胆酸衍生物及其制备方法技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，尤其涉及控制血糖血脂等代谢异常的天然药物/药物前体的制备。本发明专利技术公开了一种胆酸衍生物，其具有如下化学结构式：其中，R为或或或或

【技术实现步骤摘要】
胆酸衍生物及其制备方法


[0001]本专利技术属于生物医药
，尤其涉及控制血糖血脂等代谢异常的天然药物/药物前体的制备。

技术介绍

[0002]近年来，随着人们生活方式的改变以及高脂高糖西方饮食的流行，高血糖、高血脂、非酒精性脂肪肝等常见的代谢类慢性疾病的患病率迅速上升，已经成为不可忽视的国民健康威胁。
[0003]由于多数代谢类疾病属于慢性病，具有服药周期长等特点，目前临床上常用的降血糖和血脂手段以口服药物为主，常用降糖药物包括磺脲类、双胍类口服药，降血脂主要用药为他汀类药物。这些药物的结构多数是人工合成的而非宿主体内天然存在的；且长期服用上述药物均会引起不同程度的副作用，例如双胍类药物会引起消化道异常反应，或者是乳酸中毒；长期服用他汀类药物会导致高血糖、认知障碍以及肝脏和肌肉损伤等。因此，如何寻找安全有效的天然产物进行高血糖高血脂等慢性代谢类疾病的长期用药开发，一直以来备受关注。

