NKG2DCAR-免疫细胞在抗衰老中应用制造技术

本发明专利技术提供了一种靶向NKG2D配体的CAR

【技术实现步骤摘要】
NKG2D CAR
‑
免疫细胞在抗衰老中应用


[0001]本专利技术属于免疫细胞治疗或生物医药领域，具体涉及一种NKG2D CAR
‑
免疫细胞在抗衰老中的应用。

技术介绍

[0002]目前世界各国均面临着严重的人口老龄化，数据显示到2050年约三分之一的中国人口年龄将超过60岁。人口老龄化会带来各种各样的老年相关疾病，现有的医疗水平、医治能力尚不足以面对如此大规模的医疗需求，因此如何让老年人健康生活成了一项巨大挑战。大多数老年疾病如老年痴呆、骨质疏松、糖尿病、动脉粥样硬化、肾功能障碍等与机体的衰老有关，而从病理学上看，促进年龄相关慢性疾病发生的一个重要过程就是细胞衰老。
[0003]实验数据表明，清除衰老小鼠体内p16
Ink4a
阳性细胞可使衰老相关表型发生延迟，小鼠的寿命中位数提高24％，并且能够减轻年龄相关的多种器官功能退化，改善与年龄相关的脂肪营养不良、肝脏脂肪变性、心功能和骨质流失以及tau介导的神经退行性变。因此，清除衰老细胞是治疗和预防各种年龄相关疾病的一种重要手段。
[0004]目前，清除衰老细胞的方法主要集中在寻找能够选择性清除衰老细胞的小分子化合物方面，例如达沙替尼、槲皮素、ABT263等，但这些化合物或清除衰老细胞效果欠佳，或存在明显的毒副作用，不利于成药。例如ABT
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263可引起短暂性血小板减少症和中性粒细胞减少症；用UBX0101处理患有骨关节炎的小鼠，不能够挽回小鼠骨关节炎的病理特征，只是一些分子表达水平的改变从而将创造有利于修复损伤的外环境。
[0005]经过嵌合抗原受体(Chimeric Antigen Receptor，CAR)修饰的免疫细胞，可特异性地识别细胞相关抗原，从而靶向杀伤目标细胞，具有广阔的临床应用前景。例如靶向CD19的CAR
‑
T细胞对B细胞恶性肿瘤具有极佳的治疗效果，已被FDA批准上市。此外，大量经过CAR改造NK细胞目前正处于临床II期实验(NCT02742727，NCT02892695，NCT02944162，NCT03056339)。目前，也有研究表明表达HER2 CAR的巨噬细胞具有特异性吞噬肿瘤细胞的作用。鉴于CAR免疫细胞杀伤靶细胞的特异性、高效性和持续性，理应对衰老细胞的清除也有极佳的效果，然而，在针对抗衰老的研究领域，还没有效果较佳的CAR
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免疫细胞疗法。
[0006]因此，本领域迫切需要开发一种利用CAR
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免疫细胞技术来特异性地、高效地清除衰老细胞的方法。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的是提供一种利用CAR
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免疫细胞技术特异性地、高效地清除衰老细胞的方法。
[0008]在本专利技术的第一方面，提供了一种靶向NKG2D配体的CAR
‑
免疫细胞的用途，用于制备一药物，所述药物用于：
[0009](i)清除衰老细胞，其中，所述衰老细胞中的NKG2D配体较正常细胞上调2
‑
20倍，较佳地4
‑
15倍，更佳地10
‑
20倍；
[0010](ii)延缓个体衰老；和/或
[0011](iii)预防和/或治疗老年性疾病；
[0012]并且，所述靶向NKG2D配体的CAR
‑
免疫细胞中表达靶向NKG2D配体的嵌合抗原受体，所述的嵌合抗原受体中的抗原结合结构域包括氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的多肽，或与SEQ ID NO:1所示序列具有80％以上相似度并且可结合NKG2D配体的多肽。
[0013]在另一优选例中，所述的CAR
‑
免疫细胞选自下组：CAR
‑
T细胞、CAR
‑
NK细胞、CAR
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巨噬细胞。
[0014]在另一优选例中，所述的CAR
‑
免疫细胞是CAR
‑
T细胞。
[0015]在另一优选例中，所述的嵌合抗原受体具有如式I所示的结构，
[0016]L
‑
NKG2D
‑
H
‑
TM
‑
C
‑
CD3ζ
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
(式I)
[0017]式中，
[0018]L为无或信号肽序列；
[0019]NKG2D为如权利要求1所述的NKG2D配体结合结构域序列；
[0020]H为无或CD8α铰链区；
[0021]TM为人CD8α跨膜结构域；
[0022]C为4
‑
1BB或CD28共刺激信号分子；
[0023]CD3ζ为源于CD3ζ的胞浆信号传导序列；
[0024]各
“‑”
独立地表示连接上述各元件的连接肽或肽键。
[0025]在另一优选例中，所述信号肽序列的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
