一种新型冠状病毒抗体检测方法及其试剂盒技术

本申请公开了一种新型冠状病毒抗体检测方法及其试剂盒，属于生物医学检测技术领域，其中，一种新型冠状病毒中和抗体的检测方法，其利用胶体金免疫层析竞争法，胶体金免疫层析竞争法是将ACE2蛋白标记上胶体金，利用中和抗体与胶体金标记的ACE2蛋白竞争结合包被在检测线的COVID

【技术实现步骤摘要】
一种新型冠状病毒抗体检测方法及其试剂盒


[0001]本申请涉及生物医学检测
，尤其是涉及一种新型冠状病毒lgM/lgG/中和抗体三联检试剂盒及其制备方法。

技术介绍

[0002]冠状病毒是一类具有囊膜包被的正链单链RNA病毒，呈球形或椭球形，表面上规则排列的囊状胶原纤维突，其能够侵染包括人类在内的多种哺乳动物，进而引起感冒、中东呼吸综合征或严重急性呼吸综合征等较严重的疾病，可分为α、β、γ以及δ四个属。
[0003]新型冠状病毒(COVID
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19)为β冠状病毒，主要结构由核衣壳和包膜构成，前者的功能主要与RNA结合形成螺旋状结构，后者包括三种糖蛋白的突起，与病毒的装配和芽生有关。COVID
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19主要通过呼吸道飞沫和接触传播，可以造成人与人之间相互传播；当COVID
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19到达呼吸道内与细胞的受体蛋白互相识别、结合，当COVID
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19入侵到细胞内后会进行定植和破坏细胞的结构，并且引起人体的免疫反应。
[0004]免疫反应是指机体对外源物质或变异的自体成分做出的防御反应，其可分为体液免疫反应和细胞免疫反应。当外源物质入侵机体后，刺激B细胞分化成浆细胞，并由浆细胞分泌能与外源物质发生特异性结合反应的抗体。
[0005]抗体是具有生物学活性的免疫球蛋白，能够外源物质结合，协同免疫细胞清除或杀灭病原体，按照理化性质和生物学功能可将其分为IgM、IgG、IgA、IgE、IgD五类；其中，IgM由机体初次免疫应答产生，产生速度快，能够对机体起临时保护作用，其主要提示现阶段被感染的状态，常作为早期感染的指标，IgG是血液和组织液中主要的免疫球蛋白，与抗原亲和力高且维持的时间较长，可作为感染和既往感染的指标；并且，在上述的五类抗体中有少部分抗体被称为中和抗体，中和抗体具有抗病毒活性。
[0006]COVID
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19感染的血清学检测技术包括特异性抗体(IgG和IgM)检测以及中和抗体检测，为了确定机体中抗体的是由病毒感染还是疫苗接种产生的，需要对IgG、IgM以及中和抗体这三种抗体进行检测。目前，IgG以及IgM可通过试纸条进行快速检测；但是，中和抗体主要通过真病毒或假病毒进行体外中和实验，检测技术水平要求高，且检测时间长，检测效率低。

