嵌合抑制性受体制造技术

本文提供了嵌合抑制性受体构建体和包含嵌合抑制性受体构建体的组合物和细胞。还提供了使用嵌合抑制性受体构建体和包含嵌合抑制性受体构建体的组合物和细胞的方法。性受体构建体的组合物和细胞的方法。性受体构建体的组合物和细胞的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】嵌合抑制性受体
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年8月20日提交的美国临时申请号62/889,324的权益，其据此以引用的方式以其整体并入本文。
[0003]序列表
[0004]本申请含有序列表，所述序列表已经由EFS
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Web提交并且据此以引用的方式以其整体并入本文。20XX年XX月XX日创建的所述ASCII拷贝被命名为XXXXXUS_序列表.txt.，并且大小为X,XXX,XXX字节。

技术介绍

[0005]嵌合抗原受体(CAR)能够靶向免疫调节细胞如T细胞的体内活化。这些重组膜受体具有抗原结合结构域和一个或多个信号传导结构域(例如，T细胞活化结构域)。这些特殊受体允许T细胞识别肿瘤细胞上的特异性蛋白抗原并诱导T细胞活化和信号传导通路。用表达嵌合受体的T细胞的临床试验的最新结果已经为它们作为癌症免疫疗法的剂的效用提供了有力支持。然而，尽管有这些有希望的结果，仍鉴定出与CAR T细胞治疗相关的许多副作用，引起显著的安全性问题。一种副作用是来自TCR和CAR工程化的T细胞的“靶上但组织外”不良事件，其中CAR T细胞在靶肿瘤组织外与其配体结合并诱导免疫反应。因此，鉴定适当的CAR靶标的能力对于有效靶向和治疗肿瘤而不损伤表达相同靶抗原的正常细胞是重要的。调控对靶标的适当反应和减少脱靶副作用的能力在诸如TCR、工程化的TCR和嵌合TCR的其他免疫受体系统中也是重要的。
[0006]抑制性嵌合抗原受体(也称为iCAR)是在与靶细胞上的其同源配体结合后抑制或降低免疫调节细胞活性的蛋白质构建。目前的iCAR设计利用PD
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1细胞内结构域进行抑制，但已证明难以复制。因此，需要用于iCAR的替代性抑制性结构域。还需要用于免疫受体系统的适当的抑制性结构域、策略和构建体。