技术实现思路

[0004]本专利技术的第一目的是提供了胆酸衍生物，其具有如下化学结构式：
[0005][0006]其中，R为
[0007]本专利技术还提供了胆酸衍生物的制备方法，包括如下步骤：将SJ
‑
2菌株在改良GAM液体培养基中培养24
‑
48小时后得培养液；以体积比为1％
‑
5％的接种量将培养液接入改良GAM液体培养基培养24
‑
48小时后，进行厌氧条件下的离心、收菌得收集液；将收集液用发酵培养基重悬并将SJ/>‑
2菌在发酵培养基中的生物量调整到OD
600nm
约为1后得重悬液；在厌氧条件下，重悬液在37℃下培养12
‑
24小时之后离心收集上清得胆酸衍生物。
[0008]在本专利技术的具体实施方式中，所述改良GAM液体培养基的制备方法为：酪蛋白胨10
克，大豆蛋白胨3克，胰蛋白胨15克，消化血清13.5克，酵母提取物5克，牛肉粉2克，牛肝浸提物1.2克，葡萄糖3克，可溶性淀粉0.3克，L
‑
半胱氨酸盐酸盐0.5克，L
‑
精氨酸0.5克，L
‑
色氨酸0.3克，碳酸氢钠2克，磷酸二氢钾2.5克，NaCl 3克，巯基乙酸钠0.15克，乙酸钠2.46g，氯高铁血红素0.01g，刃天青0.001g，澄清瘤胃液10％(v/v)，加蒸馏水至1L，pH 7.2
±
0.1，115℃下高压灭菌25分钟。
[0009]在本专利技术的具体实施方式中，所述发酵培养基培养的制备方法是在改良GAM液体培养基中加入终浓度为1g/L胆酸盐溶液和终浓度为10mM的小分子酸混合液。
[0010]在本专利技术的具体实施方式中，所述小分子酸混合液的制备方法为：等摩尔比的乙酸、丙酸、丁酸和戊酸混合，pH调至7.0。
[0011]本专利技术提供的胆酸衍生物在制备抑制FXR激活的拮抗剂中、在制备降血糖药物中、在制备降血脂药物中和在制备治疗脂肪肝药物中都有较好的技术效果。
附图说明：
[0012]图1.SJ
‑
2菌落形态图。
[0013]图2.SJ
‑
2菌体形态图。
[0014]图3.SJ
‑
2生物转化产生的ACA化合物的LC
‑
MS检测结果图。
[0015]图4.液相色谱分离ACA化合物纯品的LC
‑
MS检测结果图。
[0016]图5.Ace
‑
CA 1
H NMR图。
[0017]图6.Ace
‑
CA 13
C NMR图。
[0018]图7.Pro
‑
CA 1
H NMR图。
[0019]图8.Pro
‑
CA 13
C NMR图。
[0020]图9.But
‑
CA 1
H NMR图。
[0021]图10.But
‑
CA 13
C NMR图。
[0022]图11.Val
‑
CA 1
H NMR图。
[0023]图12.Val
‑
CA 13
C NMR图。
[0024]图13.小鼠肝脏组织切片图。
具体实施方式：
[0025]实施例
[0026]1.发酵产ACA化合物的生产菌株的获得、培养与鉴定
[0027]生产菌株的获得、分离、鉴定：
[0028]菌种由专利专利技术人于2019年6月17日，从经由粪便供体本人签署知情同意书后提供的新鲜粪便中厌氧分离获得。
[0029]菌落形态：在改良GAM肉汤培养基中生长快，37℃厌氧条件下培养2
‑
3天，菌落直径1
‑
2mm，白色，光滑，无水溶性色素(图1)。透射电镜下，观察细胞形态为短杆状或梭状，长约1.2
‑
1.6微米，宽0.6
‑
0.8微米(图2)。
[0030]所述改良GAM肉汤培养基中每升包含：酪蛋白胨10克，大豆蛋白胨3克，胰蛋白胨15克，消化血清13.5克，酵母提取物5克，牛肉粉2克，牛肝浸提物1.2克，葡萄糖3克，可溶性淀粉0.3克，L
‑
半胱氨酸盐酸盐0.5克，L
‑
精氨酸0.5克，L
‑
色氨酸0.3克，碳酸氢钠2克，磷酸二
氢钾2.5克，NaCl 3克，巯基乙酸钠0.15克，乙酸钠2.46g，氯高铁血红素0.01g，刃天青0.001g，澄清瘤胃液10％(v/v)，加蒸馏水至1L，pH 7.2
±
0.1，115℃灭菌25分钟高压灭菌后使用。固体培养基需额外加入15g琼脂。
[0031]分子鉴定方法：
[0032]16S rRNA的全序列分析，鉴定分类命名为Christensenella minuta，对应的中文命名为小克里斯腾森氏菌，菌株命名为SJ
‑
2，该菌株已于2021年4月2日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称为：CGMCC)，保藏号为：CGMCC No.22122，保藏单位地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。即专利菌株保藏号为：CGMCC No.22122；与小克里斯藤森氏菌标注的16S rRAN序列同源性为99％，序列如序列表中SEQ ID NO.1所示。
[0033]菌种的培养与保存方法：
[0034]小克里斯滕森氏菌(Christensenella minuta)SJ
‑
2在加入10％澄清瘤胃液的改良GAM肉汤培养基中活化1次。然后以体积比为0.1％
‑
10％的接种量接入相同成分的改良GAM液体培养基中，37℃，厌氧培养1
‑
7天。
[0035]菌的长期保存本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.胆酸衍生物，其具有如下化学结构式：其中，R为2.权利要求1所述胆酸衍生物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将SJ
‑
2菌株在改良GAM液体培养基中培养24
‑
48小时后得培养液；以体积比为1％
‑
5％的接种量将培养液接入改良GAM液体培养基培养24
‑
48小时后，进行厌氧条件下的离心、收菌得收集液；将收集液用发酵培养基重悬并将SJ
‑
2菌在发酵培养基中的生物量调整到OD
600nm
约为1后得重悬液；在厌氧条件下，重悬液在37℃下培养12
‑
24小时之后离心收集上清得胆酸衍生物。3.依据权利要求2所述胆酸衍生物的制备方法，其特征在于，所述改良GAM液体培养基的制备方法为：酪蛋白胨10克，大豆蛋白胨3克，胰蛋白胨15克，消化血清13.5克，酵母提取物5克，牛肉粉2克，牛肝浸提物1.2克，葡萄糖3克，可...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘双江，刘畅，周楠，姜成英，杜梦璇，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：