本申请公开一种细胞产品的无菌检查验证方法，属于生物医药领域，具体包括如下步骤：(1)试验组：取供试品，每个滤筒过滤2管供试品，每管全量过滤；向滤筒内泵入150ml灭菌注射用水，使细胞充分裂解后过滤；(2)对照组；(3)阴性对照组；(4)菌液组：平皿计数所加的试验菌数；(5)培养：将试验组、对照组的培养基按照下表所示条件培养，观察并记录结果。判断依据：在规定的培养时内，与对照管比较，如含供试品各容器中的试验菌均生长良好，则说明供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，可照此检查方法和检查条件进行供试品的无菌检查。本发明专利技术解决了细胞制品采用薄膜过滤法进行方法验证时，滤膜孔径堵塞的问题。题。
【技术实现步骤摘要】
一种细胞产品的无菌检查验证方法
[0001]本申请属于生物医药
，尤其涉及一种细胞产品的无菌检查验证方法。
技术介绍
[0002]根据《中国药典》(2020年版)的要求，当建立药品的无菌检查方法时，应 进行方法验证，以证明所采用的方法适合于该药品的无菌检查。
[0003]在细胞培养过程中，会添加一定的庆大霉素等抗生素以抑制细菌生长；避免 细胞污染。因此，使用薄膜过滤法进行无菌检查，以消除细胞产品中的抑菌性， 具有一定的必要性。使用薄膜过滤法进行无菌检查方法验证时，由于细胞的直径 远大于滤膜孔径，因此过滤时，细胞会积压在滤膜上，造成孔径堵塞，无法过滤。
[0004]现有技术常通过直接接种法进行细胞产品的无菌检查，本专利通过薄膜过滤 法进行细胞产品的无菌检查，能够消除样本本身的抑菌性，并解决了过滤时滤膜 孔径堵塞的问题。
技术实现思路
[0005]本专利技术的目的在于提供一种细胞产品的无菌检查验证方法。本专利技术解决了细 胞制品采用薄膜过滤法进行方法验证时，滤膜孔径堵塞的问题。
[0006]为达到上述目的，本专利技术所采用的技术方案如下：
[0007]一种细胞产品的无菌检查验证方法，具体包括如下步骤：
[0008](1)试验组
[0009]取供试品，每个滤筒过滤2管供试品(3ml/管)，每管全量过滤；向滤筒内 泵入150ml灭菌注射用水，使细胞充分裂解后过滤；因为细胞充分裂解后过滤解 决了孔径堵塞的问题，无菌操作一套三联集菌培养器，过滤完成后，分別向3 个滤筒分别加入100ml的硫乙醇酸盐流体培养基，并向其中分别加入小于100cfu 的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌；
[0010]另取一套三联集菌培养器，过滤完成后，分别向3个滤筒内加入100ml的胰 酪大豆胨液体培养基，并向其中分别加入小于100cfu的枯草芽孢杆菌、白色念 珠菌、黑曲霉。
[0011](2)对照组
[0012]取两套三联集菌培养器，其中一套分別向3个滤筒内均加入100ml硫乙醇酸 盐流体培养基，并在每个滤筒内分别加入小于100cfu的金黄色葡萄球菌、大肠 埃希菌和生孢梭菌；
[0013]另一套分別向3个滤筒内均加入100ml胰酪大豆胨液体培养基，并在每个滤 筒内分别加入小于100cfu的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉菌；
[0014](3)阴性对照组
[0015]取2个滤筒，取灭菌水同法操作，过滤后分别加入100ml的硫乙醇酸盐流体 培养基和100ml的胰酪大豆胨液体培养基；
[0016](4)菌液组
[0017]平皿计数所加的试验菌数；
[0018](5)培养
[0019]将试验组、对照组的培养基按照下表所示条件培养，观察并记录结果。
[0020]在供试品制备时，将细胞溶解入灭菌注射用水中，细胞内外渗透压不同而引 起细胞很快溶胀，会使细胞快速裂解，从而防止过滤孔径堵塞。
[0021]作为优选，步骤(1)中，采用薄膜过滤法每个滤筒过滤2管供试品。
[0022]作为优选，步骤(1
‑
2)中，无菌操作的三联集菌培养器固定在集菌仪上。
[0023]作为优选，步骤(5)中，将试验组、对照组的培养基按照下表所示条件培 养不超过5天。
[0024]作为优选，步骤(1)
‑
(3)中，硫乙醇酸盐流体培养基的培养温度30
‑
35℃。
[0025]作为优选，步骤(1)
‑
(3)中，胰酪大豆胨液体培养基的培养温度20
‑
25℃。
[0026]作为优选，判断依据：在规定的培养时内，与对照管比较，如含供试品各容 器中的试验菌均生长良好，则说明供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用 或其抑菌作用可以忽略不计，可照此检查方法和检查条件进行供试品的无菌检查。
[0027]本专利技术有益效果：
[0028]现有技术常通过直接接种法进行细胞产品的无菌检查，本专利通过薄膜过滤 法进行细胞产品的无菌检查，能够消除样本本身的抑菌性，并解决了过滤时滤膜 孔径堵塞的问题。
具体实施方式
