人工合成mRNA及其利用制造技术

本发明专利技术提供一种提高mRNA的翻译效率的技术。mRNA具有编码蛋白质的mRNA的5

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】人工合成mRNA及其利用


[0001]本专利技术涉及人工合成mRNA及其利用。本申请要求2019年10月17日提出的日本专利申请第2019
‑
189929号的优先权，并将该专利申请的全部内容结合与此作为参考。

技术介绍

[0002]迄今为止，基因治疗以病毒等的DNA为载体来实施，但仍然存在由于转入到基因组中而导致的致癌等危险性大的问题。另一方面，mRNA与DNA不同，其作为没有向基因组中插入等风险的安全的核酸药物而受到关注，但被指出了RNA本来具有的不稳定性和翻译效率低的缺点(例如，专利文献1至专利文献3)。
[0003]在专利文献1中，作为通过阐明mRNA在细胞内的分解机理来抑制该机理产生的技术，公开了在目标基因的mRNA中使用2'
‑5′‑
寡腺苷酸合成酶的功能抑制物质的方法。
[0004]现有技术文献
[0005]专利文献
[0006]专利文献1：日本特开2018
‑
74954号公报
[0007]专利文献2：日本特开2015
‑
221026号公报
[0008]专利文献3：日本特开2015
‑
226531号公报

技术实现思路

[0009]专利技术欲解决的技术问题
[0010]的确是，根据专利文献1所记载的技术，RNA本来具有的不稳定性得以改善。但是，对于提高mRNA的翻译效率，尚有改善的余地。
[0011]因此，本专利技术人等进行了深入研究，至此专利技术了提高mRNA的翻译效率的方法。
[0012]用于解决问题的技术手段
[0013]本专利技术是为了解决上述课题而完成的，能够通过以下方式来实现。
[0014](1)根据本专利技术的一个方式，能够提供人工合成mRNA。该人工合成mRNA具有：mRNA的5
′
非翻译区，其对蛋白质进行编码；以及mRNA的3
′
非翻译区，其与所述5
′
非翻译区的互补性为40％以上且80％以下。
[0015](2)在上述的人工合成mRNA中，也可以是，所述蛋白质选自由甘油醛
‑3‑
磷酸脱氢酶、β
‑
珠蛋白、RPS8和LDHB组成的组。
[0016](3)在上述的人工合成mRNA中，也可以是，所述3
′
非翻译区与所述5
′
非翻译区的互补性为50％以上且75％以下。
[0017](4)根据本专利技术的其他方式，提供一种包括将上述的人工合成mRNA导入细胞的工序的方法。
[0018](5)根据本专利技术的其他方式，提供一种被导入有上述人工合成mRNA的细胞。
[0019](6)根据本专利技术的其他方式，提供一种人工合成mRNA的制造方法。该人工合成mRNA的制造方法包括制备人工合成mRNA的工序，所述人工合成mRNA具有编码蛋白质的mRNA的5
′
非翻译区、和与所述5
′
非翻译区的互补性为40％以上且80％以下的3
′
非翻译区。
[0020](7)根据本专利技术的其他方式，提供人工合成mRNA。该人工合成mRNA具有：mRNA的5
′
非翻译区，所述5
′
非翻译区对甘油醛
‑3‑
磷酸脱氢酶进行编码；以及mRNA的3
′
非翻译区，所述3
′
非翻译区对甘油醛
‑3‑
磷酸脱氢酶进行编码。
[0021](8)根据本专利技术的其他方式，提供一种人工合成mRNA的制造方法。该人工合成mRNA的制造方法包括制备mRNA的工序，所述mRNA具有对甘油醛
‑3‑
磷酸脱氢酶进行编码的mRNA的5
′
非翻译区、以及对甘油醛
‑3‑
磷酸脱氢酶进行编码的mRNA的3
′
非翻译区。
[0022](9)根据本专利技术的其他方式，提供一种包括将上述(7)的人工合成mRNA导入细胞的工序的方法。
[0023](10)根据本专利技术的其他方式，提供一种被导入有上述(7)的人工合成mRNA的细胞。
附图说明
[0024][图1]是表示制作出的人工合成mRNA的图。
[0025][图2]是表示测定根据人工合成mRNA的蛋白质表达量的结果图。
[0026][图3]是表示图1所示的人工合成mRNA的稳定性的图。
[0027][图4]是表示制作出的人工合成mRNA的图。
[0028][图5]是表示每个人工合成mRNA的表达量的图。
[0029][图6]是表示将人工合成mRNA导入至来自肾脏的HEK293细胞后的每个人工合成mRNA的表达量的图。
[0030][图7]是表示制作出的人工合成mRNA的图。
[0031][图8]是表示由于GAPDH的UTR序列的有无而引起的表达量差异的图。
[0032][图9]是表示由于LDHB的UTR序列的有无而引起的表达量差异的图。
[0033][图10]是表示由于ACAT2的UTR序列的有无而引起的表达量差异的图。
[0034][图11]是表示制作出的人工合成mRNA的图。
[0035][图12]是表示由于有无GAPDH的5
′
UTR序列缺失而引起的表达量差异的图。
[0036][图13]是表示制作出的人工合成mRNA的图。
[0037][图14]是表示由于有无GAPDH的3
′
UTR序列缺失而引起的表达量差异的图。
[0038][图15]是表示制作出的人工合成mRNA的图。
[0039][图16]是表示由于5
′
UTR 28nt和3
′
UTR 28nt的有无而引起的表达量差异的图。
[0040][图17]是表示制作出的人工合成mRNA的图。
[0041][图18]是表示由于互补性而引起的表达量差异的图。
[0042][图19]是表示制作出的人工合成mRNA的图。
[0043][图20]是表示由于互补性而引起的表达量差异的图。
[0044][图21]是表示制作出的人工合成mRNA的图。
[0045][图22]是表示使用了抑癌基因p53时的表达量差异的图。
[0046][图23]是用于说明所得到的效果的推测机理的图。
[0047][图24]是表示使用了基因组编辑基因hCas9时的表达量差异的图。
[0048][图25]是表示使用了基因组编辑基因hCas9时的基因组编辑量差异的图。
[0049][图26]是表示使用了β
‑
珠蛋白(β
‑
globin)的5
′
UTR时的表达量差异的图。
[0050][图27]是表示使用了RPS8的5
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种人工合成mRNA，其特征在于，具有：mRNA的5
′
非翻译区，所述5
′
非翻译区对蛋白质进行编码；以及mRNA的3
′
非翻译区，所述3
′
非翻译区与所述5
′
非翻译区的互补性为40％以上且80％以下。2.根据权利要求1所述的人工合成mRNA，其特征在于，所述蛋白质选自由甘油醛
‑3‑
磷酸脱氢酶、β
‑
珠蛋白、RPS8和LDHB组成的组。3.根据权利要求1或2所述的人工合成mRNA，其特征在于，所述3
′
非翻译区与所述5
′
非翻译区的互补性为50％以上且75％以下。4.一种方法，其包括将权利要求1至3中任一项所述的人工合成mRNA导入细胞的工序。5.一种细胞，其被导入有权利要求1至3中任一项所述的人工合成mRNA。6.一种人工合成mRNA的制造方法，其包括：制备人工合成mRNA的工序，所述人工合成mRNA具有编码蛋白质的mRNA的5

【专利技术属性】
技术研发人员：星野真一，细田直，
申请(专利权)人：公立大学法人名古屋市立大学，
类型：发明
国别省市：