技术实现思路

[0007]在一些方面，本文提供了嵌合抑制性受体，其包括：细胞外配体结合结构域；包括跨膜结构域的膜定位结构域；和在靠近免疫受体时抑制免疫受体活化的酶抑制性结构域。
[0008]在其他方面，本文提供了编码至少一种本公开的嵌合抑制性受体的核酸。在一些实施方案中，编码至少一种嵌合抑制性受体的核酸是载体。
[0009]在其他方面，提供了基因工程化的细胞，其包含编码至少一种本公开的嵌合受体的核酸如载体或表达本公开的嵌合抑制性受体。在一些方面，提供了表达嵌合抑制性受体的基因工程化的细胞，其中嵌合抑制性受体包括：细胞外配体结合结构域；膜定位结构域，其中膜定位结构域包含跨膜结构域；和酶抑制性结构域，其中抑制性结构域在靠近免疫受体时抑制免疫受体活化。
[0010]在再其他方面，提供了用于抑制本公开的基因工程化的细胞中的免疫受体活化的方法。
[0011]在又其他方面，提供了用于利用本公开的基因工程化的细胞或药物组合物来降低免疫反应和/或治疗自身免疫性疾病的方法。
[0012]在其他方面，药物组合物包含本文提供的组合物中的任一种的工程化的细胞和药学上可接受的载剂、药学上可接受的赋形剂或其组合。
[0013]在一些实施方案中，细胞外配体结合结构域与选自以下的配体结合：蛋白质复合物、蛋白质、肽、受体结合结构域、核酸、小分子和化学剂。
[0014]在一些实施方案中，细胞外配体结合结构域包括抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，细胞外配体结合结构域包括F(ab)片段、F(ab')片段、单链可变片段(scFv)或单结构域抗体(sdAb)。
[0015]在这些实施方案中的一些中，配体是肿瘤相关抗原。在这些实施方案中的一些中，配体不在肿瘤细胞上表达。在这些实施方案中的一些中，配体在非肿瘤细胞上表达。在这些实施方案中的一些中，配体在健康组织的细胞上表达。
[0016]在一些实施方案中，细胞外配体结合结构域包括二聚化结构域。在一些实施方案中，配体还包括同源二聚化结构域。
[0017]在一些实施方案中，配体是细胞表面配体。在一些实施方案中，细胞表面配体在进一步表达免疫受体的同源配体的细胞上表达。
[0018]在一些实施方案中，本公开的嵌合受体的膜定位结构域还包括细胞外结构域的至少一部分。在一些实施方案中，膜定位结构域还包括细胞内结构域的至少一部分。在一些实施方案中，膜定位结构域还包括细胞外结构域的至少一部分和细胞内结构域的至少一部分。
[0019]在一些实施方案中，膜定位结构域包括选自由以下组成的组的跨膜结构域：LAX跨膜结构域、CD25跨膜结构域、CD7跨膜结构域、LAT跨膜结构域、来自LAT突变体的跨膜结构域、BTLA跨膜结构域、CD8跨膜结构域、CD28跨膜结构域、CD3ζ跨膜结构域、CD4跨膜结构域、4
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IBB跨膜结构域、OX40跨膜结构域、ICOS跨膜结构域、2B4跨膜结构域、PD
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1跨膜结构域、CTLA4跨膜结构域、BTLA跨膜结构域、TIM3跨膜结构域、LIR1跨膜结构域、NKG2A跨膜结构域、TIGIT跨膜结构域和LAG3跨膜结构域、LAIR1跨膜结构域、GRB
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2跨膜结构域、Dok
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1跨膜结构域、Dok
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2跨膜结构域、SLAP1跨膜结构域、SLAP2跨膜结构域、CD200R跨膜结构域、SIRPα跨膜结构域、HAVR跨膜结构域、GITR跨膜结构域、PD
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L1跨膜结构域、KIR2DL1跨膜结构域、KIR2DL2跨膜结构域、KIR2DL3跨膜结构域、KIR3DL1跨膜结构域、KIR3DL2跨膜结构域、CD94跨膜结构域、KLRG
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1跨膜结构域、PAG跨膜结构域、CD45跨膜结构域和CEACAM1跨膜结构域。在一些实施方案中，膜定位结构域还包括对应的细胞外结构域的至少一部分和/或对应的细胞内结构域的至少一部分。在一些实施方案中，LAT突变体是LAT(CA)突变体。
[0020]在一些实施方案中，膜定位结构域将嵌合抑制性受体引导和/或分离至细胞膜的结构域。在一些实施方案中，膜定位结构域将嵌合抑制性受体定位至脂筏或重脂筏。在一些实施方案中，膜定位结构域与定位在细胞膜的结构域中的一种或多种细胞膜组分相互作用。在一些实施方案中，膜定位结构域足以在不存在结合同源配体的细胞外配体结合结构域的情况下减轻由酶抑制性结构域对免疫受体活化的组成型抑制。
[0021]在一些实施方案中，膜定位结构域介导嵌合抑制性受体定位至细胞膜的结构域，所述细胞膜的结构域不同于在不存在结合同源配体的细胞外配体结合结构域的情况下由
免疫受体的一种或多种组分占据的细胞膜的结构域。
[0022]在一些实施方案中，膜定位结构域还包括近端蛋白片段。在一些实施方案中，膜定位结构域还包括一个或多个细胞内抑制性共信号传导结构域。在一些实施方案中，嵌合蛋白的一个或多个细胞内抑制性共信号传导结构域包括一个或多个含ITIM的蛋白或其片段。在一些实施方案中，一个或多个含ITIM的蛋白或其片段选自PD
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种嵌合抑制性受体，其包含：细胞外配体结合结构域；膜定位结构域，其中所述膜定位结构域包含跨膜结构域；和酶抑制性结构域，其中所述酶抑制性结构域在靠近免疫受体时抑制免疫受体活化。2.如权利要求1所述的嵌合抑制性受体，其中所述酶抑制性结构域包含酶催化结构域，并且其中所述酶催化结构域来自选自由以下组成的组的酶：CSK、SHP
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1、SHP
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2、PTEN、CD45、CD148、PTP
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MEG1、PTP
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PEST、c
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CBL、CBL
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b、PTPN22、LAR、PTPH1、SHIP
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1、ZAP70和RasGAP。3.如权利要求1或权利要求2所述的嵌合抑制性受体，其中所述酶抑制性结构域包含细胞外结构域、跨膜结构域和/或细胞内结构域的至少一部分。4.如权利要求1
