一种低共熔溶剂提取，动态轴向色谱制备羟基山椒素方法技术

本发明专利技术为一种低共熔溶剂提取，动态轴向色谱制备羟基山椒素方法，属于天然产物提取领域。该方法包括以下步骤：S1，以超临界CO2萃取藤椒油为原料，加入低共熔溶剂进行超声辅助提取，萃取完成后离心，收集下层DES层，得到羟基山椒素类化合物DES提取液；所得提取液经有机溶剂反萃取法，回收羟基山椒素类成分，得到羟基山椒素类成分富集产物；S2，动态轴向制备色谱分离纯化：羟基山椒素类成分富集产物用1

【技术实现步骤摘要】
一种低共熔溶剂提取，动态轴向色谱制备羟基山椒素方法


[0001]本专利技术为一种低共熔溶剂提取，动态轴向色谱制备羟基山椒素方法，属于天然产物提取领域。

技术介绍

[0002]藤椒(竹叶花椒，Zanthoxylum armatum DC)是中国传统药食两用资源，气味清香、柔和、无刺激和苦涩味。研究表明，山椒素及其由烷基不饱和度差异或碳链氧化引起结构变化的酰胺类同系物被视为藤椒麻味物质基础，也是重要品质保障，以羟基
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α
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山椒素、羟基
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β
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山椒素，羟基
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γ
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山椒素，羟基
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ε
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山椒素为主，可能通过激活瞬时受体电位(transient receptor potential,TRP)V1和TRPA1或阻断离子通道引发辛麻感，同时具有麻醉镇痛、消炎、保护肠道等功能。然而，该类化合物结构不稳定，在空气中极易发生异构化、水解和氧化，导致高纯度山椒素类的大规模制备存在技术瓶颈。目前国内外尚未建立花椒/藤椒麻味评价及适用于工业生产的麻味物质提取的标准方法，导致花椒和藤椒原料及其制品的质量良莠不齐，严重影响消费者的利益和市场有效监管。
[0003]中国专利CN102771747B，CN102690208A，CN105237430A公布的山椒素类化合物的制备工艺包括，利用有机溶剂或超临界CO2等对花椒/藤椒样品进行提取，进而采用硅胶、凝胶色谱纯化，收集不同洗脱条件下的馏分，进而利用制备型薄层色谱、制备/半制备型HPLC等仪器得到较高纯度单体，制备过程繁琐复杂，制备量小，效率低，因此，研究一种能够从藤椒中快速、宏量提取制备出多种高纯度单体的制备工艺具有重大的科学意义和工程应用价值。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于针对现有技术的不足，提供一种低共熔溶剂提取，动态轴向色谱制备羟基山椒素方法，该方法是一种基于绿色新型低共熔溶剂提取，工业级快速制备高纯度羟基山椒素类化合物的方法，为藤椒麻味成分分析和质量评价提供对照品。
[0005]本专利技术的目的通过下述技术方案来实现：
[0006]一种工业级快速制备高纯度山椒素类化合物的方法，包括以下步骤：
[0007]S1，以超临界CO2萃取藤椒油为原料，加入低共熔溶剂(DES)，超声辅助提取，萃取完成后离心，收集下层DES层，得到羟基山椒素类成分DES提取液；所得提取液经有机溶剂反萃取法，回收羟基山椒素类成分，得到羟基山椒素类成分富集产物。
[0008]作为优选，所述低共熔溶剂由如下方法制得，氢键供体与氢键受体按一定摩尔比比例混合，封口后置于80℃加热共溶至澄清，形成DES溶剂，常温下静置备用。
[0009]作为优选，所述氢键供体为氯化胆碱，氢键受体为甲酸、乙酸、乳酸中的一种，摩尔比为1:2。
[0010]作为优选，所述离心转速为4000r/mi，离心时间为10min。
[0011]作为优选，所述超声辅助的处理条件为料液比为1:5～1:10(w/v)，萃取功率为150
～200w，提取时间为0.5h。
[0012]作为优选，所述反萃取采用的有机溶剂为乙酸乙酯，料液比为1:5～1:10。
[0013]S2，动态轴向制备色谱分离纯化：山椒素类富集物用1
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3倍质量体积的流动相完全溶解，采用动态轴向压缩制备液相分离，流动相为甲醇和水，检测波长为254nm，根据不同保留时间收集目标成分，洗脱液经减压旋蒸浓缩，冷冻干燥后得到各单体化合物。
[0014]作为优选，所述动态轴向制备液相色谱中动态轴压缩柱填料选自Nucifera C18、Hedera ODS
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2、ACCHROM X5、ACCHROM C18PE中的一种或几种，专利技术人通过筛选可知，Nucifera C18、Hedera ODS
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2可实现羟基山椒素的有效分离。
[0015]十八烷基反向硅胶，硅胶的粒径为5～10μm，更优选为5μm；所述动态轴向压缩柱的规格优选50mm
×
250mm。
[0016]作为优选，所述流动相比例为甲醇：水＝65：35～85:15(v/v)。
[0017]作为优选，所述洗脱的流速为10
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40mL/min。
[0018]作为优选，所述进样液浓度为50～150mg/mL。
[0019]低共熔溶剂由氢键供体(如酰胺、羧酸和多元醇等化合物)和氢键受体(如季铵盐)通过氢键组合而成，具有显著低于各个组分纯物质的熔点，且绿色环保，无毒，原料成本低，溶剂可回收。本专利设计合成萃取效率更高的DESs，结合动态轴向制备色谱，实现藤椒中系列高纯度山椒素类化合物的大规模工业级制备。