[0029]下面对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅 是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域技术人员在 没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。
[0030]如
技术介绍
部分介绍，在细胞培养过程中，会添加一定的庆大霉素等抗生素 以抑制细菌生长；避免细胞污染。因此，使用薄膜过滤法进行无菌检查，以消除 细胞产品中的抑菌性，具有一定的必要性。使用薄膜过滤法进行无菌检查方法验 证时，由于细胞的直径远大于滤膜孔径，因此过滤时，细胞会积压在滤膜上，造 成孔径堵塞，无法过滤。基于上述分析，本申请实施例提供一种细胞产品的无菌 检查验证方法。
[0031]下面对本申请实施例提供的一种细胞产品的无菌检查验证方法进行详细说 明。
[0032]实施例1，一种细胞产品的无菌检查验证方法，具体包括如下步骤：
[0033]1、试验组
[0034]无菌操作1套三联集菌培养器，将其固定在集菌仪上。取供试品，采用薄膜 过滤法每个滤筒过滤2管供试品，每管全量过滤。向滤筒内泵入150ml灭菌注射 用水，使细胞充分裂解后过滤；过滤完成后向3个滤筒分别加入100ml的硫乙醇 酸盐流体培养基，并向其中分别加入小于100cfu的金黄色葡萄球菌、大肠埃希 菌、生孢梭菌；
[0035]另取一套三联集菌培养器，按照上述步骤操作，过滤完成后，分别向3个滤 筒内加入100ml的胰酪大豆胨液体培养基，并向其中分别加入小于100cfu的枯 草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉。
[0036]2、对照组
[0037]取2套三联集菌培养器，其中一套3个滤筒内均加入100ml硫乙醇酸盐流体 培养基，并在每个滤筒内分别加入小于100cfu的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌 和生孢梭菌；
[0038]另一套3个滤筒内均加入100ml胰酪大豆胨液体培养基，并在每个滤筒内分别加 入小于100cfu的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉菌；
[0039]3、阴性对照组
[0040]取2个滤筒，取灭菌水同法操作，过滤后分别加入100ml的硫乙醇酸盐流 体培养基和100ml的胰酪大豆胨液体培养基。
[0041]4、菌液组
[0042]平皿计数所加的试验菌数。
[0043]5、培养：将试验组、对照组的培养基按照下表所示条件培养不超过5天，观 察并记录结果。
[0044]表验证试验菌及其培养条件
[0045][0046]6结论
[0047]通过对产品进行无菌检查方法适用性试验，与对照组比较，含供试品各容器 中的试验菌均生长良好，说明该检验量的供试品在该检验条件下无抑菌作用或其 抑菌作用可以忽略不计，可本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种细胞产品的无菌检查验证方法，其特征在于，具体包括如下步骤：(1)试验组取供试品，每个滤筒过滤2管供试品(3ml/管)，每管全量过滤；向滤筒内泵入150ml灭菌注射用水，使细胞充分裂解后过滤；无菌操作一套三联集菌培养器，过滤完成后，分別向3个滤筒分别加入100ml的硫乙醇酸盐流体培养基，并向其中分别加入小于100cfu的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌；另取一套三联集菌培养器，过滤完成后，分别向3个滤筒内加入100ml的胰酪大豆胨液体培养基，并向其中分别加入小于100cfu的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉。(2)对照组取两套三联集菌培养器，其中一套分別向3个滤筒内均加入100ml硫乙醇酸盐流体培养基，并在每个滤筒内分别加入小于100cfu的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和生孢梭菌；另一套分別向3个滤筒内均加入100ml胰酪大豆胨液体培养基，并在每个滤筒内分别加入小于100cfu的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉菌；(3)阴性对照组取2个滤筒，取灭菌水同法操作，过滤后分别加入100ml的硫乙醇酸盐流体培养基和100ml的胰酪大豆胨液体培养基；(4)菌液组平皿计数...
【专利技术属性】
技术研发人员：廉云飞，陆晓，张春娟，张万山，
申请(专利权)人：江苏拓弘康恒医药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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