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3中任一项所述的嵌合抑制性受体，其中所述细胞外配体结合结构域包含抗体或其抗原结合片段，任选地其中所述或抗原结合片段是F(ab)片段、F(ab')片段或单链可变片段(scFv)。5.如权利要求1
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4中任一项所述的嵌合抑制性受体，其中所述细胞外配体结合结构域与不在肿瘤细胞上表达的配体结合和/或所述配体在健康组织的细胞上表达。6.如权利要求1
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5中任一项所述的嵌合抑制性受体，其中所述细胞外配体结合结构域包含二聚化结构域，任选地其中所述配体还包含同源二聚化结构域。7.如权利要求1
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6中任一项所述的嵌合抑制性受体，其中所述膜定位结构域还包含细胞外结构域的至少一部分和/或细胞内结构域的至少一部分，并且任选地其中所述跨膜结构域选自由以下组成的组：LAX跨膜结构域、CD25跨膜结构域、CD7跨膜结构域、LAT跨膜结构域、来自LAT突变体的跨膜结构域、BTLA跨膜结构域、CD8跨膜结构域、CD28跨膜结构域、CD3ζ跨膜结构域、CD4跨膜结构域、4
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IBB跨膜结构域、OX40跨膜结构域、ICOS跨膜结构域、2B4跨膜结构域、PD
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1跨膜结构域、CTLA4跨膜结构域、BTLA跨膜结构域、TIM3跨膜结构域、LIR1跨膜结构域、NKG2A跨膜结构域、TIGIT跨膜结构域和LAG3跨膜结构域、LAIR1跨膜结构域、GRB
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2跨膜结构域、Dok
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1跨膜结构域、Dok
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2跨膜结构域、SLAP1跨膜结构域、SLAP2跨膜结构域、CD200R跨膜结构域、SIRPα跨膜结构域、HAVR跨膜结构域、GITR跨膜结构域、PD
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L1跨膜结构域、KIR2DL1跨膜结构域、KIR2DL2跨膜结构域、KIR2DL3跨膜结构域、KIR3DL1跨膜结构域、KIR3DL2跨膜结构域、CD94跨膜结构域、KLRG
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1跨膜结构域、PAG跨膜结构域、CD45跨膜结构域和CEACAM1跨膜结构域。8.如权利要求1
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7中任一项所述的嵌合抑制性受体，其中所述嵌合抑制性受体还包含一个或多个细胞内抑制性共信号传导结构域，任选地其中所述一个或多个细胞内抑制性共信号传导结构域包含一个或多个含ITIM的蛋白或其片段，所述含ITIM的蛋白或其片段选自由以下组成的组：PD
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1、CTLA4、TIGIT、BTLA和LAIR1；和/或所述一个或多个细胞内抑制性共信号传导结构域包含一个或多个非ITIM支架蛋白或其片段，所述非ITIM支架蛋白或其片段选自由以下组成的组：GRB
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2、Dok
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1、Dok
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2、SLAP1、SLAP2、LAG3、HAVR、GITR和PD
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L1。9.如权利要求1
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8中任一项所述的嵌合抑制性受体，其中所述细胞外配体结合结构域通过细胞外接头区连接至所述膜定位结构域，任选地其中所述细胞外接头区位于所述细胞外配体结合结构域与所述膜定位结构域之间，并且可操作地和/或物理上连接至所述细胞外配体结合结构域和所述膜定位结构域中的每一个，任选地其中所述细胞外接头区源自选自由以下组成的组的蛋白质：CD8α、CD4、CD7、CD28、IgG1、IgG4、FcγRIIIα、LNGFR和PDGFR，
或包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：GGS(SEQ ID NO:29)、GGSGGS(SEQ ID NO:30)、GGSGGSGGS(SEQ ID NO:31)、GGSGGSGGSGGS(SEQ ID NO:32)、GGSGGSGGSGGSGGS(SEQ ID NO:33)、GGGS(SEQ ID NO:34)、GGGSGGGS(SEQ ID NO:35)、GGGSGGGSGGGS(SEQ ID NO:36)、GGGSGGGSGGGSGGGS(SEQ ID NO:37)、GGGSGGGSGGGSGGGSGGGS(SEQ ID NO:38)、GGGGS(SEQ ID NO:39)、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO:40)、GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:41)、GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:42)、GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:43)、AAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP(SEQ ID NO:46)、ESKYGPPCPSCP(SEQ ID NO:47)、ESKYGPPAPSAP(SEQ ID NO:48)、ESKYGPPCPPCP(SEQ ID NO:49)、EPKSCDKTHTCP(SEQ ID NO:50)、AAAFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRN(SEQ ID NO:51)、TTTPAPRPPTPAPTIALQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD(SEQ ID NO:52)、ACPTGLYTHSGECCKACNLGEGVAQPCGANQTVCEPCLDSVTFSD...

【专利技术属性】
技术研发人员：N，
申请(专利权)人：森迪生物科学公司，
类型：发明
国别省市：