技术实现思路

[0007]为了对机体内新型冠状病毒IgG、IgM以及中和抗体同时进行快速检测，提高检测灵敏度及准确性，本申请提供一种新型冠状病毒抗体检测方法及其试剂盒。
[0008]第一方面，本申请提供的一种新型冠状病毒中和抗体的检测方法采用如下的技术方案：一种新型冠状病毒中和抗体的检测方法，所述方法利用胶体金免疫层析竞争法，所述胶体金免疫层析竞争法是将ACE2蛋白标记上胶体金，利用中和抗体与胶体金标记的ACE2蛋白竞争结合包被在检测线的COVID
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19重组RBD蛋白。
[0009]通过采用上述技术方案，中和抗体是由适应性免疫应答细胞分泌的一种可溶性蛋白；在COVID
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19病毒入侵人体后，浆细胞合成分泌中和抗体，中和抗体识别COVID
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19病毒表面的RBD蛋白并与其结合，阻断病毒与宿主细胞表面的特异性受体人ACE2结合，进而阻止病毒继续入侵人体；将ACE2蛋白上标记上胶体金，中和抗体可与ACE2蛋白竞争结合COVID
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19病毒上的RBD蛋白，若检测样品中含有COVID
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19中和抗体会阻断ACE2蛋白与RBD蛋白结合，显色结果较浅甚至无，便可实现对COVID
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19中和抗体的快速检测，提高了检测效率；并且，RBD蛋白与ACE2蛋白结合的特异性强，使得阴性检测结果的显色稳定，且中和抗体与RBD蛋白的亲和力大于ACE2蛋白与RBD蛋白的亲和力，在中和抗体的浓度较小的情况下，中和抗体与RBD蛋白的结合仍具有优势，提高了检测的灵敏度。
[0010]第二方面，本申请提供的一种新型冠状病毒IgM/IgG/中和抗体三联检试剂盒采用如下的技术方案：一种新型冠状病毒IgM/IgG/中和抗体三联检试剂盒，所述试剂盒利用如上述所述的一种新型冠状病毒中和抗体检测方法对新型冠状病毒中和抗体进行检测。
[0011]优选的，包括试纸卡，所述试纸卡包括第一检测部，所述第一检测部包括第一结合垫和第一检测垫，所述第一结合垫上包被有胶体金标记的ACE2蛋白，所述第一检测垫上设置有检测T线，所述检测T线上包被有COVID
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19重组RBD蛋白。
[0012]优选的，所述试纸卡还包括第二检测部，所述第二检测部包括第二结合垫和第二检测垫，所述第二结合垫上包被有胶体金标记COVID
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19重组RBD蛋白，所述第二检测垫上设置有检测M线和检测G线，所述检测M线上包被有鼠抗人IgM单克隆抗体，所述检测G线上包被有鼠抗人IgG单克隆抗体。
[0013]优选的，所述第一结合垫和第二结合垫上均包被有胶体金标记的DNP分子，所述DNP分子上交联有BSA，所述第一检测垫和第二检测垫上均设置有质控C线，所述质控C线上包被有鼠抗DNP单克隆抗体。
[0014]通过采用上述技术方案，使用第一检测部对COVID
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19中和抗体进行检测，若样品在中不含有中和抗体时，胶体金标记的ACE2蛋白与检测T线包被的COVID
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19重组RBD蛋白结合，使得检测T线显色，若样品中含有COVID
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19中和抗体，COVID
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19中和抗体会与COVID
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19重组RBD蛋白结合，使得检测T线显色减弱甚至无，通过与质控C线的对比，便可对检测结果进行判断，实现对样品中的COVID
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19中和抗体进行快速定性检测的效果；使用第二检测部对COVID
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19的IgG/IgM进行检测，若样品中含有IgG/IgM，IgG/IgM在第二结合垫上与胶体金标记的COVID
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19重组RBD蛋白结合形成免疫复合物，接着上述免疫复合物继续移动，到达检测G线/检测M线，与鼠抗人IgG单克隆抗体/鼠抗人IgM单克隆抗体结合，检测G线/检测M线显色，通过第一检测部和第二检测部的配合，实现对机体内新型冠状病毒IgG、IgM以及中和抗体进行快速检测；在免疫层析检测中，质控C线系统常用的抗鼠或者抗兔的二抗由于样品中可能含有嗜异性抗体，导致质控C线的信号不稳定，对显色结果的判定造成影响，而DNP是一种小分子化合物，不在人体的代谢中产生，不与样品中的干扰物质如嗜异性抗体、人类抗动物抗体等产生非特异性反应，交联了BSA的DNP分子与鼠抗DNP单克隆抗体可在免疫层析法中作为独立质控系统使用，能明显提高质控C线特异性。
[0015]优选的，所述胶体金标记的ACE2蛋白按0.24
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3.0μg/cm的包被量固定于第一结合垫上，所述COVID...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新型冠状病毒中和抗体的检测方法，其特征在于，所述方法利用胶体金免疫层析竞争法，所述胶体金免疫层析竞争法是将ACE2蛋白标记上胶体金，利用中和抗体与胶体金标记的ACE2蛋白竞争结合包被在检测线的COVID
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19重组RBD蛋白。2.一种新型冠状病毒IgM/IgG/中和抗体三联检试剂盒，其特征在于，所述试剂盒利用如权利要求1所述的一种新型冠状病毒中和抗体检测方法对新型冠状病毒中和抗体进行检测。3.根据权利要求2所述的一种新型冠状病毒IgM/IgG/中和抗体三联检试剂盒，包括试纸卡，所述试纸卡包括第一检测部，所述第一检测部包括第一结合垫和第一检测垫，所述第一结合垫上包被有胶体金标记的ACE2蛋白，所述第一检测垫上设置有检测T线，所述检测T线上包被有COVID
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19重组RBD蛋白。4.根据权利要求3所述的一种新型冠状病毒IgM/IgG/中和抗体三联检试剂盒，其特征在于，所述试纸卡还包括第二检测部，所述第二检测部包括第二结合垫和第二检测垫，所述第二结合垫上包被有胶体金标记COVID
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19重组RBD蛋白，所述第二检测垫上设置有检测M线和检测G线，所述检测M线上包被有鼠抗人IgM单克隆抗体，所述检测G线上包被有鼠抗人IgG单克隆抗体。5.根据权利要求4所述的一种新型冠状病毒IgM/IgG/中和抗体三联检试剂盒，其特征在于，所述第一结合垫和第二结合垫上均包被有胶体金标记的DNP分子，所述DNP分子上交联有BSA，所述第一检测垫和第二检测垫上均设置有质控C线，所述质控C线上包被有鼠抗DNP单克隆抗体。6.根据权利要求4所述的一种新型冠状病毒IgM/IgG/中和抗体三联检试剂盒，其特征在于，所述胶体金标记的ACE2蛋白按0.24
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3.0μg/cm...

【专利技术属性】
技术研发人员：伍波，李超辉，吴智广，邹国英，李勇，王秋阳，南洋，董晓宁，
申请(专利权)人：天津鸿宇泰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：