[0020]与现有技术相比，本专利技术的积极效果体现在：
[0021](一)本专利技术以氯化胆碱和酸类混合制成DES溶剂，相较于已知萃取溶剂，显著提高了羟基山椒素类化合物的萃取率。
[0022](二)本专利技术首次采用低共熔溶剂萃取/纯化
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动态轴向压缩柱分离为核心的整套技术从藤椒油中同时分离羟基
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α
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山椒素、羟基
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β
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山椒素，羟基
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γ
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山椒素，羟基
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ε
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山椒素的方法，建立了一种从藤椒中提取、纯化、分离4种单体化合物的工艺路线，该工艺过程简单，不需要大量的纯化步骤，溶剂方便回收，纯度高，适合大批量工业化生产，具有很强的使用价值。
附图说明
[0023]图1为实施例1利用DAC进行分离的HPLC图谱，其中a，b，c，d依次代表了羟基
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α
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山椒素、羟基
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β
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山椒素，羟基
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γ
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山椒素，羟基
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ε
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山椒素。
[0024]图2为实施例1所制得的羟基
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α
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山椒素HPLC图谱，纯度为97.63％。
[0025]图3为实施例1所制得的羟基
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β
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山椒素HPLC图谱，纯度为99.96％。
[0026]图4为实施例1所制得的羟基
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γ
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山椒素HPLC图谱，纯度为98.57％。
[0027]图5为实施例1所制得的羟基
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ε
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山椒素HPLC图谱，纯度为100％。
具体实施方式
[0028]提供下述实施例是为了更好地进一步理解本专利技术，并不局限于所述最佳实施方式，不对本专利技术的内容和保护范围构成限制，任何人在本专利技术的启示下或是将本专利技术与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本专利技术相同或本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种工业级快速制备高纯度羟基山椒素类化合物的方法，其特征在于包括以下步骤：S1，以超临界CO2萃取藤椒油为原料，加入低共熔溶剂进行超声辅助提取，萃取完成后离心，收集下层DES层，得到山椒素类化合物DES提取液；所得提取液经有机溶剂反萃取法，回收羟基山椒素类成分，得到羟基山椒素类成分富集产物；S2，动态轴向制备色谱分离纯化：羟基山椒素类成分富集产物用1
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3倍质量体积的流动相完全溶解，采用动态轴向压缩制备液相分离，流动相为甲醇和水，检测波长为254nm，根据不同保留时间收集目标成分，洗脱液经减压旋蒸浓缩，冷冻干燥后得到各单体化合物。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述低共熔溶剂的制备方法为，将氢键供体与氢键受体按一定摩尔比混合，封口后置于60～80℃加热共溶至澄清，形成DES溶剂，常温下静置备用。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述氢键供体为氯化胆碱；氢键受体为甲酸、乙酸、乳酸中的任意一种。4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，氢键供体与...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵麟，王晗，朱翔，邸多隆，文成刚，裴栋，
申请(专利权)人：中国科学院兰州化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：