工程化的T细胞及其产生方法技术

提供了包含功能性外源受体的经修饰的T细胞。功能性外源受体包含：(a)胞外配体结合结构域，(b)跨膜结构域，和(c)包含嵌合信号传导结构域(CMSD)的胞内信号传导结构域(ISD)，其中CMSD包含多个任选地通过一个或多个接头连接的基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)。还提供了载体、其制造方法、药物组合物、药盒及其治疗方法。疗方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】工程化的T细胞及其产生方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年8月28日提交的国际专利申请第PCT/CN2019/103041号和2019年12月16日提交的PCT/CN2019/125681的优先权权益，所述国际专利申请中的每一个的内容通过引用以其整体并入本文。
[0003]以ASCII文本文件提交序列表
[0004]以下以ASCII文本文件提交的内容通过引用以其整体并入本文：序列表的计算机可读形式(CRF)(文件名：761422002042ITAMSEQLIST.TXT，记录日期：2020年8月28日，大小：221KB)。


[0005]本申请涉及包含嵌合信号传导结构域(CMSD)的功能性外源受体和含有这种功能性外源受体的T细胞。
技术背景
[0006]CAR
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T细胞疗法利用携带特异性识别靶抗原(例如，肿瘤抗原)的工程化受体的遗传修饰的T细胞将T细胞引导至肿瘤部位。其在治疗血液癌症和多发性骨髓瘤(MM)方面显示出有希望的结果。CAR通常包含胞外配体结合结构域、跨膜(TM)域和胞内信号传导结构域(ISD)。胞外配体结合结构域可包含靶向所需靶抗原(例如，肿瘤抗原)的抗原结合片段(例如，单链可变片段，scFv)。在与靶抗原结合时，CAR可以活化T细胞以以抗原依赖性方式启动ISD介导的特异性抗靶标(例如，肿瘤)应答(例如，通过CD3ζISD的激活信号，模拟TCR信号传递)，而不受对靶抗原特异性的主要组织相容性复合物(MHC)的可用性的限制。<br/>[0007]基于免疫受体酪氨酸的活化基序(ITAM)存在于许多细胞表面受体或与它们相关的亚基的胞质结构域中，并在信号传递中发挥重要的调节作用。例如，在TCR连接时，TCR复合物的ITAM的磷酸化会产生对接位点，以募集启动信号传导级联所必需的分子，从而导致T细胞活化和分化。ITAM的功能不限于T细胞，作为B细胞受体(BCR、CD79a/Igα和CD79b/Igβ)、选定的天然杀伤(NK)细胞受体(DAP
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12)和特定FcεR的组分，都需要ITAM来传播胞内信号。迄令为止，大多数临床研究已使用CD3ζ作为CAR的主要ISD，但已经报道了其作为信号传导结构域的局限性。表达分析鉴定了与炎症、细胞因子和趋化因子活性相关的基因集组的显著上调和包含完整CD3ζISD的第二代抗CD19 CAR的趋化因子活性，并且还观察到增强的效应子分化(Feucht，J等人，2019)。CD3ζISD也被发现促进成熟T细胞凋亡(Combadiere，B等人，1996)。此外，CAR
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T免疫疗法相关的细胞因子释放综合征(CRS)在一些情况下可能会限制其临床实施。
[0008]由于个体差异，自体CAR
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T或TCR
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T疗法(使用患者自身的T细胞)在制造和标准化方面存在重大挑战，制造和治疗成本极其昂贵。此外，癌症患者通常免疫功能较低，淋巴细胞数量减少，免疫活性较低，体外扩增困难。通用同种异体CAR
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T或TCR
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T疗法被认为是理想的模型，其中T细胞来源于健康供体。然而，关键的挑战是如何在治疗过程中有效消除由于
组织不相容性而引发的移植物抗宿主病(GvHD)。TCR是参与响应抗原呈递的T细胞活化的细胞表面受体。人中95％的T细胞具有由α(α)链和β(β)链组成的TCR。TCRα和TCRβ链组合形成异二聚体并与CD3亚基缔合形成存在于细胞表面上的TCR复合物。当供体的T细胞通过TCR识别非自身MHC分子并将宿主(移植受者)组织视为具有抗原性的外来组织并攻击它们时，就会发生GvHD。为了消除供体T细胞的内源性TCR从而防止GvHD，人们一直在使用基因编辑技术，诸如锌指核酸酶(ZFN)、转录激活因子样效应子核酸酶(TALEN)和成簇规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)
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CRISPR相关(Cas)(CRISPR/Cas)进行内源性TCRα或TCRβ基因敲除(KO)，然后富集TCR阴性T细胞用于同种异体CAR
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T或TCR
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T生产。然而，TCR缺失可导致CD3下游信号转导途径受损，影响T细胞扩增。
[0009]本文所参考的所有出版物、专利、专利申请和公布的专利申请的公开内容据此通过引用以其整体并入本文。

