市：