植物乳杆菌L168辅助索拉非尼治疗肝癌的用途制造技术

本发明专利技术公开了植物乳杆菌L168辅助索拉非尼治疗肝癌的用途。植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)L168联合索拉非尼在制备治疗肝癌的药物中的应用。本菌株单菌可辅助索拉非尼治疗肝癌，显著抑制肝癌的进展，并且还有缓解索拉非尼造成的结肠炎症等副作用，并具有改善肠道菌群结构及短链脂肪酸水平等多种功能和用途。途。途。

【技术实现步骤摘要】
植物乳杆菌L168辅助索拉非尼治疗肝癌的用途


[0001]本专利技术涉及微生物
，尤其是涉及植物乳杆菌L168辅助索拉非尼治疗肝癌的用途。

技术介绍

[0002]肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)占原发性肝癌病理类型的90％，是男性恶性肿瘤的第二大死因，在我国，每年增加的肝癌患者约占全球新增病例的一半，死亡率也在逐年升高，形势较为严峻。阶段肝癌的治疗方法主要包括手术、药物、放化疗等，但疗效较差，肝癌进展迅速、转移性强导致手术治疗很难实施，即使可以采取手术切除，术后五年的复发率高达70％，五年生存率仅10％，因此，临床迫切需要更有效的治疗策略来延长中晚期肝癌患者的生存时间并改善其生存质量。近年来，大量研究表明肠道微生态失衡与肝癌发生发展密切相关，因此维持肠道菌群稳定对防治肝癌具有重要的意义。肠道和肝脏通过胆汁酸肠肝循环及门静脉循环紧密地联系起来，因此益生菌在治疗肝脏疾病中发挥重要作用。
[0003]根据《原发性肝癌诊疗规范(2019年版)》推荐，索拉非尼(sorafenib)作为一种靶向药对于不同国家地区、不同肝病背景的晚期肝癌病人都具有一定的生存获益，因此索拉非尼被推荐作为肝癌的一线治疗用药应用于临床治疗。但根据临床病例统计分析，索拉非尼的客观缓解率仅有5％，且索拉非尼副作用强烈，包括腹泻、体质量下降、手足综合征、皮疹、心肌缺血以及高血压等给，因此提高索拉非尼的疗效、减轻其带来的副作用对临床使用索拉非尼意义重大。
[0004]植物乳杆菌是乳酸菌的一种，已有文献资料表明植物乳杆菌在结直肠癌、骨肉瘤小鼠模型中显示出良好的治疗效果，但在肝癌中暂无相关文献报道。
[0005]铁死亡是2012年由Dixon发现的一种特征为致死性脂质和活性氧(ROS)的大量铁依赖性积累的不同于凋亡、坏死、自噬的新型细胞死亡方式。近年来，有研究报道，索拉非尼可以通过诱导肝癌细胞发生铁死亡。索拉非尼抑制system xc
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，导致内质网应激，GSH耗竭和脂质ROS铁依赖性的积累。另外，索拉菲尼会激活p62
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Keap1
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NRF2通路，使得NRF2增多，这又会导致GSH的增多，这一过程会衰减铁死亡的发生。有文献报道微生物源性的葡萄球菌超级抗原样蛋白6(SSL6)增强肝细胞癌(HCC)细胞对索拉非尼(SFN)敏感性的潜在机制，为索拉非尼与肠道微生物联合应用提供了理论依据。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是针对现有技术存在的上述不足，提供了一种植物乳杆菌L168及其用途。
[0007]本专利技术的目的可通过以下技术方案实现：
[0008]植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)L168联合索拉非尼在制备治疗肝癌的药物中的应用,所述的植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)L168保藏于中国微生物菌种
保藏管理委员会普通微生物中心,保藏日期为2017年2月13日,保藏编号为CGMCC No.13660。
[0009]一种药物组合物，由保藏编号为CGMCC No.13660的植物乳杆菌L168菌剂与索拉非尼组成。
[0010]有益效果：