技术实现思路

[0010]本专利技术一方面提供了经修饰的T细胞(例如，同种异体T细胞)，其包含：功能性外源受体，所述功能性外源受体包含：(a)胞外配体结合结构域，(b)跨膜结构域(例如，源自CD8α)，和(c)包含嵌合信号传导结构域(CMSD)的胞内信号传导结构域(ISD)，其中CMSD包含一个或多个ITAM(“CMSD ITAM”)，其中多个CMSD ITAM任选地由一个或多个接头(“CMSD接头”)连接。在一些实施方案中，CMSD包括选自由以下组成的组的特征中的一种或多种特征：(a)多个(例如，2个、3个、4个或更多个)CMSD ITAM彼此直接连接；(b)CMSD包含两个或更多个(例加，2个、3个、4个或更多个)CMSD ITAM，它们通过一个或多个不是源自含ITAM母体分子的接头(例如，G/S接头)连接；(c)CMSD包含一个或多个源自含ITAM母体分子的CMSD接头，所述含ITAM母体分子不同于CMSD ITAM中的一个或多个所源自的含ITAM母体分子；(d)CMSD包括两个或更多(例如，2个、3个、4个或更多个)相同的CMSD ITAM；(e)CMSD ITAM中的至少一个不源自CD3ζ；(f)CMSD ITAM中的至少一个不是CD3ζ的ITAM1或ITAM2；(g)多个CMSD ITAM各自源自不同的含ITAM母体分子；和/或(h)CMSD ITAM中的至少一种源自含ITAM母体分子，所述含ITAM母体分子选自由以下组成的组：CD3ε、CD3δ、CD3γ、Igα(CD79a)、Igβ(CD79b)、FcεRIβ、FcεRIγ、DAP12、CNAIP/NFAM1、STAM
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1、STAM
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2和膜突蛋白。在一些实施方案中，CMSD基本上由一个CMSD ITAM组成(例如，由其组成)。在一些实施方案中，CMSD基本上由(例如，由)一个CMSD ITAM和与含ITAM母体分子异源的CMSD N端序列和/或CMSD C端序列(例如，G/S接头)组成。在一些实施方案中，多个(例如，2个、3个、4个或更多个)CMSD ITAM彼此直接连接。在一些实施方案中，CMSD包含通过一个或多个不源自含ITAM母体分子的接头(例如，G/S接头)连接的两个或更多个(例如，2个、3个、4个或更多个)CMSD ITAM。在一些实施方案中，CMSD包含一个或多个源自含ITAM母体分子的CMSD接头，所述含ITAM母体分子不同于CMSD ITAM中的一个或多个所源自的含ITAM母体分子。在一些实施方案中，CMSD包含两个或更多个(例如，2个、3个、4个本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种经修饰的T细胞，其包含：功能性外源受体，所述功能性外源受体包含：(a)胞外配体结合结构域，(b)跨膜结构域，和(c)包含嵌合信号传导结构域(“CMSD”)的胞内信号传导结构域(“ISD”)，其中所述CMSD包含一个或多个基于免疫受体酪氨酸的激活基序(“CMSD ITAM”)，其中所述多种CMSD ITAM任选地通过一种或多种接头(“CMSD接头”)连接。2.如权利要求1所的经修饰的T细胞，其中：(a)所述多个CMSD ITAM彼此直接连接；(b)所述CMSD包含通过一个或多个不源自含ITAM母体分子的CMSD接头连接的两个或更多个CMSD ITAM；(c)所述CMSD包含一个或多个源自含ITAM母体分子的CMSD接头，所述含ITAM母体分子不同于所述CMSD ITAM中的一个或多个所源自的含ITAM母体分子；(d)所述CMSD包含两个或更多个相同的CMSD ITAM；(e)所述CMSD ITAM中的至少一个不源自CD3ζ；(f)所述CMSD ITAM中的至少一个不是CD3ζ的ITAM1或ITAM2；(g)所述多个CMSD ITAM各自源自不同的含ITAM母体分子；并且/或着(h)所述CMSD ITAM中的至少一个源自含ITAM母体分子，所述含ITAM母体分子选自由以下组成的组：CD3ε、CD3δ、CD3γ、Igα(CD79a)、Igβ(CD79b)、FcεRIβ、FcεRIγ、DAP12、CNAIP/NFAM1、STAM
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1、STAM
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2和膜突蛋白。3.如权利要求1所述的经修饰的T细胞，其中所述CMSD ITAM中的至少一个源自含ITAM母体分子，所述含ITAM母体分子选自由以下组成的组：CD3ε、CD3δ、CD3γ、CD3ζ、Igα(CD79a)、Igβ(CD79b)、FcεRIβ、FcεRIγ、DAP12、CNAIP/NFAM1、STAM
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1、STAM
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2和膜突蛋白。4.如权利要求1
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3中任一项所述的经修饰的T细胞，其中所述CMSD不包含CD3ζ的ITAM1和/或ITAM2。5.如权利要求1