[0026]在另一优选例中，所述CD8α铰链区的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。
[0027]在另一优选例中，所述CD8α跨膜结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。
[0028]在另一优选例中，所述4
‑
1BB共刺激信号分子的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。
[0029]在另一优选例中，所述源于CD3ζ的胞浆信号传导序列的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示。
[0030]在另一优选例中，所述的嵌合抗原受体由强启动子EF1α驱动表达。
[0031]在另一优选例中，所述的衰老细胞的选自下组：肺细胞、脂肪细胞、肾细胞、肌肉细胞，或其组合。
[0032]在另一优选例中，所述的衰老细胞为人胚肺细胞IMR90。
[0033]在另一优选例中，所述的衰老细胞是自然的或人工诱导衰老的。
[0034]在另一优选例中，所述的人工诱导衰老方法包括：DNA损伤诱导衰老、过表达P16诱导衰老、致癌信号诱导衰老、端粒缩短诱导衰老，或其组合。
[0035]在另一优选例中，所述的人工诱导衰老的方法为用诱导剂DOX诱导衰老。
[0036]在另一优选例中，患有所述老年性疾病的个体中，含有衰老细胞，所述衰老细胞中的NKG2D配体较正常细胞上调2
‑
20倍，较佳地4
‑
15倍，更佳地10
‑
20倍
[0037]在另一优选例中，所述的老年性疾病选自下组：心衰、动脉粥样硬化、糖尿病、心肌肥厚、骨质疏松、组织/器官纤维化、阿尔茨海默病、帕金森综合征、关节炎等细胞衰老导致的器官退行性疾病，或其组合。
[0038]在本专利技术的第二方面，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括：
[0039](a)靶向NKG2D配体的CAR
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免疫细胞，其中，所述靶向NKG2D本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向NKG2D配体的CAR
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免疫细胞的用途，其特征在于，用于制备一药物，所述药物用于：(i)清除衰老细胞，其中，所述衰老细胞中的NKG2D配体较正常细胞上调2
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20倍，较佳地4
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15倍，更佳地10
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20倍；(ii)延缓个体衰老；和/或(iii)预防和/或治疗老年性疾病；并且，所述靶向NKG2D配体的CAR
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免疫细胞中表达靶向NKG2D配体的嵌合抗原受体，所述的嵌合抗原受体中的抗原结合结构域包括氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的多肽，或与SEQ ID NO:1所示序列具有80％以上相似度并且可结合NKG2D配体的多肽。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的嵌合抗原受体具有如式I所示的结构，L
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NKG2D
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H
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TM
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C
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CD3ζ
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
(式I)式中，L为无或信号肽序列；NKG2D为如权利要求1所述的NKG2D配体结合结构域序列；H为无或CD8α铰链区；TM为人CD8α跨膜结构域；C为4
‑
1BB或CD28共刺激信号分子；CD3ζ为源于CD3ζ的胞浆信号传导序列；各
“‑”
独立地表示连接上述各元件的连接肽或肽键。3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的嵌合抗原受体由强启动子EF1α驱动表达。4.如权利要求1所述的用途，...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵旭东，杨东，李仕容，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：