[0011]植物乳杆菌L168单菌可辅助索拉非尼治疗肝癌，显著抑制肝癌的进展，联合索拉非尼治疗后进一步促进了肝癌细胞的铁死亡，抑制肝癌的进展，还有缓解索拉非尼造成的结肠炎症等副作用，并具有改善肠道菌群结构等多种功能和用途。
附图说明
[0012]图1：各组小鼠处死后肝脏情况
[0013]图2：各组小鼠肝脏结节数(A)、肝脏重量(B)及肝脏指数(C)
[0014]图3：各组小鼠肝脏组织HE染色：A为肝癌模型对照组B为索拉非尼单独治疗组C为索拉非尼与本专利技术菌株联合治疗组
[0015]图4：各组小鼠结直肠长度
[0016]图5:各组小鼠结肠组织切片HE染色：A为肝癌模型对照组B为索拉非尼单独治疗组C为索拉非尼与本专利技术菌株联合治疗组
[0017]图6：各组小鼠肠组织病理评分
[0018]图7：各组小鼠肝脏组织中总铁(A)、二价铁离子(B)、三价铁离子(C)表达情况
[0019]图8：A图为小鼠肠道菌群α多样性，B图为小鼠肠道菌群β多样性
[0020]生物材料保藏信息
[0021]植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)L168保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所,保藏日期为2017年2月13日,保藏编号为CGMCC No.13660。
具体实施方式
[0022]实施例1植物乳杆菌L168菌液的制备方法
[0023]配制MRS培养基：称酪蛋白胨10.0克，牛肉浸取物10.0克，酵母提取液5.0克，葡萄糖5.0克，乙酸钠5.0克，柠檬酸二胺2.0克，吐温80 1.0克，磷酸氢二钾2.0克，七水硫酸镁0.2克，七水硫酸锰0.05克，碳酸钙20.0克，蒸馏水1.0升，pH 6.8。按1：500比例将菌种种于MRS液体培养基中，于37℃厌氧培养箱培养，根据细菌吸光度(OD600)及细菌平板计数，确定细菌浓度。培养至对数期末期，取出菌液，12000rpm/min离心15
‑
20min，用PBS洗涤2
‑
3次后，用PBS将浓度调整至1x10
9 CFU/ml用于小鼠灌胃。
[0024]实施例2植物乳杆菌L168可促进索拉非尼对肝癌的杀伤作用
[0025]通过给C57BL/6小鼠腹腔注射DEN、CCL4构建原发性肝癌小鼠模型，造模过程中给小鼠灌胃本专利技术菌液及索拉非尼，分析动物体重、肿瘤重量及体积等指标，化学HCC模型随机分为3组：肝癌模型对照组、索拉非尼单独治疗组及索拉非尼本专利技术菌株联合治疗组，每组含小鼠10只。
[0026]肝癌化学模型小鼠出生14天，按体重腹腔注射DEN试剂，25mg/kg，出生第四周开始
每周腹腔注射浓度为20％的CCL4试剂一次，5ul/g，连续注射16周。造模过程中，化学模型对照组小鼠自出生后第14周开始每两天喂200ulPBS，索拉非尼本专利技术菌株联合治疗组小鼠自出生后第14周开始每两天喂200ul浓度为109CFU/mL的本专利技术菌株悬液(PBS配制)，第16周索拉非尼单独治疗组及联合治疗组小鼠开始灌胃索拉非尼，30mg/Kg，连续灌胃15天。
[0027]造模结束后，取小鼠的血清、肝脏、结直肠、脾脏。其中，计算肝癌化学模型小鼠肝脏表面结节个数，统计小鼠肝脏重量、结直肠长度、脾脏重量。同时取结肠组织、肝脏进行石蜡切片操作并进行常规H&E染色。
[0028]结果如图1
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2所示，通过对比肝癌模型对照组、索拉非尼单独治疗组及索拉非尼本专利技术菌株联合治疗组可以看出，本专利技术菌株与索拉非尼的联合治疗组可以显著减少肿瘤结本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)L168联合索拉非尼在制备治疗肝癌的药物中的应用,所述的植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)L168保藏于中国微生物菌种保藏管理...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘星吟，王静静，季国忠，张雪梅，
申请(专利权)人：南京医科大学，
类型：发明
国别省市：