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4中任一项所述的经修饰的T细胞，其中所述CMSD包含CD3ζ的ITAM3。6.如权利要求1
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5中任一项所述的经修饰的T细胞，其中所述CMSD ITAM中的至少两个源自相同的含ITAM母体分子。7.如权利要求6所述的经修饰的T细胞，其中所述CMSD ITAM中的至少两个彼此相同。8.如权利要求1
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6中任一项所述的经修饰的T细胞，其中所述CMSD ITAM中的至少两个彼此不同。9.如权利要求8所述的经修饰的T细胞，其中所述两种不同的CMSD ITAM各自源自不同的含ITAM母体分子。10.如权利要求1
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9中任一项所述的经修饰的T细胞，其中所述CMSD接头中的至少一个源自CD3ζ。11.如权利要求1
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10中任一项所述的经修饰的T细胞，其中所述CMSD接头中的至少一个与含ITAM母体分子是异源的。12.如权利要求1
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11中任一项所述的经修饰的T细胞，其中所述CMSD还包含位于最C端CMSDITAM的C端的C端序列(“CMSD C端序列”)。
13.如权利要求1
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12中任一项所述的经修饰的T细胞，其中所述CMSD还包含位于最N端CMSDITAM的N端的N端序列(“CMSD N端序列”)。14.如权利要求1
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13中任一项所述的经修饰的T细胞，其中所述一个或多个CMSD接头、所述CMSD C端序列和/或所述CMSD N端序列独立地选自SEQ ID NO：17
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39和116
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120组成的组。15.如权利要求1至14中任一项所述的经修饰的T细胞，其中所述功能性外源受体是ITAM修饰的T细胞受体(TCR)、ITAM修饰的嵌合抗原受体(CAR)、ITAM修饰的嵌合TCR(cTCR)或ITAM修饰的T细胞抗原偶联剂(TAC)样嵌合受体。16.如权利要求15所述的经修饰的T细胞，其中所述功能性外源受体是ITAM修饰的CAR。17.如权利要求16所述的经修饰的T细胞，其中所述跨膜结构域源自CD8α。18.如权利要求16或17所述的经修饰的T细胞，其中所述ISD还包含共刺激信号传导结构域。19.如权利要求18所述的经修饰的T细胞，其中所述共刺激信号传导结构域源自CD137(4
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1BB)或CD28。20.如权利要求18或19所述的经修饰的T细胞，其中所述共刺激信号传导结构域包含SEQ ID NO：124的氨基酸序列。21.如权利要求18
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20中任一项所述的经修饰的T细胞，其中所述共刺激结构域在所述CMSD的N端。22.如权利要求18
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20中任一项所述的经修饰的T细胞，其中所述共刺激结构域在所述CMSD的C端。23.如权利要求15的经修饰的T细胞，其中所述功能性外源受体是ITAM修饰的cTCR。24.如权利要求23所述的经修饰的T细胞，其中所述ITAM修饰的cTCR包含：(a)胞外配体结合结构域，(b)任选的受体结构域接头，(c)第一TCR亚基的任选的胞外结构域或其部分，(d)包含第二TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，和(e)包含所述CMSD的ISD，其中所述第一和第二TCR亚基选自由以下组成的组：TCRα、TCRβ、TCRγ、TCRδ、CD3ε、CD3γ和CD3δ。25.如权利要求24所述的经修饰的T细胞，其中所述第一和第二TCR亚基均为CD3ε。26.如权利要求24或25所述的经修饰的T细胞，其中所述一种或多种CMSD ITAM源自CD3ε、CD3δ和CD3γ中的一种或多种。27.如权利要求15所述的经修饰的T细胞，其中所述功能性外源受体是IT...

【专利技术属性】
技术研发人员：范晓虎，赵云程，王冰，俞大伟，黄鑫，王平艳，庄秋传，
申请(专利权)人：南京传奇生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：